豬鏈球菌分子生物學(xué)檢測(cè)研究進(jìn)展

豬鏈球菌病是由豬鏈球菌引起的一種人畜共患的傳染病，會(huì)導(dǎo)致豬關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎以及肺炎等的發(fā)生，同時(shí)還可以穿過(guò)胎盤屏障導(dǎo)致母豬流產(chǎn)，是我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)面臨的重大傳染病之一。對(duì)豬鏈球菌病進(jìn)行快速診斷對(duì)于該病的控制意義重大。目前對(duì)該病的檢測(cè)方法主要是通過(guò)建立在常規(guī)的分離培養(yǎng)以及生化鑒定的微生物學(xué)鑒定方法，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且檢測(cè)靈敏度不高。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，為豬鏈球菌的檢測(cè)提供了新的途徑。因此，本文就目前國(guó)內(nèi)外豬鏈球菌分子生物學(xué)方面的檢測(cè)方法進(jìn)行具體的論述，以期為同行提供幫助。

一、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)

PCR敏感性強(qiáng)，特異性高，還具有高度的重復(fù)性，可以快速準(zhǔn)確的對(duì)病原菌做出診斷，是近年來(lái)豬鏈球菌檢測(cè)的常用技術(shù)。

1.群特異性PCR。谷氨酸脫氫酶基因以及溶血素基因具有良好的群特異性，同時(shí)在豬鏈球菌不同分離菌株之間具有一定的保守性。Okwumabua等根據(jù)豬鏈球菌2型菌株的溶血素基因序列設(shè)計(jì)了一種引物從而建立了PCR，但是由于受到檢測(cè)范圍的限制，該法對(duì)一些血清型以及致病型菌株無(wú)法檢測(cè)出來(lái)。因此，Okwumabua等依據(jù)豬鏈球菌2型菌株的谷氨酸脫氫酶基因序列設(shè)計(jì)了引物并建立了豬鏈球菌定群PCR，該法能特異性的檢出豬鏈球菌所有血清型菌株。此外，Smith等依據(jù)莢膜多糖是豬鏈球菌血清型鑒定的直接依據(jù)這一特點(diǎn)對(duì)豬鏈球菌的主要菌株莢膜基因的DNA序列設(shè)計(jì)了引物，建立了血清型特異性PCR的檢測(cè)方法。

2.多重PCR。多重PCR技術(shù)能夠同時(shí)擴(kuò)增不同的基因片段，因而與普通PCR技術(shù)相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)。2009年，聶小想等建立了多重PCR檢測(cè)體系，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白溶菌酶釋放蛋白、溶血素基因以及胞外因子等豬鏈球菌獨(dú)立相關(guān)因子基因的同步檢測(cè)。通過(guò)對(duì)背景明確的試驗(yàn)菌株進(jìn)行檢測(cè)分析，具有一定的檢測(cè)效果。

3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR。實(shí)時(shí)熒光定量PCR不僅能夠快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出病原體，還能夠判斷出疾病的亞臨床狀態(tài)，從而判斷出是現(xiàn)感染還是既往感染。孫洋等以莢膜多糖基因?yàn)榘谢?，建立?型豬鏈球菌的熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)方法，這種方法不僅能夠準(zhǔn)確測(cè)定出感染的強(qiáng)度，還避免了假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)豬鏈球菌的檢測(cè)方法起到了完善作用。

二、環(huán)介島等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

環(huán)介島等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù)，其使用簡(jiǎn)單、快捷，同時(shí)敏感性高，特異性強(qiáng)，而且不需要昂貴的設(shè)備。朱水榮等根據(jù)2型豬鏈球菌中國(guó)分離豬89K毒力島中基因序列設(shè)計(jì)了4條引物，通過(guò)環(huán)介島等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)2型豬鏈球菌以及一些其它菌株進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明這種方法僅對(duì)含有89k毒力島的中國(guó)2型豬鏈球菌檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明這種方法具有非常好的特異性。

三、基因芯片技術(shù)

基因芯片是通過(guò)將核算探針固定在支持物上，熒光標(biāo)記的靶分子與探針結(jié)合后，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)即可獲得樣本的基因信息。近年來(lái)，基因芯片技術(shù)被廣泛應(yīng)用于治病微生物檢測(cè)中。鄭峰等根據(jù)基因庫(kù)中豬鏈球菌的相關(guān)序列，針對(duì)不同菌株設(shè)計(jì)了不同的特異性探針并達(dá)到了預(yù)期的檢測(cè)效果。這對(duì)于豬鏈球菌的鑒定具有重要價(jià)值。

四、核糖體分型技術(shù)

核糖體分型技術(shù)是以細(xì)菌核糖體中的16S以及23SrRNA基因?yàn)殡s交探針，利用16SrRNA的群間特異性以及保守性實(shí)現(xiàn)細(xì)菌的診斷。Staats等利用核糖體分型技術(shù)，對(duì)豬鏈球菌毒力進(jìn)行了研究，結(jié)果表明該方法能夠起到致病菌株與非致病菌株的區(qū)分作用。

五、結(jié)語(yǔ)

豬鏈球菌病作為一種人畜共患的疾病，嚴(yán)重制約著我國(guó)養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。在實(shí)際的生產(chǎn)實(shí)踐中，可以將上述方法結(jié)合起來(lái)用于診斷豬鏈球菌病，從而對(duì)暴發(fā)性豬鏈球菌病起到及時(shí)的防控作用。

參考文獻(xiàn)（略）