穴位埋線(xiàn)對(duì)急性高原缺氧大鼠血紅蛋白及動(dòng)脈血?dú)獾挠绊?

汪永鋒，徐亞莉，金建軍，王士源，高曉娟，孫鵬云

(1. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，蘭州 730000； 2. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，蘭州 730000)

急性高原缺氧是從平原進(jìn)入海拔3000 m以上的高原地區(qū)，機(jī)體對(duì)低壓低氧環(huán)境適應(yīng)能力不全導(dǎo)致的急性缺氧反應(yīng)，輕者出現(xiàn)胸悶、頭痛、惡心等癥狀，重者并發(fā)肺動(dòng)脈高壓、腦水腫、心力衰竭甚至危及生命。因此，急性高原缺氧是人類(lèi)訪(fǎng)問(wèn)高海拔地區(qū)的一個(gè)很大的挑戰(zhàn)[1]。目前，西醫(yī)主要采用乙酰唑胺、氨茶堿等藥物來(lái)防治[2]，而中醫(yī)學(xué)常用紅景天、銀杏葉及復(fù)方丹參滴丸等預(yù)防和治療本病[3-4]。穴位埋線(xiàn)又稱(chēng)長(zhǎng)效針感療法，有扶正祛邪、調(diào)節(jié)臟腑平衡、疏通經(jīng)絡(luò)氣血等作用，其特點(diǎn)是對(duì)機(jī)體的可持續(xù)刺激從而維持療效，為目前急性高原缺氧的防治提供了新的思路與方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察急性高原缺氧模型大鼠血液中血紅蛋白(Hb)含量及動(dòng)脈血?dú)夥治鱿嚓P(guān)指標(biāo)pH、血氧分壓(PaO2)、二氧化碳分壓(PaCO2)、氧飽和度(SaO2)的變化，初步探討穴位埋線(xiàn)對(duì)急性高原缺氧的干預(yù)機(jī)制，為該病的針灸防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

健康成年SPF級(jí)6周齡Wistar大鼠48只，體質(zhì)量(160±20) g，雌雄各半，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào)SCXK(甘)2014-0020)。實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，飼養(yǎng)室條件相對(duì)溫度18～25 ℃，相對(duì)濕度50%～80%，12 h明暗交替。采用完全隨機(jī)方法先將大鼠分為空白組8只和造模組40只；造模成功后將40只大鼠再隨機(jī)分為模型組、紅景天組、埋線(xiàn)A組、埋線(xiàn)B組和埋線(xiàn)C組每組8只(雌、雄各半)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置嚴(yán)格遵循中華人民共和國(guó)科技部頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》。

1.2 試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)試劑：紅景天煎劑(生藥含量為2 g/ml，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院煎藥室提供)；水合氯醛(天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司，批號(hào)20130105)。

實(shí)驗(yàn)儀器：DYC-Q型低壓低氧動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倉(cāng)(貴州風(fēng)雷航空軍械有限公司)；HEMAVET950S-V5動(dòng)物血球分析儀(美國(guó)伯樂(lè)公司)；ABL80動(dòng)脈血?dú)夥治鰞x(丹麥雷度公司)；4-0號(hào)醫(yī)用羊腸線(xiàn)(上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品股份有限公司，批號(hào)3650412)；一次性無(wú)菌注射器6號(hào)半針頭(山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司，批號(hào)3151474)；0.25×40 mm華成牌毫針(北京科苑達(dá)技術(shù)開(kāi)發(fā)公司總經(jīng)銷(xiāo)，批號(hào)2270080)。

1.3 紅景天煎劑的制備

將500 g紅景天藥材加水后煮沸30 min，用紗布將藥液過(guò)濾，共煎煮3次，濾液混合后濃縮成250 ml、生藥含量為2 g/ml的煎劑，放置于-4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｕ麄€(gè)煎藥過(guò)程均在甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院煎藥室進(jìn)行。

1.4 模型制備

除空白組外，其余各組大鼠均采用低壓氧倉(cāng)模擬高原環(huán)境的方法制備急性高原缺氧大鼠模型。具體方法：將大鼠置于低壓低氧動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倉(cāng)內(nèi)，將艙內(nèi)條件設(shè)置為：溫度(20±3)℃，相對(duì)濕度(30±5)%，氣流量0.09～0.10 m3/h，氧含量(10±2)%。大鼠入艙后先以30 m/s的速度上升至6000 m海拔，維持8 h完成缺氧后，再以30 m/s的速度迅速降低海拔高度，使艙內(nèi)氣壓與外界大氣壓相同。在此期間實(shí)時(shí)觀(guān)察大鼠的行為狀態(tài)并記錄，每天1次，共7 d?？瞻捉M大鼠在相同溫濕度條件下倉(cāng)外飼養(yǎng)。

1.5 各組處理方法

空白組常壓常氧下飼養(yǎng)，不做任何處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采集大鼠血液進(jìn)行Hb及動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)檢測(cè)。

模型組造模成功后不做任何治療，自由攝食進(jìn)水，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采集大鼠血液進(jìn)行Hb及動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)檢測(cè)。

紅景天組于造模前1周及造模后1周，每天上午9∶00均給予紅景天藥液灌胃。灌胃前先將紅景天藥液從冰箱中取出，待其放置同室溫時(shí)以0.5 ml/100 g劑量進(jìn)行灌胃，每天1次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采集大鼠血液進(jìn)行Hb及動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)檢測(cè)。

埋線(xiàn)組：埋線(xiàn)A、B、C組分別于造模1周、造模后1周及造模前后各1周進(jìn)行埋線(xiàn)治療1次。取穴與埋線(xiàn)方法：3個(gè)埋線(xiàn)組均選取“大椎”、雙側(cè)“足三里”進(jìn)行埋線(xiàn)。埋線(xiàn)前先以0.5 ml/100 g劑量腹腔注射4%的水合氯醛進(jìn)行麻醉，麻醉后將埋線(xiàn)穴位處剃毛，充分暴露穴位區(qū)域，碘伏常規(guī)消毒。將4-0號(hào)醫(yī)用羊腸線(xiàn)剪成5 mm的小段，用鑷子將其置入6號(hào)半一次性無(wú)菌注射器針頭內(nèi)，一手持注射針斜刺入穴位內(nèi)，另一手持去掉針尖的0.25×40 mm毫針從注射針的另一端進(jìn)入注射針的針孔內(nèi)，抵住毫針針尾將羊腸線(xiàn)推入穴位內(nèi)，感覺(jué)注射器針內(nèi)有空虛感時(shí)方可出針，并確認(rèn)羊腸線(xiàn)已埋入大鼠體內(nèi)，1周1次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采集大鼠血液進(jìn)行Hb及動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)檢測(cè)。

1.6 觀(guān)察指標(biāo)及檢測(cè)方法

血紅蛋白(Hb)含量：治療結(jié)束后采集各組大鼠腹腔靜脈血2 ml立即進(jìn)行Hb檢測(cè)，記錄其含量變化。

動(dòng)脈血?dú)夥治觯褐委熃Y(jié)束后用動(dòng)脈血?dú)獠裳槻杉鹘M大鼠腹主動(dòng)脈血2 ml，立即進(jìn)行動(dòng)脈血?dú)夥治觯謩e檢測(cè)記錄pH、PaO2、PaCO2、SaO2各項(xiàng)指標(biāo)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠Hb含量檢測(cè)及動(dòng)脈血?dú)夥治?pH、PaO2、PaCO2、SaO2)

表1顯示，與空白組比較，模型組大鼠Hb含量顯著升高(P<0.01)，而動(dòng)脈血?dú)飧黜?xiàng)指標(biāo)均不同程度降低(P<0.01，P<0.05)，表明大鼠出現(xiàn)了急性高原缺氧反應(yīng)，模型復(fù)制成功。與模型組比較，紅景天組與3個(gè)埋線(xiàn)組Hb含量均明顯降低(P<0.01)，PaO2、PaCO2、SaO2及埋線(xiàn)C組的pH值明顯升高(P<0.01，P<0.05)，表明紅景天和穴位埋線(xiàn)均能影響Hb含量及動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)，改善模型大鼠的組織缺氧狀況。其中埋線(xiàn)B、C組較紅景天組Hb含量更低(P<0.01)，PaO2、PaCO2、SaO2更高(P<0.01，P<0.05)，表明造模后1周和造模前后各1周均給予穴位埋線(xiàn)治療，對(duì)Hb含量及動(dòng)脈血?dú)庥绊戄^紅景天更明顯；進(jìn)一步對(duì)3個(gè)埋線(xiàn)組間比較得出，埋線(xiàn)C組對(duì)Hb含量、PaO2、PaCO2、SaO2各項(xiàng)指標(biāo)的干預(yù)效果最為明顯(P<0.01)，即造模前后各1周均給予穴位埋線(xiàn)治療，對(duì)促進(jìn)高原缺氧的改善作用最佳。

表1 各組大鼠Hb含量及動(dòng)脈血?dú)?pH、PaO2、PaCO2、SaO2)分析比較

注：與空白組比較：△△P<0.01；與模型組比較：#P<0.05,##P<0.01；與紅景天組比較：▲P<0.05,▲▲P<0.01；與埋線(xiàn)B組比較：**P<0.01

3 討論

當(dāng)人們從平原地區(qū)快速進(jìn)入氧含量稀薄的高原地區(qū)時(shí)，常會(huì)發(fā)生急性高原病，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引發(fā)急性高原腦水腫、肺水腫等致命性疾病[5]。特殊的高原環(huán)境造成組織缺氧，機(jī)體會(huì)發(fā)生一系列生理和病理改變，血液系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等都可能受到嚴(yán)重影響，從而導(dǎo)致機(jī)體結(jié)構(gòu)與功能發(fā)生明顯改變[6]。

Hb的主要功能是載運(yùn)氧分子，是反映血氧運(yùn)載能力、血液循環(huán)能力及組織用氧能力的重要指標(biāo)[7]。而急性缺氧時(shí)，Hb含量迅速上升，因此恢復(fù)Hb含量是改善組織缺氧、緩解高原急性缺氧的重要靶點(diǎn)之一[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，穴位埋線(xiàn)可明顯降低模型大鼠的Hb含量，以埋線(xiàn)C組最為顯著，表明穴位埋線(xiàn)可有效預(yù)防和治療急性高原缺氧，并提示治療效果與埋線(xiàn)時(shí)機(jī)與頻次有關(guān)。

血?dú)夥治龀Ｓ糜诜从辰M織供氧與耗氧的情況，對(duì)機(jī)體暴露高原潛在損害的早期具有重要提示意義[8]。低壓缺氧環(huán)境下的PaO2降低，造成肺泡氣分壓也相應(yīng)降低，從而導(dǎo)致機(jī)體PaO2和SaO2降低，直接影響血液對(duì)組織氧的供應(yīng)。PaO2降低、刺激呼吸中樞，導(dǎo)致呼吸加深加快，從而使PCO2降低。PCO2的降低可以引起低碳酸血癥及呼吸性堿中毒，是衡量呼吸性酸堿平衡失調(diào)的重要指標(biāo)，用以反映肺泡通氣情況[8]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，3個(gè)埋線(xiàn)組PaO2、PaCO2、SaO2均較模型組顯著升高，尤以造模前后均給予埋線(xiàn)干預(yù)的埋線(xiàn)C組最為明顯。據(jù)此表明，穴位埋線(xiàn)可以提高急性高原缺氧大鼠的氧代謝動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)，增加肺通氣量和肺氣血交換能力，從而增加機(jī)體在低氧環(huán)境下對(duì)氧的利用，且治療效果與埋線(xiàn)時(shí)機(jī)與頻次有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，代償性呼吸加深加快，血液pH值最終降低并呈酸性[8]。正常血液pH浮動(dòng)幅度很小，而血液pH的細(xì)微改變對(duì)機(jī)體的影響或是其代表的意義又是重大的，呼吸功能是影響其變化的重要原因之一[9]。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)pH變化干預(yù)不明顯，可能正是由于pH本身浮動(dòng)范圍較小，PCO2緩解的程度不足以糾正偏離的血液pH，以及采血和檢驗(yàn)過(guò)程本身可能與外界空氣接觸等原因而造成的[10]。

大椎為督脈要穴，具有通上達(dá)下、通調(diào)振奮督陽(yáng)的作用，為治療急性病證的要穴。足三里為培元固本之要穴，被廣泛應(yīng)用于各科急慢性疾病的治療。有研究表明，針灸大椎或足三里穴可有效改善機(jī)體氧代謝能力，并提高全身機(jī)能的作用[11-12]，埋線(xiàn)更能發(fā)揮與延長(zhǎng)這種良性作用。相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，在大椎、足三里進(jìn)行穴位埋線(xiàn)能通過(guò)修復(fù)血管應(yīng)激性損傷，且顯著改善缺氧患者的心、腦、肺功能，對(duì)急性高原缺氧反應(yīng)具有良好的防治作用[13]。

急性高原缺氧是人們進(jìn)入高原地區(qū)的一大挑戰(zhàn)，亦是引發(fā)急性高原病的啟動(dòng)因子[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，穴位埋線(xiàn)可有效防治模型大鼠的急性高原缺氧癥狀，在蛋白線(xiàn)被吸收的過(guò)程中可對(duì)穴位產(chǎn)生長(zhǎng)時(shí)間的良性刺激作用，同時(shí)操作簡(jiǎn)便無(wú)不適感，這是傳統(tǒng)針刺或藥物所不具備的優(yōu)點(diǎn)，為急性高原缺氧的防治提供了簡(jiǎn)便有效的治療方法。

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