腦脊液早期分泌抗原靶-6和干擾素-γ表達水平變化對結(jié)核性腦膜炎的臨床診斷價值

楊 智

（遼寧省大連市結(jié)核病醫(yī)院，遼寧 大連 116033）

結(jié)核性腦膜炎（tuberculous meningitis）是一種慢性傳染性疾病疾病，由于結(jié)核桿菌經(jīng)過淋巴或者血液系統(tǒng)進入腦膜和腦實質(zhì)誘發(fā)炎癥，當患者免疫力低下或者功能低下時，以及結(jié)核菌數(shù)量增多就會侵入蛛網(wǎng)膜下腔，隨著腦脊液播散，導(dǎo)致腦膜炎[1]。臨床表現(xiàn)呈現(xiàn)多樣化，并且臨床表現(xiàn)較為普遍，研究發(fā)現(xiàn)可以可不伴有肺結(jié)核而獨立存在，臨床以去腦脊液樣經(jīng)過病理檢測發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌確診。ESAT-6和IFN-γ有助于對結(jié)核性腦膜炎診斷，本次選擇本院收治的100例腦膜炎患者進行分析，取得了相關(guān)研究成果，現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果分析如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象：2011年11月至2017年4月我院檢查出的100例腦膜炎患者，其中觀察組（50例）為結(jié)核性腦膜炎患者，對照組（50例）為非結(jié)核性腦膜炎患者。觀察組男性31例，女性19例；年齡在23～68歲，平均年齡為（48.4±2.7）歲，其中23例為急性期患者，27例為恢復(fù)期患者。對照組男性28例，女性22例；年齡在25～63歲，平均年齡為（42.8±3.5）歲，炎癥類型：13例病毒性腦膜炎，10例化膿性腦膜炎，6例新型隱球菌性腦膜炎，其他（腦梗死、周圍性神經(jīng)病、腦囊蟲病等）21例。兩組基本資料間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可比。

1.2 方法：對結(jié)核性腦膜炎患者在入院后24 h內(nèi)，即急性期。兩組患者均按照正常操作消毒、手術(shù)鋪巾進行腰椎穿刺，取腦脊液2 mL，3000 rpm，離心時間10 min，收取上清液-20 ℃保存?zhèn)溆?，隨后采用ELISA法對兩組患者腦脊液中的ESAT-6和IFN-γ進行檢測，并進行比較，并對結(jié)核性腦膜炎患者急性期和恢復(fù)期腦脊液中的ESAT-6和IFN-γ進行檢測，并進行比較。試劑盒為默沙克生物試劑盒，定量檢測步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

具體操作步驟為：①繪制標準曲線；ESAT-6抗原標準品稀釋為濃度梯度：1、2、5、10、25、50、100、200 ng/mL，分別與一抗、二抗孵育，測定其不同濃度下的吸光度，繪制曲線。②測定；根據(jù)實驗設(shè)計標準酶標板，并且根據(jù)要求設(shè)置對照孔，將配置好的樣品濃度1000、500、250、125、62.5、31.3、15.6 pg/mL，各取100 μL，加入孔板中，將人血清、血漿、體液、組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的100 μL樣品中。本次研究為腦脊液上清液，故直接加稀釋液，操作期間注意無菌環(huán)境，于37 ℃放置90 min，然后吸去孔板內(nèi)的液體并用吸水紙盡可能的吸掉水分（TMB空白顯色孔除外），37 ℃放置60 min，再用0.01摩爾的TBS或0.01摩爾的PBS緩沖液洗滌3次，每次洗滌時浸泡約1 min；將準備好的ABC工作液依次加入實驗孔板（TMB空白顯色孔除外），每孔0.1 mL，37 ℃放置30 min；再使用0.01摩爾的TBS或0.01摩爾的PBS洗滌5次，每次洗滌時浸泡1～2 min。按每孔90 μL依次加入已在37 ℃平衡30 min的TMB顯色液，37 ℃避光，放置8～12 min。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS12.0對本研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組與對照組患者ESAT-6水平與IFN-γ水平對比：觀察組結(jié)核性腦膜炎患者ESAT-6水平與IFN-γ水平明顯高于對照組非結(jié)核性腦膜炎患者（tESAT-6=9.568，P=0.002；tIFN-γ=12.347，P=0.000），見表1。

表1 兩組患者腦脊液EAST-6水平比較（-x±s）

2.2 結(jié)核性腦膜炎急性期和恢復(fù)期患者腦脊液EAST-6和IFN-γ分布水平與對照組相比：與對照組患者相比，結(jié)核性腦膜炎急性期和恢復(fù)期患者腦脊液EAST-6和IFN-γ分布水平均明顯較高，差異對比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且急性期患者的EAST-6和IFN-γ分布水平較恢復(fù)期患者高（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組急性期和恢復(fù)期患者腦脊液EAST-6和IFN-γ水平比較（-x±s）

3 討 論

目前診斷結(jié)核性腦膜炎的實驗室診斷主要方法包括細菌學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)[2]。細菌學(xué)主要通過CSF涂片進行培養(yǎng)，看是否能分離出結(jié)核分枝桿菌，或能否檢出抗酸桿菌，臨床以檢出腦脊液結(jié)核分枝桿菌為診斷金標準，診斷率高，但是該方法培養(yǎng)時間長，容易延誤患者病情，此外診斷都是患者具有明顯的發(fā)病指標情況進行檢查，早期診斷或者篩檢意義不大。分子生物學(xué)方法診斷對實驗室要求較高，且假陽性率較高，臨床應(yīng)用收到限制。免疫學(xué)診斷技術(shù)特點為簡便、快捷，且易在基層實驗室開展。

ESAT-6是一種相對分子量較低的分泌性蛋白，是結(jié)合桿菌短期培養(yǎng)濾液分離出來的ESAT-6位點位于RD1區(qū)，該區(qū)是卡介苗（BCG）和結(jié)核分枝桿菌（MTB）毒株基因組相比較的缺失序列，諸多研究表明，ESAT-6是早期感染中起到主要作用的抗原，因其既有T細胞抗原決定簇，又有B細胞抗原決定簇，可同時引起細胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答。IFN是一種干擾素，具有抗病毒作用，腦脊液早期發(fā)現(xiàn)IFN出現(xiàn)說明是機體較為敏感的指標之一，也是機體正處于代償階段的標志，因此腦脊液中早期檢測IFN水平變化至關(guān)重要，不僅可以作為疾病診斷依據(jù)，也可以作為臨床疾病治療的特異性指示性指標，也標志著患者治療最佳的時段，IFN-γ誘導(dǎo)巨噬細胞可誘導(dǎo)性一氧化氮合酶（iNOS）產(chǎn)生，促進NO的合成，IFN-γ還可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細胞星形細胞的iNOS產(chǎn)生，可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的某些疾病的發(fā)生或保護作用有關(guān)[3]。本次研究表明，結(jié)核性腦膜炎腦脊液ESAT-6和IFN-γ水平均高于非結(jié)核性腦膜炎腦脊液ESAT-6和IFN-γ水平，且結(jié)核性腦膜炎患者急性期的EAST-6和IFN-γ分布水平較恢復(fù)期患者高，故而臨床上腦脊液早期分泌抗原靶-6和干擾素-γ表達水平變化對結(jié)核性腦膜炎具有臨床診斷價值。

[1] 粟秀初,趙鋼,馮國棟,等.對當前結(jié)核性腦膜炎病因診斷的幾點建議[J].中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志,2014,14(8):655-657.

[2] 王定佑,朱飛奇.影響結(jié)核性腦膜炎早期診斷的相關(guān)因素分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2013,10(10):45-47.

[3] 楊璟.檢測腦脊液單核細胞內(nèi)結(jié)核分支桿菌早期分泌性抗原對結(jié)核性腦膜炎的診斷價值[J].實用醫(yī)院臨床雜志,2014,11(1):84-86.