番茄頸腐根腐病菌分離鑒定與生物學(xué)特性研究

李景富，孫亞莉，趙婷婷，姜景彬，許向陽(yáng)

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，哈爾濱 150030）

番茄為全球主要種植蔬菜之一，但病害種類較多，發(fā)病嚴(yán)重，降低品質(zhì)及產(chǎn)量。番茄頸腐根腐病，俗稱“死棵病”，常見于我國(guó)山東省番茄連作大棚。分離鑒定大棚病株發(fā)現(xiàn)，番茄頸腐病致病菌為尖孢鐮刀菌。耿麗華等在2007年鑒定出北京郊區(qū)大棚番茄病害為頸腐根腐病，病原菌為尖孢鐮刀菌番茄頸腐根腐專化型，并分析病原菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)溫度、pH、氮源[1]。國(guó)外對(duì)番茄頸腐病相關(guān)研究較多[2-4]。番茄頸腐根腐病已發(fā)展為破壞性極大土傳病害之一，侵染后造成減產(chǎn)70%～83%[5]。幼苗感病初期出現(xiàn)老葉變黃和小葉萎縮，病原菌攻擊根部和基部，使其褐變和腐爛，晚期癥狀表現(xiàn)為莖基部萎縮倒塌，根腐爛，甚至死亡[6-7]，成熟植株感染表現(xiàn)為果成熟前期老葉邊緣黃化，莖基部有明顯深褐色病斑，植株縱向截面后，根莖皮層可見廣布褐變斑點(diǎn)和腐爛現(xiàn)象，褐變不超過(guò)土壤線25～30 cm[8]。一些生物防治劑可有效控制溫室內(nèi)番茄頸腐根腐病，配合使用效果良好[9]。研究表明，選育抗病品種和選用抗性砧木嫁接栽培為最有效防治方法[10]，用植物代謝物和基于植物衍生處理方法抑制頸腐根腐病，可替代某些化學(xué)物質(zhì)殺菌劑如惡霉靈和苯菌靈[11-12]。

目前鮮見番茄頸腐根腐病病原菌產(chǎn)孢條件、致病性、生理小種研究，急需篩選有效抗病生物制劑和抗病種質(zhì)資源。文章結(jié)合傳統(tǒng)病原菌形態(tài)觀察、柯赫氏證病法及rDNA-ITS序列分析方法，對(duì)番茄頸腐根腐病作病原菌鑒定，探究病菌菌絲和產(chǎn)孢適宜條件等基本生物學(xué)特性，為識(shí)別鑒定該病害及抗病種質(zhì)資源篩選等提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

番茄品種：Moneymaker，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)番茄研究所提供。

1.2 供試培養(yǎng)基

①馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯200 g，葡萄糖15～20 g，瓊脂粉17～20 g，蒸餾水1 000 mL，pH為7[13]。②燕麥培養(yǎng)基：燕麥片30 g，瓊脂粉17～20 g，蒸餾水1 000 mL[14]。③ 番茄秧汁培養(yǎng)基：番茄葉300 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉16 g，蒸餾水1 000 mL[15]。④查彼克培養(yǎng)基：KNO32.00 g，KCl 0.50 g，F(xiàn)eSO40.01 g，MgSO4· 7H2O0.50 g，Na2HPO41.00 g，蔗糖30 g，蒸餾水1 000 mL[14]。⑤瓊脂糖培養(yǎng)基：葡萄糖15～20 g，瓊脂粉17～20 g，蒸餾水1 000 mL[13]。

1.3 病原菌分離鑒定

1.3.1 病原菌采集

2017年4月4日、4月26日，5月14日共3次從山東溫室大棚采回病株并編號(hào)，觀察植株下部葉片變黃萎蔫，莖基部有成片褐色斑點(diǎn)并縊縮，根部部分腐爛，將莖基部橫切發(fā)現(xiàn)韌皮部部分變褐。

1.3.2 病原菌分離

將病株莖基部感病組織和根部縊縮部分剪成小段，參考文獻(xiàn)[13]常規(guī)組織分離法，根據(jù)實(shí)際分離情況稍加改動(dòng)[13]，75%酒精消毒30 s，1%升汞溶液消毒1.5 min，無(wú)菌水漂洗3次后接種至PDA培養(yǎng)基，25℃恒溫培養(yǎng)。每日觀察病菌生長(zhǎng)情況。

1.3.3 病原菌純化

從平板長(zhǎng)出的菌落邊緣挑菌絲至新PDA培養(yǎng)基，直至菌落均一，采用涂板純化法，挑針挑取少許菌絲于10 mL ddH2O中搖2 min制成孢子懸液，稀釋成不同濃度，滅菌槍頭吸取稀釋后菌液兩滴于PDA平板培養(yǎng)基中央，消毒涂布棒將菌液均勻涂至培養(yǎng)基，25℃恒溫培養(yǎng)，每日觀察病菌生長(zhǎng)情況。

1.3.4 病原菌鑒定

1.3.4.1 病原菌形態(tài)鑒定

觀察25℃恒溫箱中培養(yǎng)10 d菌落質(zhì)地、形狀、顏色，測(cè)量分生孢子尺寸，孢子梗長(zhǎng)度。

1.3.4.2 分子生物學(xué)鑒定

病原菌DNA提取采取CTAB法，PCR擴(kuò)增采用真菌核糖體DNA轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)通用引物：

ITS1：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'；

ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'。

反應(yīng)體系為H2O 17.8μL，Buffer 3μL，dNTP 2μL，Primer1 3μL，Primer2 3μL，DNA 模板1μL，酶0.2μL，反應(yīng)總體積30μL。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。產(chǎn)物送北京六合華大基因科技有限公司測(cè)序，結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)比。

1.3.4.3 柯赫氏證病法

用打孔器在菌落邊緣取直徑6 mm菌餅4片，放入裝有150 mL PD液體培養(yǎng)基三角瓶中，150 r·min-1，28℃搖4 d，用無(wú)菌水將培養(yǎng)液稀釋為濃度1.0 ×106個(gè)·mL-1孢子懸浮液。

番茄種子用75%酒精浸泡20 s，滅菌水清洗3次，待種子晾干后在溫室大棚中播種于育苗盤，四葉一心時(shí)采用棉球接種法和浸根法反接[16]，PD液體培養(yǎng)基代替孢子懸浮液作對(duì)照，其他處理相同，每日噴霧保濕，發(fā)病時(shí)采集分離純化病原菌測(cè)序鑒定。

1.3.5 病原菌保存

保存以上鑒定為番茄頸腐根腐病病原菌菌株，將菌株接種至PDA試管培養(yǎng)基，室溫下培養(yǎng)3～4 d，4℃冰箱中冷藏保存。為維持病原菌致病力，每3個(gè)月作一次繼代培養(yǎng)重新保存[17]。

1.4 病原菌生物學(xué)特性研究

1.4.1 高溫致死情況研究

菌株培養(yǎng)在25℃恒溫箱中，采用PDA培養(yǎng)基，待菌落生長(zhǎng)10 d左右時(shí)，用直徑6 mm打孔器在菌落邊緣取圓形菌片置于裝有10 mL滅菌水試管，恒溫水浴[18]，溫度設(shè)置為56、57、58、59、60、61、62、63、64、65℃，3次重復(fù)，1 h后挑取菌塊于PDA培養(yǎng)基中，25℃恒溫培養(yǎng)3 d后每日觀察菌株生長(zhǎng)情況，確定致死溫度。

1.4.2 不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

25℃恒溫箱中菌株培養(yǎng)，采用PDA培養(yǎng)基，待菌落生長(zhǎng)10 d用直徑6 mm打孔器在菌落邊緣取菌落一致圓形菌片，置于新PDA平板中央，溫度設(shè)置為20、23、25、28、30、35 ℃，pH為7，5次重復(fù)，每48 h用十字交叉法測(cè)定一次菌落直徑，第6天確定菌絲生長(zhǎng)最適溫度[8]。

1.4.3 不同光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

光照設(shè)置為24 h黑暗、12 h光照12 h黑暗、24 h光照，溫度為最適溫度，其余操作同1.4.2，記錄數(shù)據(jù)并分析。

1.4.4 不同PH對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

處理培養(yǎng)基的pH分別調(diào)整為5、6、7、8、9、10、11、12，溫度為最適溫度，其余操作同

1.4.2 ，記錄數(shù)據(jù)并分析。

1.4.5 不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

處理培養(yǎng)基采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、燕麥培養(yǎng)基、查彼克培養(yǎng)基、番茄秧汁（寄主）培養(yǎng)基、瓊脂糖培養(yǎng)基，其余操作同

1.4.2 ，記錄數(shù)據(jù)并分析。

1.4.6 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

將PDA培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，碳源為葡萄糖、乳糖、木糖、蔗糖、麥芽糖，用不同碳源等量替換葡萄糖并作缺碳對(duì)照，其余操作同1.4.2，記錄數(shù)據(jù)并分析。

1.4.7 不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

參照韓文華等方法[19]，將PDA培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，氮源為硫酸銨、尿素、甘氨酸、氯化銨、乙酸銨，按PDA培養(yǎng)基配方另外再加0.5%氮源并作缺氮對(duì)照，其余操作同1.4.2，記錄數(shù)據(jù)并分析。

1.4.8 不同溫度對(duì)產(chǎn)孢影響

用直徑6 mm打孔器在培養(yǎng)10 d左右菌落邊緣打取菌落一致圓形菌片，置于新PDA平板中央，溫度設(shè)置為20、23、25、28、30、35℃，pH為7，3次重復(fù)，10 d后測(cè)量產(chǎn)孢量，參照康立功等方法將20 mL無(wú)菌水注入待測(cè)培養(yǎng)皿中，沖洗孢子和菌絲，磁力振蕩器振蕩幾分鐘使孢子完全釋放，過(guò)濾制成孢子懸浮液，吸取一定量孢子懸浮液滴至血球計(jì)數(shù)板，顯微鏡觀察計(jì)數(shù)分析[20]。

1.4.9 不同光照對(duì)產(chǎn)孢影響

光照設(shè)置為24 h黑暗、12 h光照12 h黑暗、24 h光照，溫度為最適溫度，其余操作同1.4.8。

1.4.10 不同pH對(duì)產(chǎn)孢影響

培養(yǎng)基pH分別調(diào)整為5、6、7、8、9、10、11、12，溫度為最適溫度，其余操作同1.4.8。

1.4.11 不同培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)孢影響

培養(yǎng)基采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、燕麥培養(yǎng)基、查彼克培養(yǎng)基、番茄秧汁（寄主）培養(yǎng)基、瓊脂糖培養(yǎng)基，溫度為最適溫度，其余操作同1.4.8。

1.4.12 不同碳源對(duì)產(chǎn)孢影響

將PDA培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，碳源為葡萄糖、乳糖、木糖、蔗糖、麥芽糖，用不同碳源等量替換葡萄糖并作缺碳對(duì)照，溫度為最適溫度，其余操作同1.4.8。

1.4.13 不同氮源對(duì)產(chǎn)孢影響

PDA培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，氮源為硫酸銨、尿素、甘氨酸、氯化銨、乙酸銨，按PDA培養(yǎng)基配方另加0.5%氮源并作缺氮對(duì)照，溫度為最適溫度，其余操作同1.4.8。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌分離鑒定結(jié)果

2.1.1 病原菌分離純化結(jié)果

分離3 d后平板中生長(zhǎng)白色絨狀菌絲如圖1所示，顯微鏡初步鑒定為鐮刀菌。涂板分離時(shí)將菌懸液繼續(xù)稀釋100倍單菌落較分散，效果良好，獲生長(zhǎng)均勻單一菌株。

圖1 組織分離3 d后菌絲生長(zhǎng)情況Fig.1 Mycelial growth after 3 d of tissueisolation

2.1.2 病原菌鑒定結(jié)果

2.1.2.1 病原菌生長(zhǎng)形態(tài)鑒定結(jié)果

如圖2所示，純化獲單一菌株生長(zhǎng)較一致，菌落平鋪生長(zhǎng)，細(xì)絨毛狀為圓形，淡紫紅色。分生孢子較多，含質(zhì)體，略透明，基本無(wú)格，長(zhǎng)寬比2.3～6，大分生孢子兩頭稍尖，微彎，長(zhǎng)度約20～25μm，小型分生孢子多為橢圓或紡錘形，長(zhǎng)度約4～8μm。厚垣孢子為透明狀球形，頂生或間生。孢子梗長(zhǎng)度較短，生長(zhǎng)于菌絲側(cè)面，無(wú)分枝。根據(jù)形態(tài)特征初步鑒定為尖孢鐮刀菌（見圖3～4）。

2.1.2.2 分子生物學(xué)鑒定

由圖5所示，目的條帶約550 bp，拼接結(jié)果為542 bp，將序列上傳基因庫(kù)中得序列登錄號(hào)為MG736729，根據(jù)在基因庫(kù)中Blast結(jié)果，該病菌與尖孢鐮刀菌Fusariumoxysporum親源關(guān)系最近。

圖2 病原菌生長(zhǎng)5 d形態(tài)Fig.2 Pathogen morphology after 5 d

圖3 大孢子和小孢子Fig.3 Megasporesand microspores

圖4 厚垣孢子和孢子梗Fig.4 Cryptosporidium and sporestem

2.1.2.3 柯赫氏證病法

由圖6所示，棉球接種幼苗5 d后發(fā)現(xiàn)莖基部有褐色腐爛，甚至發(fā)生傾倒，傳統(tǒng)浸根方法接種幼苗發(fā)病較晚，癥狀表現(xiàn)為莖部有褐色條狀凹痕，縊縮，下部葉片變黃，有氣生根。對(duì)發(fā)病植株作病原菌基因組DNA提取，PCR擴(kuò)增，送北京六合華大基因科技有限公司測(cè)序，發(fā)現(xiàn)與接種病原菌分子生物學(xué)鑒定結(jié)果一致，證明試驗(yàn)分離病菌為尖孢鐮刀菌番茄頸腐根腐病?；汀?/p>

2.2 生物學(xué)特性

2.2.1 高溫致死情況

將菌塊轉(zhuǎn)移至新PDA培養(yǎng)基生長(zhǎng)3 d后發(fā)現(xiàn)56、57、58、59、60℃處理菌塊均生長(zhǎng)菌絲，61、62℃處理菌塊部分生長(zhǎng)菌絲，其余處理無(wú)變化，一周后63、64、65℃處理菌塊仍未生長(zhǎng)菌絲，證明致死溫度為63℃，1 h。

圖5 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物Fig.5 PCR product detected by agarosegel electrophoresis

圖6 人工接種病原菌發(fā)病情況Fig.6 Symptomsof artificial inoculation

2.2.2 不同溫度、光照、pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

由表1可知，病原菌在20～35℃范圍均可生長(zhǎng)，28℃時(shí)菌落直徑最大，說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)最快，與其他溫度處理相比差異均達(dá)極顯著水平，說(shuō)明28℃為該病原菌生長(zhǎng)最適溫度。

對(duì)于光照情況，病原菌在不同光照情況下均可生長(zhǎng)，光暗交替時(shí)菌落直徑最大，說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)最快，且處理12 h光照12 h黑暗與處理24 h黑暗相比差異顯著，與處理24 h光照相比差異達(dá)極顯著水平，說(shuō)明光暗交替12 h有利于病原菌菌絲生長(zhǎng)。

對(duì)于不同pH情況，病原菌在pH 5～12均可生長(zhǎng)，pH=9時(shí)菌落直徑最大說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)最快，pH=9與pH=10相比差異不顯著，與pH=11、12相比差異顯著，與處理pH=8、7、6、5相比差異極顯著，說(shuō)明病原菌菌絲在偏堿性條件下生長(zhǎng)較好，酸性條件不利生長(zhǎng)，pH=9有利菌絲生長(zhǎng)。

2.2.3 不同培養(yǎng)基、碳源、氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響

由表2可知，病原菌在5種培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng)，燕麥培養(yǎng)基上菌落直徑最大，說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)最快，其中瓊脂糖培養(yǎng)基、查彼克培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基間無(wú)差異，燕麥培養(yǎng)基與其他處理相比差異極顯著，說(shuō)明燕麥培養(yǎng)基利于病原菌菌絲生長(zhǎng)。

對(duì)于不同碳源，病原菌在各處理培養(yǎng)基均可生長(zhǎng)，以乳糖為碳源培養(yǎng)基菌落直徑最大，說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)最快，碳源乳糖和麥芽糖與缺碳對(duì)照相比差異不顯著，其他碳源與對(duì)照相比差異極顯著，添加不同碳源不利于病原菌菌絲生長(zhǎng)，乳糖最利于促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)。

表1 不同溫度、光照、p H菌絲生長(zhǎng)差異顯著性測(cè)驗(yàn)Table1 Significant test of differencein mycelial growth on different temperature,light and p H

對(duì)于不同氮源，病原菌各處理培養(yǎng)基均可生長(zhǎng)，以甘氨酸為氮源培養(yǎng)基上菌落直徑最大，菌絲生長(zhǎng)最快，且與對(duì)照相比差異極顯著，說(shuō)明甘氨酸有利于病原菌菌絲生長(zhǎng)。以氯化銨、硫酸銨為氮源培養(yǎng)基與對(duì)照相比差異極顯著且菌落直徑小于對(duì)照，不利于病原菌菌絲生長(zhǎng)。

2.2.4 不同溫度、光照、pH對(duì)產(chǎn)孢影響

由表3可知，病原菌各處理溫度下均可產(chǎn)孢，25℃時(shí)產(chǎn)孢量最大，與28℃相比差異不顯著，與30、23、20℃相比差異顯著但未達(dá)極顯著水平，與35℃相比差異極顯著，說(shuō)明25和28℃利于病原菌產(chǎn)孢。

對(duì)于不同光照，病原菌在各處理光照情況下均可產(chǎn)孢，24 h黑暗時(shí)產(chǎn)孢量最大，與24 h光照產(chǎn)孢量相比差異不顯著，與12 h光照12 h黑暗相比差異顯著，說(shuō)明間斷光照不利于病原菌產(chǎn)孢，持續(xù)黑暗條件可促進(jìn)病原菌產(chǎn)孢。

對(duì)于不同pH，病原菌在pH 5～12培養(yǎng)基上均可產(chǎn)孢，pH=8時(shí)產(chǎn)孢量最大，與處理pH=6和pH=7相比差異顯著，與其他處理相比差異不顯著，說(shuō)明不同pH對(duì)病原菌的產(chǎn)孢影響不大，偏堿性條件相對(duì)適宜病原菌產(chǎn)孢。

2.2.5 不同培養(yǎng)基、碳源、氮源對(duì)產(chǎn)孢影響

由表4可知，病原菌在5種培養(yǎng)基上均可產(chǎn)孢，PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大，與番茄秧汁培養(yǎng)基相比差異不顯著，與瓊脂糖培養(yǎng)基相比差異極顯著，與其他處理相比差異顯著，說(shuō)明供試培養(yǎng)

基PDA最利于病原菌產(chǎn)孢。

表2 不同培養(yǎng)基、碳源、氮源的菌絲生長(zhǎng)差異顯著性測(cè)驗(yàn)Table2 Significant test of differencein mycelial growth on different medium,carbon sourceand nitrogen source

表3 不同溫度、光照、p H的產(chǎn)孢差異顯著性測(cè)驗(yàn)Table3 Significant test of differencein sporulation on different temperature,light and pH

對(duì)于不同碳源，病原菌在各供試碳源培養(yǎng)基均可產(chǎn)孢，葡萄糖碳源培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大，與木糖相比差異顯著，與其他處理相比差異不顯著，說(shuō)明不同碳源對(duì)病原菌產(chǎn)孢影響不大，木糖不利于病原菌產(chǎn)孢。

對(duì)于不同氮源，病原菌在各供試氮源培養(yǎng)基上均可產(chǎn)孢，以PDA（對(duì)照）培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大，供試氮源和對(duì)照相比差異不顯著，說(shuō)明不同氮源對(duì)病原菌產(chǎn)孢基本無(wú)影響。

表4 不同培養(yǎng)基、碳源、氮源的產(chǎn)孢差異顯著性測(cè)驗(yàn)Table4 Significant test of differencein sporulation on different medium,carbon sourceand nitrogen source

3 討論與結(jié)論

文章結(jié)合多種方法鑒定山東溫室大棚大面積番茄植株莖部病害，證明其為番茄土傳病害頸腐根腐病，病原菌為尖孢鐮刀菌番茄頸腐根腐病?；停‵usarium oxysporum f.sp.radicis-lycopersici），與程琳等研究結(jié)果一致[21]。形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法及人工接種驗(yàn)證鑒定結(jié)果真實(shí)可靠。病原菌生物學(xué)特性研究對(duì)掌握該病害發(fā)生規(guī)律，選育抗病種質(zhì)資源有重要作用，本試驗(yàn)研究病原菌菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢所需營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件，確定菌絲生長(zhǎng)最適溫度為28℃，與Benaouali等研究一致[6]，產(chǎn)孢最適溫度為25℃，耿麗華研究認(rèn)為菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)最適溫度均為25℃，產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)最適溫度一致。綜上說(shuō)明，該病原菌生長(zhǎng)最適溫25～28℃[1]。菌絲生長(zhǎng)最適pH為9，產(chǎn)孢pH為8，與Rattink研究結(jié)果一致[22]，表明病原菌適于偏堿性條件下生長(zhǎng)，我國(guó)北方土壤偏堿性，病害爆發(fā)嚴(yán)重。研究證明光暗交替12 h有利于菌絲生長(zhǎng)，24 h黑暗有利于病原菌產(chǎn)孢，真菌一般黑暗條件利于產(chǎn)孢[23]。菌絲生長(zhǎng)最適培養(yǎng)基為燕麥培養(yǎng)基，碳源為乳糖，氮源為甘氨酸即有機(jī)氮，銨態(tài)氮和尿素不利于菌絲生長(zhǎng)，與耿麗華等研究結(jié)果一致[1]。Farooq等認(rèn)為葡萄糖是該病原菌最合適碳源[24]，結(jié)果差異可能因所選碳源種類不同造成，后者并未明確選擇乳糖作碳源，也可能是病原菌培養(yǎng)條件差異造成。但Farooq等研究結(jié)果與本文病原菌產(chǎn)孢適宜條件一致，產(chǎn)孢最適培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，碳源為葡萄糖[24]。綜上說(shuō)明病原菌菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢條件相關(guān)性不大，研究應(yīng)兼顧考慮這兩個(gè)因素。

番茄頸腐根腐病致病菌除侵染番茄外，還危害葫蘆科豆科和藜科植物[25]，尖孢鐮刀菌番茄頸腐根腐病專化型危害更大，應(yīng)引起研究者足夠重視并開發(fā)有效生物防治方法。目前認(rèn)為選育抗病品種和砧木嫁接防治效果最佳[12]，已篩選抗病種質(zhì)資源有效標(biāo)記為與單基因Frl緊密連鎖保守序列位點(diǎn)C2-At2g38025所設(shè)計(jì)的CAPS標(biāo)記C2-25[26]，程琳等運(yùn)用此方法鑒定田間25份種質(zhì)材料[21]，分子標(biāo)記篩選與人工接種篩選基本一致。后續(xù)試驗(yàn)可利用這兩種方法對(duì)各種番茄品種作有效抗病資源篩選，加快選育抗病品種進(jìn)程。

明確該病害及其致病菌，可為今后山東溫室大棚及其他地區(qū)該番茄病害研究和防治提供依據(jù)。番茄頸腐根腐病在我國(guó)多地均有發(fā)生，本研究?jī)H采集山東省大棚病株鑒定存在一定局限，分離菌株較單一，是否存在其他菌類共同作用仍未可知，生理小種分化尚未明確。后續(xù)研究重點(diǎn)為苗期接種條件篩選[27]、病原菌侵染和傳播途徑、生理小種分化、抗性遺傳機(jī)制及抗病育種。

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