理化鑒定新技術(shù)與新方法在中藥鑒定中的應(yīng)用

蔡靈芝

【摘要】本文對(duì)近10年理化鑒定新技術(shù)與新方法在中藥鑒定中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述，并對(duì)常用方法進(jìn)行了舉例、總結(jié)和展望。理化鑒定新技術(shù)與新方法具有重復(fù)性好、鑒定準(zhǔn)確、樣品處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在中藥的鑒定以及中藥質(zhì)量的控制與評(píng)價(jià)具有重大意義和發(fā)展前景。

【關(guān)鍵詞】中藥;理化鑒定;新技術(shù)與新方法

中藥材絕大多數(shù)來源于動(dòng)植物，自西方生藥學(xué)鑒定方法體系引入中國形成了基原鑒定、形態(tài)鑒定、顯微鑒定和理化鑒定四類傳統(tǒng)中藥鑒定方法。如何根據(jù)中藥特殊性表征或特征性狀準(zhǔn)確有效、便捷實(shí)用的鑒別中藥材一直是中藥鑒定方法和技術(shù)發(fā)展前進(jìn)的方向。鑒定方法的便捷實(shí)用、高效準(zhǔn)確對(duì)保證用藥質(zhì)量與安全以及中藥現(xiàn)代發(fā)展具有重要意義。王學(xué)勇等[1]根據(jù)性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定、DNA鑒定法等中藥主要鑒定方法進(jìn)行技術(shù)性、靈敏度、準(zhǔn)確性、重復(fù)性、便捷性以及費(fèi)用等性能比較，結(jié)果表明理化鑒定法在技術(shù)性、靈敏度、重復(fù)性上性能與DNA鑒定法相當(dāng)，且便捷性強(qiáng)于DNA鑒定，費(fèi)用低于DNA鑒定，綜合比較之下，理化鑒定法是中藥鑒定方法中繼DNA鑒定為最實(shí)用和實(shí)惠的方法。本文對(duì)近10年理化鑒定新技術(shù)與新方法在中藥鑒定中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述和總結(jié)，并對(duì)其發(fā)展方向進(jìn)行展望。

理化鑒定是應(yīng)用物理和化學(xué)相關(guān)方法，對(duì)中藥所含有效或特征性成分進(jìn)行定性和定量分析，隨著紅外光譜、X射線衍射、核磁共振等光譜和高效液相、氣相、毛細(xì)管電泳等色譜鑒定技術(shù)手段的發(fā)展，中藥理化鑒定的系統(tǒng)方法己不斷完善。目前，理化鑒定技術(shù)和方法主要包括：理化性質(zhì)鑒定、光譜鑒定技術(shù)、色譜鑒定技術(shù)以及色譜一光譜聯(lián)用鑒定技術(shù)。

1 理化性質(zhì)鑒定

理化性質(zhì)鑒定是針對(duì)中藥所含主要化學(xué)成分，采用熒光法、顯色法、沉淀法、升華法、結(jié)晶法等物理或化學(xué)方法進(jìn)行鑒別，另外也可應(yīng)用薄層色譜法（Ⅱ℃）將對(duì)照品、對(duì)照藥材或?qū)φ仗崛∥镞M(jìn)行對(duì)照鑒定。李鳳玲根據(jù)中藥的某些成份能在常光或紫外光燈下產(chǎn)生熒光的性質(zhì)總結(jié)了大黃、川芎、丹參等30種常用中藥的熒光鑒別方法該方法可對(duì)中藥進(jìn)行初步鑒別。林苗等[3]應(yīng)用沉淀法對(duì)山豆根及其混淆品朱砂根進(jìn)行了鑒別，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相同的處理方法結(jié)果山豆根生成淡黃色沉淀，朱砂根無沉淀生成。鑒于目前中藥市場(chǎng)偽品和混淆品日益增多，熒光鑒別法和沉淀法作為性狀鑒別的補(bǔ)充對(duì)中藥進(jìn)行初步鑒別。理化性質(zhì)鑒定只能對(duì)中藥進(jìn)行初步的鑒定，如果需要精確鑒定中藥的還需應(yīng)用現(xiàn)代光譜和色譜技術(shù)。

2 光譜鑒定技術(shù)

光譜鑒定通過研究中藥光譜學(xué)行為，并對(duì)其理化性進(jìn)行分析。常見的光譜分析技術(shù)包括紅外光譜、X射線衍射、核磁共振光譜、紫外一可見光譜法等以混合組分整體特征分析的光譜技術(shù)，其中紅外光譜與核磁共振光譜應(yīng)用較為廣泛。

紅外光譜具有極強(qiáng)的指紋特征性，中藥的紅外光譜為其所含成分的光譜特征疊加，中藥所含組分種類越多，其紅外光譜上各種譜峰的疊加就會(huì)越嚴(yán)重，導(dǎo)致中藥的鑒別變得困難，因此和其他光譜或色譜同時(shí)使用鑒定準(zhǔn)確度會(huì)更高。陳斌等[3]建立了一種近紅外光譜測(cè)定六味地黃丸指紋圖譜的方法，應(yīng)用毛細(xì)管電泳法建立六味地黃丸指紋圖譜，計(jì)算其相似度，同時(shí)測(cè)定其近紅外光譜，建立六味地黃丸指紋圖譜相似度與近紅外光譜之間的數(shù)學(xué)模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明表明六味地黃丸指紋圖譜相似度實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間有較好的線性關(guān)系，基于指紋圖譜的近紅外光譜法用于六味地黃丸的質(zhì)量控制具有可行性。核磁共振氫譜是中藥指紋圖譜中鑒定和控制中藥質(zhì)量的新方法，姜陽明等[4]采用CPMG脈沖序列采集了杜仲提取物的1H NMR譜，通過完整還原振幅頻率表分析技術(shù)對(duì)杜仲指紋圖譜進(jìn)行特征指紋分析，對(duì)杜仲的特征化合物一松脂醇二葡萄糖苷（PinoresinolGlucoside， PDG）進(jìn)行了定性和定量分析。另外，該方法可用于鑒定不同產(chǎn)地的藥材，具有一定的實(shí)用意義。

3 色譜鑒定技術(shù)

色譜鑒定主要以分析中藥藥材結(jié)構(gòu)組織、成分構(gòu)成等為主，其能準(zhǔn)確地反映中藥中的化學(xué)組分和數(shù)量分布等特征。高效色譜技術(shù)主要應(yīng)用于中藥指紋圖譜，通過色譜技術(shù)對(duì)中藥所含化合物進(jìn)行分離和檢測(cè)，得到表征各類成分的色譜峰，通過色譜峰的相關(guān)參數(shù)的特異性構(gòu)建相應(yīng)的化學(xué)指紋圖譜。不同的中藥指紋圖譜能特異性的反映出其精細(xì)化學(xué)構(gòu)成特征，通過圖譜比可對(duì)中藥進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。常見的色譜分析技術(shù)主要包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）、薄層色譜法（TLC）以及高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）。GC適用于中藥中可揮發(fā)性且熱穩(wěn)定性的藥材，HPCE是具有高分辨率、高效率等優(yōu)勢(shì)色譜分析技術(shù)，常用于于中藥的水溶性成分以及蛋白等大分子成分，GC和HPCE是HPLC色譜分析技術(shù)的有效補(bǔ)充。

陶盛昌等[7]通過建立流蘇石斛HPLC特征圖譜，并初步比較黃草類石斛（金釵石斛、流蘇石斛、疊鞘石斛）HPLC特征圖譜特征分析方法，并采用國家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2004A）版進(jìn)行相似度分析，結(jié)果顯示流蘇石斛HPLC特征圖譜的方法穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好，能在一定程度上能夠反映金釵石斛、流蘇石斛、疊鞘石斛3種石斛主要化學(xué)成分的種類和相對(duì)含量差異，并為流蘇石斛與另外兩種黃草石斛的鑒別提供依據(jù)。吳芳等[5]建立了周氏克金巖方（紅花、麥冬、蘇木、仙鶴草、魚腥草、貓爪草等）中5個(gè)揮發(fā)油成分定量測(cè)定方法，比較配伍前后含有量變化特征，結(jié)果表明周氏方揮發(fā)油指標(biāo)性成分量在配伍前后有明顯變化，該方法還初步反映了該方配伍減毒增效的合理性。

4 色譜一光譜聯(lián)用鑒定技術(shù)

色譜一光譜聯(lián)用技術(shù)可以同時(shí)展現(xiàn)化合物組分?jǐn)?shù)和量的特性，并與中藥材質(zhì)量優(yōu)劣有直接聯(lián)系，是中藥材精細(xì)鑒定的必要方法。紅外光譜一質(zhì)譜分析（IR-MS）、高效液相色譜一質(zhì)譜分析（HPLC-MS）、高效毛細(xì)管電泳一質(zhì)譜（HPCE-MS）、氣相色譜一質(zhì)譜（GC-MS）等均是色譜一光譜聯(lián)用典型技術(shù)，其中HPLC-MS和GC-MS應(yīng)用最為廣泛。

HPLC-MS通過高效液相進(jìn)行化學(xué)成分分離，再經(jīng)質(zhì)譜進(jìn)行成分檢測(cè)和解析，兩者相結(jié)合可對(duì)中藥未知成分進(jìn)行定性、并初步確認(rèn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)。李定祥等[6]建立坤泰膠囊中化學(xué)成分的高效液相色譜一電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-ESI-MS/MS）并對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行初步鑒定，通過對(duì)各色譜峰質(zhì)譜圖進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示從坤泰膠囊中鑒定了21個(gè)化合物，主要為黃酮類化合物和生物堿類化合物，并對(duì)化合物的藥材來源進(jìn)行了歸屬。GC-MS是分析和鑒別含揮發(fā)性、半揮發(fā)性成分中藥的首選技術(shù)，何剛等[10]建立了氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）對(duì)魚腥草鮮品揮發(fā)油中4一萜品醇、α松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮4種成分的含量測(cè)定方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明4一萜品醇、α一松油醇、乙酸龍腦酯和甲基正壬酮在不同濃度的線性關(guān)系良好，且可同時(shí)測(cè)定多指標(biāo)成分評(píng)價(jià)魚腥草質(zhì)量，能有效的反映魚腥草質(zhì)量，可用于鮮魚腥草藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

5 總結(jié)與展望

色譜技術(shù)、光譜技術(shù)及色譜一光譜聯(lián)用技術(shù)因更為精細(xì)準(zhǔn)確己被廣泛應(yīng)用于重要的分析與鑒定。光譜鑒定技術(shù)雖然可對(duì)大部分中藥材進(jìn)行圖譜測(cè)定，再通過圖譜比對(duì)進(jìn)行鑒定，但其對(duì)數(shù)據(jù)庫依賴性較高，而且對(duì)于圖譜相似的藥材可能出現(xiàn)誤判，因此，圖譜數(shù)據(jù)庫的建立與完善是今后光譜鑒定技術(shù)的重點(diǎn)與難點(diǎn)，需要更多地研究者共同努力。色譜鑒定技術(shù)基于大量的樣本和復(fù)雜的方法學(xué)考察，可以同時(shí)展現(xiàn)重要組分?jǐn)?shù)和量的特性，因此，單個(gè)樣本的方法學(xué)考察研究力度與范圍深入與中藥樣本數(shù)據(jù)庫擴(kuò)大是色譜技術(shù)發(fā)展著重點(diǎn)。色譜一光譜聯(lián)用鑒定技術(shù)可對(duì)中藥進(jìn)行定性定量的分析與鑒定，是目前中藥理化鑒定中最為準(zhǔn)確有效的技術(shù)與方法，但是其對(duì)儀器要求較高、耗費(fèi)較為更大。色譜技術(shù)、光譜技術(shù)和色譜一光譜聯(lián)用等理化鑒定技術(shù)具有技術(shù)重復(fù)性好、鑒定準(zhǔn)確、樣品處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，其在中藥質(zhì)量的控制與評(píng)價(jià)具有重大意義和發(fā)展前景。如何有效的選擇合適的技術(shù)與方法對(duì)中藥進(jìn)行鑒定是中藥鑒定工作者在中藥鑒定工作的關(guān)鍵點(diǎn)，也是我們中藥鑒定工作者學(xué)習(xí)的方向。

參考文獻(xiàn)

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