布魯氏菌病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展

布魯氏菌病是一種由布魯氏菌引起的危害嚴(yán)重的人畜共患傳染病。該病給人類(lèi)健康帶來(lái)了嚴(yán)重危害，給畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文將從布魯氏菌病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。布魯氏菌特有的DNA序列使PCR技術(shù)的檢測(cè)效果特異而敏感。PCR技術(shù)主要用于人布魯氏菌病的檢測(cè)。然而，PCR技術(shù)用于布魯氏菌病的診斷中也有一定的問(wèn)題：已治愈患者體內(nèi)仍能檢測(cè)到布魯氏菌DNA。

一、病原學(xué)診斷

1.布魯氏菌的分離培養(yǎng)。細(xì)菌的分離培養(yǎng)是診斷布魯氏菌病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但失敗率高，對(duì)慢性布魯氏菌病幾乎無(wú)效，常用于羊種布魯氏菌病和豬種布魯氏菌病的鑒別診斷，很少用于牛種布魯氏菌。布魯氏菌生長(zhǎng)困難而且緩慢，Araj對(duì)173位急性布魯氏菌病（可能是羊種布魯氏菌?。┗颊叩募?xì)菌分離培養(yǎng)試驗(yàn)中有91例成功。分離出細(xì)菌的時(shí)間間隔如下：1周～13%；2周～65%；3周～19%；4周～3%。

2.顯微鏡檢查。采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜水腫液、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)、胎兒和胃內(nèi)容物等組織，制成抹片，用柯茲羅夫斯基染色法或改良柯氏法染色，鏡檢，如染成紅色球桿狀或短桿狀，即為布魯氏菌，小桿菌，而其他細(xì)菌則呈現(xiàn)藍(lán)色。這種方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果判定直觀明了，但失敗率較高。

3.PCR技術(shù)。今年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，PCR技術(shù)在布魯氏菌病的檢測(cè)，種型鑒定等方

二、血清學(xué)診斷

機(jī)體在感染布魯氏菌約一周后便可產(chǎn)生特異性抗體，血清學(xué)診斷技術(shù)通過(guò)對(duì)抗體的檢測(cè)來(lái)診斷布魯氏菌病，目前常用的血清學(xué)診斷技術(shù)主要有試管凝集試驗(yàn)（SAT）、抗球蛋白試驗(yàn)（AHG或Coombs試驗(yàn)）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、以及酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試驗(yàn)等檢測(cè)方法。

1.凝集試驗(yàn)。試管凝集試驗(yàn)（SAT）是目前使用最廣泛的布魯氏菌病檢測(cè)方法，對(duì)急性布病有很好的檢測(cè)效果，試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，但耗時(shí)較長(zhǎng)。試管凝集試驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)為：牛、馬、駱駝等大家畜和人的血清稀釋度1∶100及以上為陽(yáng)性，1∶50為可疑；豬、羊（綿羊、山羊）、犬等小家畜血清稀釋度1∶50以上為陽(yáng)性，1∶25為可疑。

虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）是用被虎紅染色并滅活處理后的布魯氏菌作為抗原，根據(jù)待檢血清是否與其發(fā)生凝集而判斷陰陽(yáng)性，敏感性較高，操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，成本低，但準(zhǔn)確性易受到溫度、緩沖液PH等因素的影響。

2.抗球蛋白試驗(yàn)（AHG）或庫(kù)姆斯試驗(yàn)（Coombs）?？骨虻鞍自囼?yàn)克服了前帶效應(yīng)對(duì)凝集試驗(yàn)的影響。許多情況下，AHG可以檢測(cè)出凝集反應(yīng)的結(jié)果為陰性的陽(yáng)性樣本。由于AHG檢測(cè)針對(duì)IgG抗體，所以將此法用于檢測(cè)慢性布病收到了良好的效果。

3.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）原理是抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物時(shí)，抗體分子的構(gòu)象變化，F(xiàn)c片段上的補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)暴露，補(bǔ)體與之結(jié)合，無(wú)法與加入的溶血素和紅細(xì)胞形成的復(fù)合物結(jié)合，就沒(méi)有溶血現(xiàn)象的產(chǎn)生；反之，當(dāng)待檢血清中沒(méi)有相應(yīng)抗體，游離的補(bǔ)體與加溶血素和紅細(xì)胞復(fù)合物結(jié)合導(dǎo)致溶血現(xiàn)象。因此可以根據(jù)溶血現(xiàn)象的發(fā)生與否來(lái)判斷受檢血清中是否存在布魯氏菌的特異性抗體。補(bǔ)提結(jié)合試驗(yàn)操作復(fù)雜，結(jié)論受主觀因素影響較大，不利于基層工作的檢測(cè)。

4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一項(xiàng)具有較高靈敏度的檢測(cè)技術(shù)，但其特異性卻比凝集試驗(yàn)低。用于布魯氏菌病診斷的方法主要有間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（iELISA）、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附方法（Dot-ELISA）及競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（cELISA）等。Magee比較了ELISA（IgG），補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和抗人球蛋白試驗(yàn)，認(rèn)為ELISA反應(yīng)最敏感。

5.各種血清學(xué)診斷方法的分析。試管凝集試驗(yàn)，虎紅試驗(yàn)，ELISA（IgM）最好在急性感染的早期階段使用，因?yàn)檫@些試驗(yàn)所檢測(cè)的IgM是機(jī)體從感染后

3 d左右就開(kāi)始產(chǎn)生初始抗體。機(jī)體感染7 d左右產(chǎn)生IgG和IgA抗體，可以通過(guò)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，抗球蛋白試驗(yàn)，巰基乙醇試驗(yàn)和ELISA（IgG）試驗(yàn)檢測(cè)。2002年，Nielsen根據(jù)多篇文獻(xiàn)分析了幾種常用的布魯氏菌免疫學(xué)診斷方法敏感性、特異性，具體結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表1：

表1 各血清學(xué)診斷試驗(yàn)敏感性、特異性及表現(xiàn)指數(shù)

目前存在多種布魯氏菌病的診斷方法，但都存在一定的缺陷，迄今為止沒(méi)有任何一種診斷方法能夠完全準(zhǔn)確的檢測(cè)出布魯氏菌病，一般都是綜合多種方法的檢測(cè)結(jié)果用于診斷布魯氏菌病的。布魯氏菌病的凈化需要將疫苗免疫和陽(yáng)性動(dòng)物的淘汰相結(jié)合，而現(xiàn)有的診斷方法無(wú)法區(qū)別疫苗接種動(dòng)物和自然感染動(dòng)物，但相信隨著對(duì)布病診斷技術(shù)的不斷研究，快速、準(zhǔn)確，能夠區(qū)分自然感染動(dòng)物和疫苗免疫動(dòng)物的布魯氏菌病診斷方法一定能夠建立出來(lái)，這將為布病的防制與凈化產(chǎn)生重大意義。