XAF1、CHD5表達(dá)與卵巢漿液性腺癌預(yù)后的相關(guān)性研究

王 芳 毛小剛

卵巢癌是世界各地主要致死的婦科惡性腫瘤。由于腹腔內(nèi)卵巢腫瘤的隱匿性，所以往往發(fā)現(xiàn)腫瘤時已處于晚期階段。目前標(biāo)準(zhǔn)的治療方法主要是手術(shù)切除和全身性化療方案包括鉑類藥物。順鉑為基礎(chǔ)藥物的化療方案一直為晚期卵巢上皮癌的治療標(biāo)準(zhǔn)[1]。凋亡抑制蛋白(XIAP)的抑制劑被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡蛋白的最有效的抑制劑之一。XIAP相關(guān)因子1(XAF1)被視為1種新型的XIAP的結(jié)合配偶體，可以扭轉(zhuǎn)XIAP的抗凋亡作用[2]。XAF1水平在許多腫瘤細(xì)胞系中大大減少，包括卵巢癌細(xì)胞。CHD5 是 1P36 的腫瘤的關(guān)鍵抑制基因，CHD5 表達(dá)下調(diào)和腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。二者可以對卵巢腫瘤的生物學(xué)行為和腫瘤危害性進(jìn)行判定， 對腫瘤細(xì)胞增殖活性有效的反映。故我們研究了XAF1、CHD5和卵巢腫瘤漿液性腺癌的病理特征關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

回顧性分析2010至2013年的卵巢腫瘤漿液性腺癌患者60例臨床資料，年齡29～78歲，平均53歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：確診的卵巢腫瘤漿液性腺癌；術(shù)后全程化療至少8個療程；無感染性疾病、糖尿??；高血壓；肝腎甲狀腺功能異常以及自身免疫性疾病等。本研究遵循第7版TNM惡性腫瘤的分期指導(dǎo)原則。

1.2 組織樣本

組織標(biāo)本固定于10%的中性緩沖福爾馬林中。組織進(jìn)行石蠟包埋，蘇木精-伊紅染色進(jìn)行組織學(xué)評價。染色強(qiáng)度評級為0(不著色)，1(弱染色=淺黃色)，2(中度染色=黃棕色)和3(強(qiáng)染色=棕色)。無患者接受術(shù)前治療。本研究獲得患者知情同意書和醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.3 免疫組化法

脫蠟和抗原修復(fù)后，將切片浸于H2O2(10 min)，以抑制內(nèi)源性過氧化物酶的活性。隨后采用山羊血清(30 min)處理。將切片用PBS洗滌，并底物(DAB)溫育2～5 min。陰性對照省略了初級抗體。細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色染色則認(rèn)為是陽性。陽性細(xì)胞率≤5%為0，6%～25%為1，26%～50%為2，>50%為3。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0軟件包統(tǒng)計分析。XAF1，CHD5和腺癌的臨床病理參數(shù)相關(guān)性采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。Kaplan-Meier法、對數(shù)秩檢驗(yàn)和多變量Cox比例風(fēng)險回歸分析生存率。數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用logistic回歸分析XAF1，CHD5低表達(dá)為卵巢漿液性腺癌的危險因素。P值<0.05認(rèn)為存在統(tǒng)計學(xué)顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化染色XAF1和CHD5

卵巢漿液性腺癌Ⅱ期26例，Ⅲ期14例，Ⅳ期20例；組織學(xué)分級G121例；G214例；G325例。XAF1的染色主要集中于上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。腫瘤細(xì)胞的陽性染色比例為0～85%。XAF1高表達(dá)與腫瘤組織分級(P=0.030)相關(guān)，雖與臨床分期(P=0.099)相關(guān)，但不顯著。此外，相比于對照組，卵巢漿液性腺癌患者CHD5表達(dá)水平偏低。且CHD5低表達(dá)與淋巴結(jié)狀態(tài)、患者年齡、腫瘤分期、分級、臨床分期無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 XAF1、CHD5表達(dá)與卵巢漿液性腺癌臨床病理因素的關(guān)系(例，%)

2.2 生存狀況分析

生存分析顯示，XAF1低表達(dá)患者與腫瘤高分化有關(guān)且患者無病生存期和總生存時間低于對照組(P=0.013)。CHD5低表達(dá)患者的無病生存期和總生存時間也低于對照組患者(P<0.05)。Cox比例風(fēng)險回歸分析表明，XAF1和CHD5低表達(dá)是卵巢漿液性腺癌的獨(dú)立預(yù)后不良因素，見表2，表3。

表2 多變量Cox比例風(fēng)險回歸模型分析患者無病生存時間

表3 多變量Cox比例風(fēng)險回歸模型分析患者總體生存時間

2.3 Logistic回歸分析XAF1低表達(dá)與卵巢漿液性腺癌發(fā)病及轉(zhuǎn)移的危險因素分析

研究結(jié)果顯示，XAF1、CHD5低表達(dá)是卵巢漿液性腺癌危險因素，其中XAF1低表達(dá)，OR=0.30，95%CI：0.14～0.63，P=0.647。從轉(zhuǎn)移風(fēng)險上看，XAF1低表達(dá)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，OR=4.35，95%CI：1.39～13.63，P=0.012，XAF1低表達(dá)卵巢漿液性腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險增加4.35倍。

2.4 Logistic回歸分析CHD5低表達(dá)與卵巢漿液性腺癌發(fā)病及轉(zhuǎn)移的危險因素分析

研究結(jié)果顯示，CHD5低表達(dá)，OR=2.936，95%CI：1.198～7.246，0.019；而CHD5低表達(dá)卵巢漿液性腺癌的發(fā)病風(fēng)險增加28%；CHD5低表達(dá)的淋巴轉(zhuǎn)移風(fēng)險，OR=1.846，95%CI：1.148～2.965，0.015；CHD5低表達(dá)卵巢漿液性腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險增加27%。

3 討論

卵巢腫瘤漿液性腺癌是最常見的婦科腫瘤之一，盡管對卵巢癌的診斷和治療技術(shù)不斷的提高，但是該病的預(yù)后仍不理想，多數(shù)患者患病后初次就診已經(jīng)伴有廣泛的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移，就已處于該病的晚期，失去根治手術(shù)的機(jī)會，耽誤了治療的最佳的時機(jī)，早期診斷對疾病的及時發(fā)現(xiàn)及治療具有重要的臨床意義。該疾病標(biāo)準(zhǔn)治療方案是 OPCS(腫瘤細(xì)胞減滅術(shù))聯(lián)合術(shù)后化療，但是由于晚期患者腫瘤組織轉(zhuǎn)移廣泛、鄰近組織浸潤嚴(yán)重，該治療方案不適于晚期卵巢癌腫瘤患者，治療有效率僅有 20%～30%[3]。

通過大量的臨床研究發(fā)現(xiàn)，癌癥特異性基因是一類在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮重要生物學(xué)效應(yīng)的的分子。目前對腫瘤組織中癌癥特異性基因表達(dá)的機(jī)制尚未研究清楚，發(fā)現(xiàn)了相當(dāng)多表型和功能出現(xiàn)一定的差異性。隨著生物信息學(xué)的發(fā)展，癌癥特異性基因在腫瘤中的相關(guān)研究越來越深入，研究發(fā)現(xiàn)癌癥特異性基因參與者各類腫瘤的生長、發(fā)育，與腫瘤細(xì)胞的增殖凋亡以及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，涉及到各類腫瘤的發(fā)生發(fā)展，且癌癥特異性基因的表達(dá)譜還決定著腫瘤的基因反應(yīng)，在腫瘤亞型、轉(zhuǎn)移等臨床病理因素中發(fā)揮著重要作用，尤其對于術(shù)后的生存期及預(yù)后具有一定的相關(guān)性，癌癥特異性基因通常與腫瘤的發(fā)生和消除相關(guān)，同時揭示癌基因和抑癌基因的位置。1p36的缺失是很常見的遺傳病變且出現(xiàn)在多種人類癌癥中包括神經(jīng)元，上皮細(xì)胞和造血系統(tǒng)惡性腫瘤。這表明，1p36可能含有誘導(dǎo)、失活及促進(jìn)癌癥發(fā)生和/或發(fā)展的基因[4]。CHD5 是 1P36 上的關(guān)鍵腫瘤抑制基因，CHD5 表達(dá)下調(diào)和腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)CHD5特異性蛋白質(zhì)， CHD5在卵巢腫瘤中表達(dá)下調(diào)引起Hela 細(xì)胞 ，利于G1/S檢驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)入S期 ，引起細(xì)胞增殖過度[5]。Bagchi等[6]通過小鼠基因研究獲得人類1p36基因的缺失情況。他們證明CHD5具有抑制體內(nèi)腫瘤的功能。這種抑癌功能為探索和創(chuàng)新臨床干預(yù)提供了新途徑。

本研究中，我們探討XAF1和CHD5表達(dá)對卵巢漿液性腺癌和總生存期的影響。卵巢漿液性腺癌患者的XAF1蛋白表達(dá)顯著降低，CHD5在惡性組織比非惡性組織表達(dá)低。我們發(fā)現(xiàn)低XAF1水平與組織學(xué)分級有關(guān)而不與組織學(xué)類型，淋巴結(jié)狀態(tài)和FIGO分期無關(guān)[7]。XAF1 可以拮抗 X 染色體連鎖凋亡抑制因子抗凋亡作用的蛋白，是潛在腫瘤抑制因子。另外 XAF1 可能是新的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，對 G2/M 檢查點(diǎn)，過表達(dá)的 XAF1 促使 G2/M 細(xì)胞周期發(fā)生停滯，進(jìn)而抑制細(xì)胞生長[8]。血管生成被認(rèn)為是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的至關(guān)重要因素。我們發(fā)現(xiàn)XAF1P表達(dá)與血管生成相關(guān)。免疫組織化學(xué)顯示XAF1表達(dá)和微血管密度呈負(fù)相關(guān)，這表明XAF1可參加腫瘤的血管生成，這可以解釋患者預(yù)后差與XAF1低表達(dá)的相關(guān)性[9]。但是XAF1介導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞血管生成機(jī)制有待進(jìn)一步澄清。順鉑為基礎(chǔ)的化療是卵巢癌目前首選的治療方法。然而，順鉑耐藥性是主要的障礙，限制治療的成功率。XAF1在腫瘤細(xì)胞減少表達(dá)或失活，可以阻礙如5-氟尿嘧啶，依托泊苷，H2O2，γ射線，紫外線和腫瘤壞死因子α引起的凋亡[10]。卵巢漿液性腺癌患者CHD5基因是1種潛在的分子標(biāo)記和(或)治療這種癌癥的靶點(diǎn)。CHD5表達(dá)下降為患者無疾病生存和總生存的不良獨(dú)立預(yù)測因子。因此，CHD5在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)可視為1種分子標(biāo)記，能夠確定需要深入監(jiān)測或積極治療的高?；颊?。此外， CHD5的改變也可以提供針對性的輔助治療新途徑。

綜上所述，卵巢漿液性腺癌患者體內(nèi)的XAF1、CHD5表達(dá)均下降，縮短無病生存期和總體生存期，但是二者與卵巢漿液性腺癌的關(guān)系，可指導(dǎo)臨床合理治療和準(zhǔn)確預(yù)后判斷具有重要的臨床意義。

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