拜城油雞鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠血脂及肝臟的影響

依帕爾古麗·阿不拉，阿依姑麗·艾合麥提，熱娜古麗·木沙，李 珊

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052)

鞘磷脂(sphingomyelin，SM)是生物細(xì)胞膜的主要成分，由磷酸膽堿、鞘氨醇及脂肪酸組成的兩性脂類，也是哺乳動(dòng)物血漿中第2豐富的磷脂，18%的血漿磷脂以鞘磷脂的形式存在[1-2]；血清鞘磷脂參與脂蛋白代謝，進(jìn)而影響動(dòng)脈粥樣硬化[3]。近幾年的研究結(jié)果表明，鞘磷脂與人體內(nèi)的脂肪酸、膽固醇及毒枝菌素所引起的一些疾病有著密切的關(guān)系，因此，食品中的鞘磷脂逐漸受到人們的關(guān)注[4-5]。有報(bào)道表明，在小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，鞘磷脂可通過改善脂肪器官的感性起到抑制小鼠結(jié)腸癌的作用[6-8]。本研究采用飼喂高脂飼料建立高脂血癥小鼠模型，初步探討拜城油雞鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥性小鼠血清生化指標(biāo)以及肝功能的影響。為今后進(jìn)一步深入研究拜城油雞鞘磷脂提取物預(yù)防脂肪肝的作用機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1儀器 AU400全自動(dòng)生化分析儀(日本Olympus公司)；NICO7200分光光度計(jì)(尤尼柯儀器有限公司)；TGL-20M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試藥 血脂康膠囊，購自北京北大維信生物科技有限公司(批號(hào) 20100108)；三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所(批號(hào)20101118)。

1.3動(dòng)物 取健康昆明小鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量為20±2 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，許可證號(hào):SCXK(新)2016-0003。

2 方法

2.1供試品溶液及高脂乳劑的制備 鞘磷脂(SM)：準(zhǔn)確稱取50 g雞皮，切碎，用正己烷洗脫中性脂質(zhì)，乙醇攪拌后過濾，濾液在室溫中靜置48 h，再次過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干燥。將干燥的乙醇提取物用甲醇鈉水解(37 ℃，1 h)，并用硫酸將溶液的pH值調(diào)至1，37 ℃靜置1 h，再用氫氧化鈉將溶液的pH調(diào)至中性。將混合物用己烷∶乙醇∶水(8∶4∶1)進(jìn)行萃取，下層相利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干燥，干燥的固體物中加水和體積分?jǐn)?shù)為50%的丙酮，室溫下離心，重復(fù)2次，將沉淀部分用乙醇溶解后濃縮至干燥，干燥的固體物稱定質(zhì)量獲得SM[9]。

高脂乳劑：按照文獻(xiàn)方法[10]進(jìn)行制備。

血脂康：將血脂康膠囊用蒸餾水制成所需質(zhì)量濃度的混懸液。

2.2小鼠的分組、造模與給藥 將60只小鼠隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組、高脂模型組(給予高脂乳劑0.02 mL·g-1)、陽性對(duì)照組(給予血脂康0.10 g·kg-1·d-1)和鞘磷脂高、中、低劑量組(給予鞘磷脂0.20,0.10和0.05 g·kg-1·d-1),分組和給藥方案見表1。實(shí)驗(yàn)周期為35 d，每周稱定小鼠質(zhì)量1 次，末次給藥后，小鼠12 h禁食不禁水，眼球取血，血液靜置2 h，以3 000 r·min-1離心10 min后，分離血清，備用；同時(shí)，快速取出肝臟，稱定質(zhì)量并計(jì)算臟器系數(shù)，提取若干小葉備病理切片用。

臟器系數(shù)=肝臟濕質(zhì)量(mg)÷體質(zhì)量(g)×100%

表1實(shí)驗(yàn)小鼠分組和給藥方案

Tab.1 The dosage regimen of experimental mice

組別藥物高脂乳劑/mL·g-1生理鹽水/mL·g-1血脂康/g·kg-1·d-1鞘磷脂提取物/g·kg-1·d-1正常對(duì)照組-適量(Day)--高脂模型組0.02(AM)適量(PM)--陽性對(duì)照組0.02(AM)-0.10(PM)-高劑量組0.02(AM)--0.20(PM)中劑量組0.02(AM)--0.10(PM)低劑量組0.02(AM)--0.05(PM)

注：- 表示未給藥或用生理鹽水灌胃。

2.3肝臟組織病理學(xué)檢查 將已取出的肝右小葉用4 ℃生理鹽水洗凈，用質(zhì)量濃度為6.5 g·L-1的中性甲醛溶液固定，制成病理切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，用生物顯微鏡觀察各組肝組織切片，比較觀察病理學(xué)變化。

3 結(jié)果與分析

3.1鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠體質(zhì)量及臟器系數(shù)的影響 見表2。由表2可知，各組小鼠的體質(zhì)量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常對(duì)照組相比，高脂模型組小鼠的臟器系數(shù)極顯著性升高(P<0.01)，臟器系數(shù)越高表示肝臟的受損程度越大；與高脂模型組相比，鞘磷脂提取物高、中劑量組和陽性對(duì)照組小鼠的臟器系數(shù)極顯著下降(P<0.01)。

3.2鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠血清的影響 見表3。由表3可知，與正常對(duì)照組相比，高脂模型組TG、TC和LDL-C含量顯著升高(P<0.05)，HDL-C含量顯著降低(P<0.05)，結(jié)果表明，小鼠高脂血癥模型誘導(dǎo)成功。與高脂模型組比較，鞘磷脂提取物高劑量組和陽性對(duì)照組TC、TG和LDL-C含量顯著降低(P<0.05)，HDL-C的含量顯著升高(P<0.05)。結(jié)果表明，鞘磷脂提取物和血脂康均能降低高脂血癥小鼠的血脂水平。

表2鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠體質(zhì)量和臟器系數(shù)的影響

注：與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01；與高脂模型組比較△P<0.05，△△P<0.01。

表3鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠血清生化指標(biāo)的影響

注：與正常對(duì)照組比較*P<0.05；與高脂模型組比較△P<0.05。

3.3鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠肝臟組織病理學(xué)變化分析 見圖1。

圖1各組小鼠肝臟組織的病理學(xué)變化

A．正常對(duì)照組(×100)；B．正常對(duì)照組(×400)；C．高脂模型組(×100)；D．高脂模型組(×400)；E．陽性對(duì)照組(×100)；F．陽性對(duì)照組(×400)；G．低劑量組(×100)；H．低劑量組(×400)；I．中劑量組(×100)；J．中劑量組(×400)；K．高劑量組(×100)；L．高劑量組(×400)。

Fig.1 The pathological changes of liver tissues in each groups of mice

A.control group (×100)；B.control group (×400)；C.high fat model group (×100)；D.high fat model group (×400)；E.positive control group (×100)；F.positive control group (×400)；G.low dose group (×100)；H.low dose group (×400)；I.middle dose group (×100)；J.middle dose group (×400)；K.high dose group (×100)；L.high dose group (×400).

由圖1可知，正常對(duì)照組周圍肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞竇清晰；高脂模型組有散在的點(diǎn)狀壞死灶，灶中可見中心粒細(xì)胞部分中央靜脈擴(kuò)張充血，多數(shù)肝細(xì)胞胞脂中含有脂滴，部分中央靜脈周圍的肝細(xì)胞水腫較為明顯，可見肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂，肝竇狹窄；陽性對(duì)照組中央靜脈周圍肝細(xì)胞輕度顆粒樣變，部分遠(yuǎn)離中央靜脈肝細(xì)胞輕度脂變，肝索、肝竇結(jié)構(gòu)較為清晰；鞘磷脂低劑量組中央靜脈周圍肝細(xì)胞輕微脂肪變，脂肪變多位于中央靜脈周圍，遠(yuǎn)離中央靜脈多呈輕微的顆粒樣變；鞘磷脂中劑量組部分肝細(xì)胞呈輕中度脂肪變性，細(xì)胞輕度腫脹，肝竇狹窄，部分肝細(xì)胞嗜酸變，核濃縮；鞘磷脂高劑量組部分中央靜脈輕度擴(kuò)張充血，部分肝細(xì)胞輕度脂變，肝索、肝竇結(jié)構(gòu)清晰。

4 討論

高脂血癥又稱脂類代謝紊亂或異常，是導(dǎo)致脂肪肝和動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病的因素[11-14]。肝臟是脂類代謝的重要器官，在脂類消化、吸收、代謝及運(yùn)輸?shù)冗^程中起著重要的作用[15]。崔瑩雪等[16]研究發(fā)現(xiàn)，ApoE-/-小鼠在給予高脂飲食12周后，早期艾灸關(guān)元穴可一定程度上調(diào)整ApoE-/-小鼠血脂代謝的紊亂狀態(tài)，減慢肝臟組織病變發(fā)生。阿依姑麗·艾合麥提等[17]在通過灌服高脂乳劑建立高脂血癥模型的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)TFWA可降低高血脂大鼠的血脂，能減少肝臟損傷。魏國華等[18]報(bào)道，高脂飲食是導(dǎo)致家兔在肝臟中呈現(xiàn)病理改變的原因，并隨著高脂飲食的時(shí)間延長，病變逐步加重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過35 d灌胃高脂乳劑的小鼠，肝臟呈病變趨勢(shì)；當(dāng)灌胃鞘磷脂提取物后，肝細(xì)胞的部分中間靜脈輕度擴(kuò)張充血，部分肝細(xì)胞輕度脂變，肝索、肝竇結(jié)構(gòu)清晰，說明鞘磷脂具有一定的保護(hù)肝細(xì)胞、防止肝細(xì)胞變性的作用。

另外，Exon J H等[19]研究發(fā)現(xiàn)，鞘磷脂能夠降低小鼠異常結(jié)腸隱窩數(shù)量，抑制結(jié)腸隱窩細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增，但對(duì)小鼠的免疫功能無較大影響。Dillellay D L等[20]將健康雌性CF1小鼠用1，2-二甲肼鹽酸(DMH)處理后，再用飼料(含鞘磷脂0.025%～0.1%)喂養(yǎng)28周，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鞘磷脂組小鼠結(jié)腸腫瘤的發(fā)生率降至20%。本實(shí)驗(yàn)通過灌胃高脂乳劑的方法建立小鼠高脂血癥模型，給藥35 d后發(fā)現(xiàn)，與高脂模型組比較，給藥組小鼠血清TC、TG和LDL-C含量顯著下降，肝組織脂肪變性也得到顯著改善。

研究結(jié)果表明，拜城油雞鞘磷脂提取物可顯著降低高脂血癥小鼠的血脂水平，能保護(hù)肝細(xì)胞、改善肝細(xì)胞脂肪變性，為今后拜城油雞鞘磷脂提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血脂與肝臟的深入研究奠定基礎(chǔ)。

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