小型豬胃經(jīng)與腎經(jīng)經(jīng)脈不通病理模型的比較觀察?

李宏彥，王燕平，佘銳萍，賈術(shù)永，周文婷,4，李 恒，張 洋，王廣軍，田宇瑛，王 澤，張維波△

(1. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所，北京 100700； 2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029； 3. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100094； 4. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

證候是中醫(yī)學(xué)特有的概念，由一系列具有內(nèi)在聯(lián)系的癥狀或體征組成，這些疾病的外候稱為病候[1]。與西醫(yī)強(qiáng)調(diào)病菌致病不同的是，中醫(yī)認(rèn)為經(jīng)絡(luò)不通、氣血不調(diào)是疾病產(chǎn)生的主要原因，所引起的經(jīng)脈病候在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載頗多。那么，中醫(yī)理論的這個(gè)觀點(diǎn)能否被現(xiàn)代科學(xué)所證明，成為中醫(yī)基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵問(wèn)題之一。

經(jīng)絡(luò)研究是我國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)研究的重要內(nèi)容。針對(duì)經(jīng)絡(luò)的實(shí)質(zhì)，張維波等使用連續(xù)流阻測(cè)量、組織液壓波傳播測(cè)量和同位素示蹤等方法，發(fā)現(xiàn)循經(jīng)低流阻通道(low hydraulic resistance channel along meridians, LHRCM)[2]，其中“低流阻通道”縮寫為L(zhǎng)HRC，研究其運(yùn)行組織液及內(nèi)含物質(zhì)的基本功能，并對(duì)各種中醫(yī)療法調(diào)節(jié)該通道的機(jī)制進(jìn)行了分析[3]。隨后又對(duì)LHRCM進(jìn)行了相關(guān)的病理研究，建立了“經(jīng)脈不通”病理模型[4]。研究發(fā)現(xiàn)，凝膠堵塞小型豬的LHRCM后，其痛閾較注入凝膠前顯著降低[5]，堵塞胃經(jīng)LHRC并飼養(yǎng)一段時(shí)間后剖檢發(fā)現(xiàn)，胃腸有明顯臌氣的現(xiàn)象[6]，初步表明由LHRCM代表的經(jīng)脈不通與癥狀相關(guān)。但堵塞不同經(jīng)脈的LHRC，其癥狀反應(yīng)是否不同？是否表現(xiàn)出與文獻(xiàn)描述的經(jīng)脈病候特點(diǎn)？本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，選擇容易操作及觀察的胃經(jīng)和腎經(jīng)的LHRC進(jìn)行造模并設(shè)對(duì)照組，觀察造模前后相關(guān)指標(biāo)的變化，探索LHRCM與經(jīng)脈病候的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及飼養(yǎng)方法

選用中國(guó)實(shí)驗(yàn)用雄性小型豬(北京市琉璃河科興實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心)19只，體質(zhì)量(9±2) kg，毛色黑(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(京)2011-0014)。使用大型動(dòng)物專用籠具(1.3×2.2 m2，連續(xù)觀察組為1×0.7×0.8 m3)單籠飼養(yǎng)。每日提供濃縮飼料(希望飼料有限公司)，8∶00給料150 g，20∶00給料100 g，飲水不限量。動(dòng)物房溫度(20±2) ℃，濕度(50±10)%Rh。

1.2 主要儀器及試劑

經(jīng)絡(luò)測(cè)定儀(576F30型，東華電子儀器廠)、連續(xù)流阻測(cè)定儀(針灸所研制)、干燥箱(202系列，上海圣科儀器設(shè)備有限公司)、電子天平(T-2000型，精度0.5 g)、Macrolane穩(wěn)定性透明質(zhì)酸(凝膠,瑞典Uppsala公司)、阿利新藍(lán)8GX(美國(guó)SIGMA公司)、豬源纖維蛋白黏合劑(悅靈膠，杭州普濟(jì)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司)、戊巴比妥鈉(德國(guó)分裝，含量>99%)、速眠新Ⅱ(吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司)、安特固強(qiáng)力膠(新加坡安特固化學(xué)有限公司)，備皮刀、量杯、軟尺、游標(biāo)卡尺、體重秤、手術(shù)器材以及消毒酒精等。

1.3 動(dòng)物分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為胃經(jīng)不通組(胃經(jīng)組)7只、腎經(jīng)不通組(腎經(jīng)組)7只和對(duì)照組5只，不同觀察指標(biāo)的動(dòng)物數(shù)量略有不同，具體數(shù)目見結(jié)果表中N值。從3組小型豬中各選1只進(jìn)行每日測(cè)量的連續(xù)觀察(連續(xù)觀察組)，分別為胃經(jīng)不通豬(胃經(jīng)豬)、腎經(jīng)不通豬(腎經(jīng)豬)和對(duì)照豬。

1.4 造模方法

使用濃度為3%的戊巴比妥鈉溶液(0.5 ml/kg)和速眠新Ⅱ(0.1 ml/kg)分別注射小型豬兩側(cè)臀部肌肉進(jìn)行麻醉。備皮后用經(jīng)絡(luò)測(cè)定儀測(cè)量循經(jīng)低電阻點(diǎn)[7]，以點(diǎn)標(biāo)記，點(diǎn)間距離約1～2 cm，胃經(jīng)豬測(cè)量胃經(jīng)區(qū)域和腎經(jīng)區(qū)域，對(duì)照豬只做麻醉處理。用流阻測(cè)定儀在低電阻點(diǎn)的連線上測(cè)低流阻點(diǎn)[2, 8]，測(cè)定后連接裝有凝膠(含少量阿利新藍(lán))的注射器，向低流阻點(diǎn)緩慢注入0.5～1.0 ml，胃經(jīng)單側(cè)4點(diǎn)，雙側(cè)共8點(diǎn)；腎經(jīng)單側(cè)3點(diǎn)，雙側(cè)共6點(diǎn)。對(duì)于連續(xù)觀察組，為進(jìn)一步鞏固凝膠的阻斷作用，將少量(約0.3 ml)悅靈膠注入凝膠皮丘邊緣與低電阻線相交處的皮下組織，取出針頭后按壓針孔5 s[9],造模完成后送至動(dòng)物房飼養(yǎng)7～9周。

1.5 觀察內(nèi)容及方法

1.5.1 代謝觀察 測(cè)量各組在取材前1周每日的飲水量、尿量和糞便量；連續(xù)觀察組觀察造模前1周和造模后51 d每日飲水量、尿量和糞便量。飲水量：用量杯測(cè)量當(dāng)日剩余水量，計(jì)算倒入水量與剩余水量的差值；尿量：用量杯測(cè)量收集桶中的尿量；糞便量：直接稱量代謝盤中的糞便為糞便濕重；將糞便放入最高溫度為150 ℃、定時(shí)25 min的干燥箱，待溫度降至36 ℃取出糞便稱重，為糞便干重；計(jì)算糞便含水率=(糞便濕重-糞便干重)÷糞便濕重×100%。

1.5.2 體質(zhì)量、體尺、牙齒的測(cè)量與計(jì)算 用體重秤和軟尺分別測(cè)量造模當(dāng)天和取材當(dāng)天各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)量和體尺(胸圍、腹圍、腰圍、體長(zhǎng))，計(jì)算造模前后的胸圍、腹圍和腰圍的體軀指數(shù)，如胸圍體軀指數(shù)=胸圍÷體長(zhǎng)×100%。造模后第7～9周處死，取出下頜骨及牙齒，使用游標(biāo)卡尺測(cè)量雙側(cè)門齒和犬齒的長(zhǎng)度及前臼和臼齒的寬度[9]。

1.5.3 臟器系數(shù)的計(jì)算 動(dòng)物處死后打開胸腹腔，取出心臟、肺、脾、胃、肝臟、腎臟、睪丸、前列腺、膀胱，并稱量各臟器的離體質(zhì)量。計(jì)算臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量÷體質(zhì)量×100%[10]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 飲水量及二便量

表1顯示，連續(xù)觀察組造模前后自身比較，飲水量對(duì)照豬造模后比造模前極顯著升高37.45%(P<0.01)，胃經(jīng)豬造模后比造模前極顯著升高49.31%(P<0.01)，腎經(jīng)豬造模后比造模前降低1.38%(P>0.05)。尿量對(duì)照豬造模后比造模前顯著升高35.00%(P<0.05)，胃經(jīng)豬造模后比造模前極顯著升高56.54%(P<0.01)，腎經(jīng)豬造模后比造模前降低1.25%(P>0.05)。

造模后組間比較，胃經(jīng)組飲水量顯著高于對(duì)照組30.57%(P<0.05)，胃經(jīng)組極顯著高于腎經(jīng)組37.47%(P<0.01)，腎經(jīng)組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；胃經(jīng)組尿量顯著高于對(duì)照組41.24%(P<0.05)，胃經(jīng)組極顯著高于腎經(jīng)組57.40%(P<0.01)，腎經(jīng)組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；胃經(jīng)組糞便含水率極顯著低于腎經(jīng)組35.10%(P<0.01)，其他組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組飲水量、尿量和糞便含水率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

注：造模前后自身比較：*P<0.05，**P<0.01；與胃經(jīng)組比較：△P<0.05，△△P<0.01

2.2 體軀指數(shù)

表2顯示，胃經(jīng)組腰圍體軀指數(shù)顯著大于對(duì)照組6.78%(P<0.05)，胸圍體軀指數(shù)和腹圍體軀指數(shù)組間、腎經(jīng)組與其他2組腰圍體軀指數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組體軀指數(shù)統(tǒng)計(jì)表

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05

2.3 牙齒

表3顯示，腎經(jīng)組雙側(cè)第1門齒的長(zhǎng)度極顯著大于胃經(jīng)組(30.79%)和對(duì)照組(20.62%，P<0.01)，其余各齒長(zhǎng)度及寬度組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3 雙側(cè)門齒與犬齒長(zhǎng)度及前臼與臼齒的寬度測(cè)量比較

注：與另外2組比較：**P<0.01

2.4 臟器系數(shù)

表4顯示，心臟臟器系數(shù)腎經(jīng)組顯著低于對(duì)照組24.14%(P<0.05)。腎臟臟器系數(shù)胃經(jīng)組極顯著高于對(duì)照組23.60%(P<0.01)，腎經(jīng)組顯著高于對(duì)照組12.82%(P<0.05)。其他各臟器系數(shù)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

一些臟器系數(shù)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但實(shí)際均值差異較大，如腎經(jīng)組睪丸臟器系數(shù)比胃經(jīng)組低22.22%(P=0.054)，比對(duì)照組低26.32%(P=0.36)。

表4 各組臟器系數(shù)統(tǒng)計(jì)

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05，**P<0.01

3 討論

在疾病發(fā)生的早期，機(jī)體常無(wú)明顯的器質(zhì)性改變，只表現(xiàn)出某些功能和行為的異常變化，中醫(yī)則針對(duì)這些病候進(jìn)行診斷辨證。張維波等將這些在人體感官可觀察范圍內(nèi)的疾病表現(xiàn)稱為中醫(yī)宏觀物理表征[12]。本研究利用現(xiàn)代測(cè)量工具，量化原本定性的宏觀指標(biāo)，并利用數(shù)學(xué)工具進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建立宏觀定量法[9]，使中醫(yī)的實(shí)驗(yàn)研究在不失整體觀的前提下觀察更為精確，為開創(chuàng)中醫(yī)特色的實(shí)驗(yàn)研究提供了新方法。

中醫(yī)診斷學(xué)中的陽(yáng)明經(jīng)證及陽(yáng)明腑實(shí)證中，有“渴欲飲水，口干舌燥，大便秘結(jié)和腹脹滿”的癥狀[13]。與本實(shí)驗(yàn)中胃經(jīng)組口渴、便干、小便多及腹圍增大的表現(xiàn)相吻合。小型豬的腰圍位于下腹部水平，反映了腹部的大小[9]，故腰圍體軀指數(shù)增大可作為“腹脹滿”的定量描述。前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，堵塞胃經(jīng)LHRC后，小型豬出現(xiàn)了腸胃臌氣的現(xiàn)象[6]，該現(xiàn)象可能是胃經(jīng)組腰圍增大的原因。小便量多可能是因?yàn)樾⌒拓i的小汗腺不發(fā)達(dá)，無(wú)法大量排汗(“潮熱、汗出”，陽(yáng)明腑實(shí)證)[14]，故多飲的水液只能通過(guò)小便排出，造成小便多的現(xiàn)象。另外，前期對(duì)小型豬的行為學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，堵塞胃經(jīng)LHRC后，小型豬表現(xiàn)出煩躁及眠差的異常行為改變[15]，與《靈樞·經(jīng)脈》中記載的胃經(jīng)病候“欲上高而歌，棄衣而走”及“胃不和則臥不安”的病候相吻合。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中胃經(jīng)組出現(xiàn)的陽(yáng)明經(jīng)證與陽(yáng)明腑實(shí)證的現(xiàn)象，說(shuō)明凝膠堵塞胃經(jīng)LHRC造成了與足陽(yáng)明胃經(jīng)和胃腑相關(guān)的病候。

中醫(yī)認(rèn)為腎主水，與水液代謝關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)的腎經(jīng)組出現(xiàn)飲水、尿量均較少及便稀現(xiàn)象，其中飲水量與尿量并未像對(duì)照豬那樣隨其月齡的增加而升高，說(shuō)明堵塞腎經(jīng)引起了水液代謝障礙。腎藏精，主生殖，為先天之本，主宰機(jī)體的生殖功能。腎經(jīng)組睪丸臟器系數(shù)較小，與胃經(jīng)組比較差異高達(dá)22.22%，雖然樣本量小，但統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果已相當(dāng)接近顯著性差異。在生物醫(yī)學(xué)研究中，動(dòng)物臟器系數(shù)是衡量動(dòng)物臟腑功能狀態(tài)的重要指標(biāo)[16]，腎經(jīng)組睪丸臟器系數(shù)較低的現(xiàn)象，說(shuō)明堵塞腎經(jīng)LHRC影響了生殖器官的發(fā)育，進(jìn)而可影響其生殖功能，初步證明了中醫(yī)“腎主生殖”的理論。腎主骨，齒為骨之余，骨與齒均依賴腎中精氣的滋養(yǎng)濡潤(rùn)?！鹅`樞·經(jīng)脈》中多次提到腎經(jīng)(少陰經(jīng))與齒的關(guān)系，如“足少陰氣絕則骨枯，少陰者，冬脈也，伏行而濡骨髓者也，故骨不濡則肉不能著骨也。骨肉不相親則肉軟卻，肉軟卻故齒長(zhǎng)而垢”。因此，腎經(jīng)組第1門齒較長(zhǎng)可能與凝膠堵塞腎經(jīng)LHRC后，腎經(jīng)氣血虧虛導(dǎo)致齒齦分離、牙齦萎縮，使得裸露于牙齦外的部分相對(duì)變長(zhǎng)。腎經(jīng)組出現(xiàn)的水液代謝功能障礙、生殖器官發(fā)育不良和第1門齒裸露部分增長(zhǎng)的現(xiàn)象，說(shuō)明凝膠堵塞小型豬腎經(jīng)LHRC造成了與腎經(jīng)和泌尿生殖系統(tǒng)相關(guān)的病候。

古人不僅對(duì)機(jī)體的宏觀物理表征進(jìn)行觀察，對(duì)臟器也進(jìn)行了解剖與測(cè)量。早在《靈樞·腸胃》中就有相關(guān)記載，如“舌重十兩……咽門重十兩”等，現(xiàn)代研究也常以臟器系數(shù)作為臟腑功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究中堵塞胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC主要對(duì)腎臟的臟器系數(shù)影響較為明顯，與對(duì)照組比較顯著增加，其原因可能與注射至動(dòng)物組織中的凝膠以及其中的阿利新藍(lán)染料有關(guān)。上述增加的物質(zhì)，特別是阿利新藍(lán)被機(jī)體視為異物，需要通過(guò)腎臟排除，因此增加了腎臟的代謝負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致腎臟輕度水腫，使得其臟器系數(shù)增加，具體機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)觀察。另外腎經(jīng)組的心臟臟器系數(shù)較低，可能與中醫(yī)的“心腎相交”有關(guān)。

表6顯示，根據(jù)堵塞小型豬胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC所得到的宏觀定量指標(biāo)，結(jié)合以往的研究，將2組實(shí)驗(yàn)結(jié)果與中醫(yī)證候進(jìn)行比較。

表6 堵塞胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與中醫(yī)證候比較

4 結(jié)語(yǔ)

在經(jīng)脈的組織液通道學(xué)說(shuō)及前期對(duì)小型豬行為及胃腸剖檢觀察的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)對(duì)凝膠堵塞小型豬LHRCM后的表現(xiàn)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，堵塞胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC，小型豬分別出現(xiàn)與中醫(yī)胃、腎及所屬經(jīng)脈相關(guān)的不同病候，這種差異表現(xiàn)在水液代謝、體型變化、牙齒及生殖器官的臟器系數(shù)等方面，說(shuō)明堵塞不通的LHRCM對(duì)小型豬有相對(duì)特異性影響，“經(jīng)脈不通”是導(dǎo)致相關(guān)經(jīng)脈病候的病理機(jī)制，進(jìn)一步證明了LHRCM是經(jīng)絡(luò)解剖學(xué)結(jié)構(gòu)之一(致謝：感謝中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院的老師和同學(xué)們?cè)谛⌒拓i剖檢和病理觀察方面提供的幫助)。

[1] 朱文鋒．中醫(yī)診斷學(xué)[M]．北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2002：2．

[2] ZHANG WB，TIAN YY，LI H，et al．A discovery of low hydraulic resistance channel along meridians[J]．J Acupuncture Meridian Study，2008，1(1)：20-28．

[3] ZHANG WB，WANG GJ，F(xiàn)UXE K．Classic and Modern Meridian Studies：A Review of Low Hydraulic Resistance Channels along Meridians and Their Relevance for Therapeutic Effects in Traditional Chinese Medicine[J]．Evid Based Complement Alternatire Med，2015，Article ID 410979，14 pages，http://dx.doi.org/10.1155/2015/410979．

[4] 徐一慧，張維波，田宇瑛，等．奧美定水凝膠注射對(duì)循經(jīng)低流阻通道阻斷作用的初步觀察[J]．生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2009，26(4)：776-779．

[5] 張維波，徐一慧．《黃帝內(nèi)經(jīng)》“橫絡(luò)卡壓、不通則痛”的實(shí)驗(yàn)研究[C]．遼寧:中國(guó)針灸學(xué)會(huì)經(jīng)筋診治專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文集重點(diǎn)論文選編，2009:101-104.

[6] ZHOU WT，JIA SY，ZHANG YQ，et al．Pathological Changes in Internal Organs after Blocking Low Hydraulic Resistance Channels along the Stomach Meridian in Pigs[J]．Evid Based Complement Alternatire Med．2013，Article ID 935687，9pages，http://dx.doi.org/10.1155/2013/935687．

[7] 楊寶堂，?？傮J，于書莊，等．肺經(jīng)隱性循經(jīng)感傳線定位的實(shí)驗(yàn)研究[J]．針刺研究，1985(1)：70-73．

[8] 張維波，田宇瑛，李宏，等．一種連續(xù)測(cè)量流阻的方法與皮下低流阻點(diǎn)的研究[J]．生物物理學(xué)報(bào)，1998，14(2)：373-378．

[9] 李宏彥，王燕平，張維波，等．小型豬經(jīng)脈不通病理模型的宏觀定量觀察法[J]．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2016，22(4)：525-528．

[10] 孫建新，安娟，連軍．影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臟器重量及臟器系數(shù)因素分析[J]．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2009，26(1)：49-51．

[11] 陳新林．單病例隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)(N-of-1)數(shù)值資料的模擬研究[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2014：1-4．

[12] 張維波，舒友廉．中醫(yī)現(xiàn)代化與人體的宏觀物理表征[J]．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1995，1(3)：8-9．

[13] 姚乃禮．中醫(yī)證候鑒別診斷學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：536-540．

[14] 許琴，徐新明，張東輝，等．新疆長(zhǎng)白豬皮膚組織結(jié)構(gòu)與人皮膚組織結(jié)構(gòu)的比較[J]．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2011，28(3)：34-36．

[15] ZHANG WB，ZHOU WT，WANG GJ，et al. Observing Behavioral Effects in Mini-Pigs after Blocking the Low Hydraulic Resistance Channels along the Stomach Meridian[J]. Alternative and Integrative Medicine, 2017，6(4)：1000251.

[16] 閔凡貴，潘金春，王希龍，等．影響五指山小型豬主要臟器重量及臟器系數(shù)的因素分析[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39(10)：218-222．