生物農(nóng)藥橄欖鯊和松螨鯊對朱砂葉螨及家蠶的毒力測試

田梅金 謝道燕

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所， 云南蒙自 661101)

朱砂葉螨(TetranychuscinnabarinusBoisduval)在我國分布廣泛，是棉花和多種蔬菜上危害嚴(yán)重而又難以防治的一種害螨。因其繁殖力強、世代周期短、活動范圍小、近親交配率高、適應(yīng)性強等特點[1]，致使朱砂葉螨對多數(shù)殺螨劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性[2-3]。田間防治過程中如果藥劑選用不當(dāng)，不僅影響防治效果，還會造成農(nóng)藥浪費和環(huán)境污染，嚴(yán)重時還會錯過防治適期，造成不可挽回的損失[4]。云南省的自然氣候環(huán)境特殊，春、夏、秋3個季節(jié)都是桑園主要害蟲危害的高峰期，所以桑園害蟲防治在蠶桑生產(chǎn)中具有重要作用[5]。化學(xué)藥劑防治仍是當(dāng)前防治朱砂葉螨的主要方法。然而，對蠶區(qū)桑園及周邊農(nóng)田朱砂葉螨的防治用藥，還必須以家蠶的安全性為前提，避免因使用殺蟲劑防治害蟲引起的家蠶中毒事件發(fā)生，以保證蠶桑產(chǎn)業(yè)的健康穩(wěn)定發(fā)展。因此，開展朱砂葉螨的防治研究，需要兼顧藥劑對家蠶安全性問題，使“保蟲”和“治蟲”高度統(tǒng)一，篩選出對朱砂葉螨成螨和螨卵高效且對家蠶安全的殺蟲劑，在一定程度上保護(hù)了天敵，減輕了環(huán)境污染，這對蠶桑產(chǎn)業(yè)的健康穩(wěn)定發(fā)展是十分必要的。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試藥劑 49%橄欖鯊軟皂水劑、87%松螨鯊松油乳劑，均為深圳百樂寶生物農(nóng)業(yè)科技有限公司與澳大利亞環(huán)球科技有限公司合資產(chǎn)品。

1.1.2 供試朱砂葉螨及螨卵 朱砂葉螨采自云南省蒙自市桑園，采集的朱砂葉螨于室內(nèi)溫度(26±1)℃、相對濕度(RH)60%～80%、光照時間14 h/d的條件下飼養(yǎng)數(shù)代后，用盆栽豇豆苗進(jìn)行飼養(yǎng)及擴大繁殖。在養(yǎng)蟲室內(nèi)飼養(yǎng)數(shù)代后視為相對敏感種群，抗性種群則是用炔螨特藥劑連續(xù)篩選數(shù)代后所得。用于藥劑室內(nèi)毒力測定試驗的成螨直接選自豇豆苗上發(fā)育至3～5日齡、大小一致、顏色鮮艷、行動活潑的雌成螨，移至面積約12 cm2的葉片上備用；供試螨卵則將大小一致的10頭雌成螨挑至面積約12 cm2的葉片上，讓其產(chǎn)卵24 h，然后移除雌成螨，當(dāng)卵齡在4～28 h后開始用于螨卵的毒力測定。

1.1.3 供試家蠶品種 菁松×皓月，由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所提供，選取其健康的3齡起蠶為供試對象。

1.1.4 主要儀器設(shè)備 Burkard標(biāo)準(zhǔn)型Potter噴霧塔，英國BURKARD科學(xué)儀器公司產(chǎn)品。

1.2 試驗方法

1.2.1 橄欖鯊和松螨鯊對室內(nèi)朱砂葉螨成螨的毒力測定 參照聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織(Food and Agriculture Organization，F(xiàn)AO)推薦的葉片殘毒法[6]并加以改進(jìn)為Potter噴霧處理的葉片殘毒法，噴霧量為1.0 mL藥液，噴霧壓強為20 kPa，沉降時間為10 s。將供試藥劑用清水分別稀釋成所需的6個系列濃度，橄欖鯊為8 166.67、5 444.44、4 083.33、3 266.67、2 722.22、2 333.33 mg/L，松螨鯊為8 700.00、4 350.00、2 175.00、1 087.50、543.75、271.88 mg/L，以等量清水處理為對照。每個濃度設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)30頭朱砂葉螨。噴藥后的朱砂葉螨置于同等條件下飼養(yǎng)48 h后調(diào)查成螨的死亡情況，建立毒力回歸方程。

1.2.2 橄欖鯊和松螨鯊對室內(nèi)朱砂葉螨螨卵的毒力測定 采用保濕葉碟噴霧法[7]測定橄欖鯊和松螨鯊對室內(nèi)朱砂葉螨螨卵的毒力大小。首先將菜豆葉片打成大小一致的葉碟(面積約12 cm2的葉片)，背面向上放置在盛有保濕濾紙的培養(yǎng)皿里，每皿3片葉碟，每片葉碟接10頭雌朱砂葉螨成螨產(chǎn)卵，產(chǎn)卵后去除雌朱砂葉螨成螨并調(diào)查朱砂葉螨卵基數(shù)，然后按1.2.1項的試驗設(shè)計從低劑量到高劑量的順序，用Potter噴霧塔進(jìn)行噴霧，每處理2.0 mL，沉降10 s，每處理3片葉碟，另設(shè)等量清水噴霧空白對照。于噴藥7 d后開始調(diào)查螨卵的孵化情況，以未孵化卵作為死卵計數(shù)，計算卵的孵化率，并建立毒力回歸方程。

1.2.3 橄欖鯊和松螨鯊對家蠶的急性毒性測定 在預(yù)備試驗的基礎(chǔ)上，采用食下毒葉法測定藥劑對家蠶的急性毒性。將橄欖鯊和松螨鯊用清水分別稀釋成6個濃度，橄欖鯊為16 333.33、12 250.00、9 800.00、8 166.67、7 000.00、6 125.00 mg/L，松螨鯊為2 900.00、2 175.00、1 740.00、1 450.00、1 242.86、1 087.50 mg/L，以清水處理為對照，每個處理重復(fù)3次，每個重復(fù)50頭3齡起蠶。從桑樹上采集展開的第2、第3片健康葉，擦凈葉面上的灰塵等附著物，對桑葉去除葉柄后，切成細(xì)條狀待用。每個重復(fù)稱取10 g桑葉，用10.0 mL供試藥液噴灑均勻，晾干后放入供試3齡起蠶的飼養(yǎng)盒內(nèi)給家蠶添毒；將添毒處理后的家蠶置于溫度26 ℃、RH 70%～75%、光照時間14 h/d的飼養(yǎng)室內(nèi)飼養(yǎng)，供試家蠶連續(xù)添食毒葉1個齡期，直至4齡起蠶，每隔24 h檢查死、活蠶頭數(shù)，觀察記錄存活個體中毒癥狀。并調(diào)查添食72 h內(nèi)的中毒死亡率和3齡眠蠶體質(zhì)量及4齡起蠶后饑餓48 h的死亡率。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 均采用Excel 2003和SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 橄欖鯊和松螨鯊對2個朱砂葉螨種群的室內(nèi)毒力

從表1可以看出，橄欖鯊對2個朱砂葉螨種群的成螨毒力最強，噴霧48 h后的半致死濃度(LC50)值分別為2 361.37 mg/L和2 326.24 mg/L，對螨卵的毒力較差，LC50值分別為127 999.39 mg/L和585 160.54 mg/L；松螨鯊對2個朱砂葉螨種群成螨的毒力比螨卵高，對敏感種群和抗性種群成螨的LC50相對毒力的計算是以殺蟲劑敏感種群成螨或螨卵的相對毒力為1.00，對其他螨態(tài)的相對毒力為同一殺蟲劑對成螨或螨卵的LC50除以其對應(yīng)螨態(tài)的LC50。

表1橄欖鯊和松螨鯊對不同發(fā)育期朱砂葉螨敏感種群和抗性種群噴霧48h后的室內(nèi)毒力

藥劑種群蟲態(tài)毒力回歸方程卡方值P值半致死濃度(LC50)相對毒力49%橄欖鯊軟皂水劑敏感成蟲y=-940+279x930005236137100卵y=-832+163x13208612799939100抗性成蟲y=-930+276x935005232624099卵y=-531+092x1160885851605445787%松螨鯊松油乳劑敏感成蟲y=-405+120x1551000235121100卵y=-488+136x3393000377874100抗性成蟲y=-559+160x412039321154137卵y=-717+203x4271000346966092

值分別為2 351.21 mg/L和3 211.54 mg/L，對敏感種群和抗性種群螨卵的LC50值分別為3 778.74 mg/L和3 469.66 mg/L。在測定的2個朱砂葉螨種群中，橄欖鯊對抗性種群螨卵的毒力是敏感種群螨卵的毒力的4.57倍，對成蟲的毒力則是抗性種群是敏感種群的0.99倍；松螨鯊對抗性種群成蟲的毒力是敏感種群成蟲的毒力的1.37倍，對螨卵的毒力則是抗性種群是敏感種群的0.92倍。

從表2可以看出，松螨鯊對2個朱砂葉螨種群的螨卵毒力最強，噴霧7 d后螨卵孵化率分別是13.27%～89.11%和9.90%～98.00%，橄欖鯊對敏感種群和抗性種群螨卵的孵化率分別是82.35%～89.62%和95.00%～98.88%；橄欖鯊和松螨鯊不同濃度藥液處理的螨卵孵化率均小于其對照處理。因此，橄欖鯊和松螨鯊對2個朱砂葉螨種群成螨的毒力比螨卵高，而對螨卵的毒力較差，但對螨卵的孵化有抑制作用。

2.2 橄欖鯊和松螨鯊添食家蠶72 h的急性毒性及家蠶的中毒癥狀

從表3可以看出，橄欖鯊添食濃度為6 125.00～16 333.33 mg/L的家蠶72 h后雖然未見中毒死亡蠶，但添食濃度為7 000.00～16 333.33 mg/L的家蠶有輕微中毒癥狀，主要表現(xiàn)為行動呆滯；添食濃度為表中數(shù)值均為3個重復(fù)的平均值。表3-4同。

表2橄欖鯊和松螨鯊對朱砂葉螨敏感種群和抗性種群螨卵孵化率的影響

藥劑濃度/(mg/L)螨卵孵化率/%朱砂葉螨敏感種群朱砂葉螨抗性種群49%橄欖鯊軟皂水劑81666782359500544444866097694083338679978032666787109793272222885297952333338962988887%松螨鯊松油乳劑870000132799043500065356196217500674263311087507797853754375882493552718889119800CK(清水對照)09205100

6 125.00 mg/L的家蠶未出現(xiàn)中毒癥狀。松螨鯊添食濃度為1 450.00～2 900.00 mg/L的家蠶出現(xiàn)輕微中毒和少量中毒死蠶，其中毒死亡率在0.87%～2.22%，主要表現(xiàn)為拒食、呆滯等癥狀，添食濃度為1 087.50～1 242.86 mg/L的家蠶未出現(xiàn)中毒癥狀。

表3橄欖鯊和松螨鯊不同濃度添食對3齡家蠶72h內(nèi)的急性中毒死亡率及中毒情況

藥劑濃度/(mg/L)24h中毒死亡率/%48h中毒死亡率/%72h中毒死亡率/%中毒癥狀49%橄欖鯊軟皂水劑1633333000呆滯、少數(shù)蠶膨胸、S型1225000000呆滯、少數(shù)蠶膨胸、輕微中毒980000000呆滯、擺頭、輕微中毒816667000呆滯、輕微中毒700000000呆滯、輕微中毒612500000無中毒癥狀87%松螨鯊松油乳劑29000002220呆滯、拒食、膨胸、S型21750001010呆滯、拒食、膨胸、輕微中毒17400008700呆滯、拒食、輕微中毒145000000少數(shù)蠶呆滯，輕微中毒124286000無中毒癥狀108750000無中毒癥狀CK(清水對照)0000無中毒癥狀

2.3 橄欖鯊和松螨鯊添食對3齡眠蠶體質(zhì)量及4齡起蠶后饑餓48 h的影響

微弱不良因素刺激會造成眠蠶體質(zhì)量變化和眠起不齊，因此，眠蠶體質(zhì)量是家蠶生長發(fā)育性狀中較為敏感的指標(biāo)之一[8]。從表4可以看出，橄欖鯊6個添食濃度雖然沒有造成家蠶中毒死亡，但對3齡眠蠶體質(zhì)量有所影響，其中添食濃度為9 800.00～16 333.33 mg/L和7 000.00 mg/L的3齡眠蠶體質(zhì)量與對照相比差異顯著；松螨鯊6個處理的眠蠶體質(zhì)量與對照相比均存在顯著差異。橄欖鯊和松螨鯊添食處理的4齡起蠶(家蠶4齡眠起后未給桑)饑餓48 h后觀察，發(fā)現(xiàn)所有添食處理組均有不同程度的死亡蠶，其死蠶癥狀為體縮、吐水、體褐色等，死亡率在16.36%～59.80%，而對照未見死亡蠶，說明橄欖鯊和松螨鯊添食處理后的家蠶出現(xiàn)慢性累積性中毒，且蠶體虛弱。

表4橄欖鯊和松螨鯊不同濃度添食對3齡眠蠶體質(zhì)量及4齡起蠶后饑餓48h的死亡率

藥劑濃度/(mg/L)3齡眠蠶體質(zhì)量/(g/頭)饑餓48h死亡率/%49%橄欖鯊軟皂水劑1633333018±000c59801225000018±000bc5222980000018±000bc5000816667019±001ab3786700000018±001bc3333612500019±000ab224587%松螨鯊松油乳劑290001017±000b5593217500017±001b3505174000018±000b3483145000017±000b2895124286018±000b1667108750018±000b1636CK(清水對照)0020±000a0

表中同列數(shù)據(jù)后的不同小寫英文字母表示差異顯著(P<0.05，Duncan新復(fù)極差測驗)。

3 小結(jié)與討論

橄欖鯊是一種廣譜觸殺型殺蟲、殺螨劑，其殺蟲機理為通過強力的親脂活性溶解昆蟲表皮蠟質(zhì)層和角質(zhì)層蛋白，破壞其表皮結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物的泄露和脫水而死亡，適合有機農(nóng)業(yè)。鄭惠普等[9]通過橄欖鯊防治黃瓜蚜蟲、白粉虱、白粉病田間藥效試驗結(jié)果分析認(rèn)為，濃度為6 533.33 mg/L對蚜蟲的防控效果最佳，其次是4 900.00 mg/L；橄欖鯊這2個濃度的溶液均能對白粉病有很好的防控效果，并且對作物黃瓜安全。本研究中橄欖鯊濃度為4 083.33～8 166.67 mg/L對朱砂葉螨敏感種群和抗性種群成螨的殺蟲效果較好，朱砂葉螨死亡率分別是71.11%～98.89%和91.11%～97.78%，而濃度低于4 083.33 mg/L的殺蟲效果較差，朱砂葉螨死亡率分別是57.78%～62.22%和0.08%～56.67%；與鄭惠普等[9]報道一致。松螨鯊是一種觸殺型高效生物殺螨劑，對環(huán)境友好。其殺蟲機理為藥液與害螨接觸后，脂肪酸酯液滴迅速而精確地滲入并破壞朱砂葉螨的氣孔結(jié)構(gòu)，通過窒息造成若螨和成螨的迅速死亡，適合有機農(nóng)業(yè)。李玉萍等[10]研究結(jié)果表明，松螨鯊在稀釋液濃度為1 740.00～1 087.50 mg/L范圍內(nèi)對辣椒紅蜘蛛的防治效果較好，且對作物辣椒安全。本研究試驗結(jié)果與李玉萍等[10]研究結(jié)果不一致，可能是本試驗所選的朱砂葉螨長期使用單一的同種殺螨劑而造成朱砂葉螨對部分新型殺蟲劑的敏感性降低，另外由于供試害螨的采集點不同，對藥劑敏感性也會存在差異。本研究中松螨鯊濃度為4 350.00～8 700.00 mg/L對朱砂葉螨敏感種群和抗性種群成螨的殺蟲效果最佳，死亡率分別是73.33%～81.11%和46.67%～56.67%，而濃度低于2 175.00 mg/L對朱砂葉螨的殺蟲效果較差，死亡率分別是17.67%～35.56%和9.93%～19.96%。松螨鯊對2個朱砂葉螨種群的螨卵毒力最強，即噴霧7 d后螨卵孵化率分別是13.27%～89.11%和9.90%～98.00%；橄欖鯊對2個朱砂葉螨種群螨卵的毒力較差，其噴霧7 d后孵化率分別是82.35%～89.62%和95.00%～98.88%；雖然橄欖鯊和松螨鯊對螨卵的殺卵效果較差，但對螨卵的孵化有抑制作用。

家蠶是中國重要的經(jīng)濟昆蟲，是農(nóng)藥使用時保護(hù)的非靶標(biāo)生物。研究證明，農(nóng)藥對昆蟲的毒性并非都表現(xiàn)為急性致死效應(yīng)，蟲酰肼及其衍生物0593對家蠶的毒性表現(xiàn)較為緩慢，至96 h表現(xiàn)出較明顯的致毒效應(yīng)，齡期提前、家蠶取食量減小、生長受阻和繁殖力降低等[11]；亞致死劑量的農(nóng)藥雖不能使家蠶直接致死，但可使家蠶幼蟲眠起不齊，眠蠶體質(zhì)量減輕，發(fā)育歷期延長，而且對食物利用有明顯的影響，亞致死劑量的農(nóng)藥中毒家蠶由于饑餓造成消化液減少，消化酶活性減弱，使得食物利用率和轉(zhuǎn)化率降低，導(dǎo)致家蠶體質(zhì)下降[12-13]。本試驗通過調(diào)查橄欖鯊6個濃度對3齡家蠶72 h內(nèi)的急性中毒死亡率及中毒情況發(fā)現(xiàn)，6個濃度添食72 h內(nèi)雖然沒有造成家蠶中毒死亡，但對3齡眠蠶體質(zhì)量有所影響，特別是添食高濃度橄欖鯊藥液的3齡眠蠶體質(zhì)量與對照相比差異顯著；添食高濃度松螨鯊藥液造成少數(shù)蠶中毒死亡，添食低濃度松螨鯊藥液雖未造成家蠶中毒死亡，但松螨鯊6個濃度的3齡眠蠶體質(zhì)量與對照相比均存在顯著差異。

綜上所述，橄欖鯊在4 083.33～8 166.67 mg/L推薦濃度范圍內(nèi)使用對朱砂葉螨敏感種群和抗性種群的成螨有較好的殺滅作用，且對家蠶毒性較低，具有可在蠶區(qū)用于防治桑園朱砂葉螨及在其他作物螨蟲的應(yīng)用前景；但松螨鯊在4 350.00～8 700.00 mg/L超過推薦使用濃度范圍時才對2個種群的朱砂葉螨有較好的殺滅作用，而在1 740.00～870.00 mg/L推薦使用濃度范圍內(nèi)對2個種群朱砂葉螨的殺滅作用較差，因此田間防治桑園朱砂葉螨時建議選用橄欖鯊軟皂水劑。橄欖鯊和松螨鯊對朱砂葉螨以外的其他害蟲的殺滅作用或田間防治效果有待進(jìn)一步試驗證實。

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叢書共5部。第1部《栽桑學(xué)原理》闡述優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)桑葉生產(chǎn)的方法和原理，第2部《蠶種學(xué)原理》講述“無毒”蠶種生產(chǎn)的方法和原理，第3部《養(yǎng)蠶學(xué)原理》論述優(yōu)質(zhì)制絲原料繭生產(chǎn)的方法與原理，這3部專著共同構(gòu)成了廣義養(yǎng)蠶學(xué)的理論和技術(shù)體系。叢書第4部《昆蟲免疫學(xué)原理》在全面深刻闡述昆蟲免疫學(xué)基礎(chǔ)理論、基本原理的基礎(chǔ)上，提供了大量現(xiàn)代昆蟲免疫學(xué)研究的范例，包括蠶體免疫學(xué)研究的成果。叢書第5部《家蠶性別控制原理》譯著(原著作者是俄羅斯科學(xué)院院士、原蘇聯(lián)遺傳學(xué)會會長斯特隆尼科夫)闡述家蠶生殖遺傳、性別控制原理與雜種優(yōu)勢利用。

叢書內(nèi)容豐富，寫作規(guī)范，文句流暢，圖文并茂，理論聯(lián)系實際，從宏觀到微觀，既深刻闡明了基本理論，又詳盡地介紹了基礎(chǔ)知識和關(guān)鍵技術(shù)；不僅可以作為大專院校蠶學(xué)專業(yè)的教科書、科研院所蠶業(yè)科技人員的參考書，也適合農(nóng)村廣大蠶桑生產(chǎn)者、各級蠶業(yè)生產(chǎn)管理干部學(xué)習(xí)。

叢書定價均為60元/冊，郵寄費10元/冊；可以整套訂購，也可單冊購買。郵局或銀行匯款均可，單位名稱：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所，開戶行：江蘇省鎮(zhèn)江市工行潤州支行，帳號：1104055109000013982。

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