湖北產(chǎn)蜘蛛抱蛋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

左盛奇 劉呈雄 鄧張雙 程 凡 郭志勇 鄒 坤

(三峽大學(xué) 生物與制藥學(xué)院 天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 湖北 宜昌 443002)

蜘蛛抱蛋(AspidistraLuridaKer-Gawl)是百合科(Liliaceae)鈴蘭族(Convallariaceae)蜘蛛抱蛋屬(Aspidistra)多年生宿根草本植物，目前已知的有50余種[1]，曾以“蜘蛛抱蛋”之名收載于《中華本草》、《中國植物志》，別名蛇退、萬年青、一帆青、一葉蘭、粽粑葉、飛天蜈蚣、哈薩喇、竹葉伸筋、大九龍盤、竹葉盤、九龍盤、趕山鞭、蓼葉伸筋、大伸筋、搖邊竹、甘心蜈蚣、地蜈蚣、九節(jié)龍、一寸十八節(jié)、竹根七、土里蜈蚣、地雷公、入地蜈蚣、石上劍、山蜈蚣等，分布于越南北部，日本和我國云貴高原等地，且多數(shù)為我國主產(chǎn)，廣泛分布于長江以南地區(qū)．其根莖是一種傳統(tǒng)民間草藥，味苦，辛，性微溫，具有活血散瘀，消腫止痛，補(bǔ)虛止咳，滋陽補(bǔ)腎等功效，主治跌打損傷，風(fēng)濕筋骨痛，非虛咳嗽，咳血和毒蛇咬傷等癥[2]．目前，國內(nèi)云南、四川、廣西等產(chǎn)地的蜘蛛抱蛋均有其化學(xué)成分的研究報(bào)道，但產(chǎn)自湖北省的蜘蛛抱蛋藥材尚未有其化學(xué)成分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究的報(bào)道，基于2015年《湖北省中藥材及中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》項(xiàng)目，本課題組首次對(duì)湖北產(chǎn)蜘蛛抱蛋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)行了研究．

1 儀器與材料

低溫冷凍干燥機(jī)，美國Labconco公司；正相色譜硅膠，煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所；反相色譜硅膠，日本YMC公司；DYS-207顯微鏡，上海點(diǎn)應(yīng)光學(xué)儀器有限公司；展開缸10 cm×20 cm；高效液相用甲醇、乙腈均為色譜純，水為怡寶純凈水，其它試劑均為分析純．

蜘蛛抱蛋植株于2016年7～10月份采自湖北省各地(湖南吉首批次為采集對(duì)照批次)，經(jīng)三峽大學(xué)生物技術(shù)中心王玉兵副教授鑒定為(AspidistraluridaKer-Gawl)．植物標(biāo)本現(xiàn)保存于三峽大學(xué)天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室．

表1 蜘蛛抱蛋藥材產(chǎn)地和采摘日期

2 植物形態(tài)

蜘蛛抱蛋，多年生常綠草本，高達(dá)90 cm．地下根莖橫生，粗硬，肉質(zhì)，易折斷，外表棕色，有明顯節(jié)和鱗片，直徑5～10 mm，生有多數(shù)須根．葉單生；葉片革質(zhì)，從地下根莖上長出，直立；橢圓狀披針形或?qū)捙樞?，?.5～11 cm，先端急尖，基部狹窄，形成溝狀綠色的窄長葉柄；葉片綠色有光澤，常有少數(shù)大小不等的淡黃色斑跡，有多條明顯的平行脈．

圖1 蜘蛛抱蛋植株形態(tài)

3 生境與分布

生長于海拔600～1 700 m的地區(qū)，土壤基質(zhì)以疏松、潮濕的石灰?guī)r黃砂壤土為主,常生于蔭閉、濕度大、土壤肥沃的天然林邊緣、山坡林下以及溝旁．分布在亞洲東部的熱帶和亞熱帶地區(qū)，主要集中在中國和越南北部；在中國，主要分布在臺(tái)灣、湖北、四川、廣東、福建等地[3]．

4 性 狀

本品根莖橫切面：外皮層由1～2列多角細(xì)胞組成，棕黃色．皮層寬廣，靠近外皮層的皮層細(xì)胞中有淀粉粒和草酸鈣針晶束，長度約30～50 μm．并可見少量葉跡、根跡維管束；內(nèi)皮層細(xì)胞一層，細(xì)胞扁平．維管束散生，靠近內(nèi)皮層的維管束排成一圓環(huán)狀，為外韌維管束；內(nèi)方維管束散生，為周木維管束(如圖2所示)．

本品粉末呈淺黃棕色．表皮細(xì)胞呈黃棕色或紅棕色，類多角形，直徑40～70 μm，排列緊密，細(xì)胞壁稍厚，內(nèi)含黃棕色物質(zhì)．薄壁細(xì)胞黃色或近無色，類方形，長方形或不規(guī)則形，直徑20～240 μm，內(nèi)含淀粉粒；鱗片薄壁細(xì)胞黃棕色或紅棕色，不規(guī)則形，細(xì)胞壁極??；管胞黃色、黃棕色或無色，多為梯紋，直徑8～56 μm；淀粉粒較多，常為單粒，多呈圓形、橢圓形，直徑2～11 μm，臍點(diǎn)不明顯．根狀莖粗硬，肉質(zhì)，易折斷．直徑5～0 mm，外表棕色，有明顯節(jié)和鱗片(如圖3和圖4所示)．

1.木栓化細(xì)胞;2.表皮;3.木栓化細(xì)胞;4．外皮層;5．中皮層;6.周木維管束;7.內(nèi)皮層;8.韌皮部;9.木質(zhì)部;10.針晶;11.淀粉粒圖2 蜘蛛抱蛋根莖橫切面

圖3 蜘蛛抱蛋藥材和粉末

1.薄壁細(xì)胞；2.分泌細(xì)胞；3.淀粉粒；4.針晶；5.導(dǎo)管圖4 蜘蛛抱蛋根莖粉末

5 藥用情況

藥材性狀：根狀莖粗硬，肉質(zhì)，易折斷．直徑5～10 mm，外表棕色，有明顯節(jié)和鱗片；藥用經(jīng)驗(yàn)：內(nèi)服：煎湯，9～15 g，鮮品30～60 g．或作酒劑；外用：適量，搗敷[2]．

6 方法與結(jié)果

6.1 檢查

①水分：照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)ⅨH水分測定法中的烘干法測定，10批蜘蛛抱蛋藥材(陰干根莖)的測定結(jié)果均在12.12%～12.86%范圍內(nèi)，平均為12.75%，以平均值的120%為上限，故暫定本品水分不得超過15%(見表1)．

②總灰分、酸不溶性灰分：照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅨK灰分測定法測定，10批藥材的測定結(jié)果均在5.98%～6.67%范圍內(nèi)，平均結(jié)果為6.43%，以平均值的120%為上限，暫定本品的總灰分不得超過8%(結(jié)果見表1)．酸不溶性灰分測定結(jié)果均在0.49%～0.92%范圍內(nèi)，平均為0.73%，以平均值的120%為上限，故暫定本品的酸不溶性灰分不得超過0.9%(結(jié)果見表1)．

表2 蜘蛛抱蛋藥材水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物(%)

6.2 浸出物

照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅩA浸出物測定法，蜘蛛抱蛋陰干根莖粉末以95%乙醇為溶劑，熱回流提?。?0批藥材浸出物的測定結(jié)果均在4.48%～5.44%范圍內(nèi)，平均結(jié)果為4.86%，以平均值的80%為下限，暫定本品浸出物不得少于4%(結(jié)果見表1)．

6.3 薄層色譜鑒別

照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB薄層色譜法測定(測定結(jié)果如圖5所示)．

1：蜘蛛抱蛋(20160701宜昌長陽)；2：蜘蛛抱蛋(20160702宜昌五峰)；3：蜘蛛抱蛋(20160703湖南吉首)；4：蜘蛛抱蛋(20160704宜昌長陽)；5：蜘蛛抱蛋(20160705宜昌五峰)；6：蜘蛛抱蛋(20160706恩施利川)；7：蜘蛛抱蛋(20160707湖北神農(nóng)架)；8：蜘蛛抱蛋(20160708恩施利川)；9：蜘蛛抱蛋(20160709恩施利川)；10：蜘蛛抱蛋(20160710恩施巴東)圖5 薄層圖譜：試驗(yàn)環(huán)境20℃(5%硫酸乙醇顯色

供試品溶液：取蜘蛛抱蛋陰干根莖粉末1.0 g，精密稱取，加20 mL甲醇，置25℃超聲(40 kHz)提取60 min，過濾，溶劑揮干，將浸膏溶于水中用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，溶劑揮干，溶于甲醇，作為供試品．方法：照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取樣品溶液10 μL,分別點(diǎn)于同一GF254薄層板上，展開，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，加熱顯色至斑點(diǎn)清晰．點(diǎn)樣：供試品點(diǎn)量樣10 μL；帶狀點(diǎn)樣，條帶間距為5 mm，原點(diǎn)距底邊10 mm．展開劑：水飽和正丁醇(新配)(試驗(yàn)溫度為約20℃)．展開：展開缸預(yù)平衡15 min，上行展開，展距為8 cm．顯色：5%硫酸乙醇溶液．

6.4 化學(xué)成分研究

對(duì)于蜘蛛抱蛋藥材的研究國內(nèi)外均有報(bào)道，如日本的JUNZO SHOJ[4]和國內(nèi)的黎霜、王恒山、楊慶雄、彭杰、陳昌祥、陳夢菁等人[4-12]研究表明，其主要的化學(xué)成分為甾體皂苷．本課題蜘蛛抱蛋陰干根莖提取浸膏，分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，其重量比為9:6:37，說明正丁醇部位為本品主要化學(xué)成分；且正丁醇部位水溶液濃縮發(fā)泡嚴(yán)重，這也是甾體皂苷的一個(gè)重要的特征．目前，本課題已從湖北產(chǎn)蜘蛛抱蛋根莖的正丁醇部位中分離得到單體化合物14個(gè)，全部為甾體皂苷，所以甾體皂苷為本品主要的化學(xué)成分．

薄層色譜分析：供試品溶液：取蜘蛛抱蛋陰干根莖粉末1.0 g，精密稱取，加20 mL甲醇，置25℃超聲(40 kHz)提取60 min，過濾，溶劑揮干，將浸膏溶于水中用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，溶劑揮干，溶于甲醇，作為供試品．方法：照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)．如圖6所示，1為噴以5%硫酸乙醇顯色、2為A試劑顯色、3為E試劑，樣品對(duì)A試劑顯黃色或黃綠色，對(duì)E試劑顯紅色，表明本品主要化學(xué)成分為甾體皂苷類化合物,且多為呋甾烷醇類化合物[1，13]．

圖6 甾體皂苷波層色譜鑒別

7 結(jié) 論

本文首次對(duì)湖北產(chǎn)蜘蛛抱蛋藥材的水分、總灰分，酸不溶性灰分、浸出物、薄層色譜、植株的生境、植物形態(tài)、藥材性狀、化學(xué)成分等方面進(jìn)行了初步研究，并對(duì)其藥材的水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物四個(gè)方面的檢測限度給出了建議；通過文獻(xiàn)調(diào)研和實(shí)地考察對(duì)植株的生境、植物形態(tài)、藥用情況等進(jìn)行了歸納總結(jié)；并通過薄層色譜對(duì)比分析、化學(xué)研究和文獻(xiàn)調(diào)研確定其主要化學(xué)成分為甾體皂苷．為湖北產(chǎn)蜘蛛抱蛋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了一定的依據(jù)．

[1] 崔江銘．卵葉蜘蛛抱蛋中甾體皂苷的研究[D]．長沙：中南大學(xué)，2013．

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