非編碼RNA調(diào)控巨噬細(xì)胞極化的研究進(jìn)展

魏文燕，陳建英

(廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，廣東湛江 524001)

巨噬細(xì)胞按表型和分泌的細(xì)胞因子主要分為兩種不同的極化類型，即發(fā)揮“促炎和殺傷”作用的M1型極化和主導(dǎo)“抗炎和修復(fù)”功能的M2型極化。在不同的疾病或炎性微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞不同的極化表型對(duì)機(jī)體穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)有重要意義。近年來巨噬細(xì)胞極化受到廣泛關(guān)注，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，非編碼RNA可靶向調(diào)控巨噬細(xì)胞極化通路中的關(guān)鍵蛋白而影響巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)，介導(dǎo)多種疾病的發(fā)生發(fā)展。本文就非編碼RNA，如微小RNA(miRNA)、長(zhǎng)鏈非編碼RNA (lncRNA)和環(huán)狀RNA(circRNA)在調(diào)控巨噬細(xì)胞極化中的重要作用作一綜述。

1 巨噬細(xì)胞極化的概述

巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫的重要組成部分，一方面能夠吞噬、殺傷和清除外源性病原微生物和體內(nèi)損傷、衰老的細(xì)胞，在機(jī)體天然免疫中發(fā)揮重要作用；另一方面可攝取、處理抗原并提呈給T細(xì)胞識(shí)別，介導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答。巨噬細(xì)胞具有較強(qiáng)的可塑性和異質(zhì)性，在不同因素誘導(dǎo)下，巨噬細(xì)胞可分化為行使特定免疫功能的不同細(xì)胞亞群。按照其表型和活化狀態(tài)不同主要分為兩種極化類型[1]，即經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞(M1型巨噬細(xì)胞)和替代活化巨噬細(xì)胞(M2型巨噬細(xì)胞)。M1型巨噬細(xì)胞呈圓形，可由干擾素-γ(IFN-γ)或脂多糖(LPS)單用或與其他細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子(TNF)協(xié)同誘導(dǎo)，表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類、CD68、CD80及CD86共刺激分子，可產(chǎn)生多種促炎因子，如TNF-α、IL-12、IL-18、IL-23、IFN-γ、氧自由基和NO等，M1型巨噬細(xì)胞既可抵抗病原入侵，也可在特定條件下造成組織損傷。M2型巨噬細(xì)胞為纖維細(xì)胞樣形狀，基于不同的刺激，可以進(jìn)一步分為M2a、M2b和M2c亞群。IL-4或IL-13與相應(yīng)受體結(jié)合可刺激產(chǎn)生高表達(dá)CD206的M2a亞型；免疫復(fù)合物Toll樣受體或IL-1R的激動(dòng)劑則誘導(dǎo)產(chǎn)生M2b亞型，產(chǎn)生促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎因子IL-10；糖皮質(zhì)激素和IL-10是觸發(fā)M2c亞型的主要介質(zhì)，可釋放大量的IL-10和TGF-β。M2型巨噬細(xì)胞主要在組織修復(fù)與重建、脂類代謝、過敏反應(yīng)和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用。

2 miRNA對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響

miRNA是天然存在的長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，通過與靶基因mRNA結(jié)合，抑制其翻譯或使其降解，在轉(zhuǎn)錄后水平靶調(diào)控基因表達(dá)。miRNA可通過調(diào)控巨噬細(xì)胞極化在感染、腫瘤生長(zhǎng)、炎癥活化等多種病理過程中發(fā)揮重要作用。

2.1 促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞極化的miRNA

2.1.1 miR-27a Yao等[2]研究發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞和動(dòng)物水平過表達(dá)miR-27a可通過抑制過氧化物酶體增殖劑激活受體γ(PPARγ)基因表達(dá)促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型極化，降低葡萄糖耐量和胰島素耐受性，為肥胖癥的炎癥和胰島素抵抗提供新的干預(yù)靶點(diǎn)。Ma等[3]報(bào)道，miR-23a/27a/24-2簇與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞極化密切相關(guān)。M1型刺激可以通過促進(jìn)核轉(zhuǎn)錄因-κB(NF-κB)與該基因簇的啟動(dòng)子的結(jié)合下調(diào)基因簇活性，過表達(dá)miR-23a反過來靶向抑制NF-κB通路抑制劑A20進(jìn)而激活NF-κB通路活性，增加促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。miR-23a和miR-27a可分別通過抑制JAK1/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白6和干擾素調(diào)節(jié)因子4/PPARγ通路減少M(fèi)2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生。

2.1.2 miR-223 miR-223是巨噬細(xì)胞極化和脂肪組織巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的肥胖相關(guān)組織炎癥和胰島素抵抗的重要調(diào)節(jié)因子。Ying等[4]發(fā)現(xiàn)，miR-223通過靶向抑制 Pknox1 ( PBX /knotted 1 homeobox 1)促進(jìn)M1型極化，又發(fā)現(xiàn)PPARγ可直接增強(qiáng)miR-223的表達(dá)，敲除miR-223則削弱PPARγ依賴性M2型巨噬細(xì)胞的激活，PPARγ/miR-223調(diào)控軸中Rasa1和Nfat5的異位表達(dá)可促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化。

2.1.3 let-7d-3p Yan等[5]在研究2型糖尿病小鼠的造血干細(xì)胞(HSC)在創(chuàng)傷愈合中的自主機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，HSC氧化應(yīng)激中的Nox-2依賴性增加可下調(diào)let-7d-3p，反過來活化DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1，進(jìn)而增加巨噬細(xì)胞極化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子Notch1、PU.1和Krüppel樣因子4(KLF4)的甲基化水平，KLF4作為PU.1和Notch1 的下游靶基因可誘導(dǎo)M2表型并抑制M1表型。因此，HSC誘導(dǎo)的表觀遺傳機(jī)制減少了傷口處巨噬細(xì)胞的募集，抑制M1型巨噬細(xì)胞極化。這一機(jī)制有可能為2型糖尿病患者傷口愈合提供新策略，降低截肢風(fēng)險(xiǎn)。

2.2 促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞極化的miRNA

2.2.1 miR-181 miR-181家族在心血管炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中發(fā)揮重要作用。de Couto等[6]以心球樣細(xì)胞(CDC)源外泌體為載體將miR-181b轉(zhuǎn)入巨噬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其能減少心梗組織內(nèi)CD68+巨噬細(xì)胞數(shù)量，發(fā)揮心臟保護(hù)作用。眾所周知，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)大量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)易使斑塊破裂。急性腦卒中合并動(dòng)脈粥樣硬化斑塊患者的血清miR-181b水平降低。An等[7]通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，miR-181b可通過靶向抑制Notch1基因表達(dá)，增加M2型巨噬細(xì)胞比例，減輕動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性。Sun等[8]則發(fā)現(xiàn)，糖尿病肥胖小鼠脂肪組織內(nèi)皮細(xì)胞中miR-181b表達(dá)降低，靜脈輸注miR-181b可使脂肪組織內(nèi)皮細(xì)胞中miR-181b表達(dá)增多，進(jìn)而改善小鼠對(duì)胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)。這種改善作用是通過miR-181b促進(jìn)胰島素介導(dǎo)的蛋白激酶B(AKT)磷酸化致使白色脂肪組織中巨噬細(xì)胞向M2型極化實(shí)現(xiàn)的。同樣，Ghorbani等[9]發(fā)現(xiàn)，多發(fā)性硬化患者的腦白質(zhì)和自身免疫性腦脊髓炎小鼠脊髓中的miR-181a和miR-181b表達(dá)降低。過表達(dá)miR-181a和miR-181b后其靶基因Smad7被抑制，致使巨噬細(xì)胞向M1型極化減弱，減少促炎因子產(chǎn)生，揭示了miR-181a和miR-181b在自身免疫性神經(jīng)炎癥中的抗炎機(jī)制。

2.2.2 miR-93 miR-93被證明有利于血管生成并減少遺傳性外周動(dòng)脈疾病組織缺失，但其介導(dǎo)的缺血肌肉血管再生所涉及的信號(hào)傳導(dǎo)及下游機(jī)制不明。Ganta等[10]最新研究發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠相比，miR106b-93-25-/-小鼠血管生成和動(dòng)脈生成減少，M1型巨噬細(xì)胞增多。在該基因敲除小鼠肌肉內(nèi)過表達(dá)miR93后血管生成、動(dòng)脈生成和灌注均增加，肌肉組織中M2型巨噬細(xì)胞增多。進(jìn)一步RNA測(cè)序分析和螢光素酶報(bào)告結(jié)果表明，miR-93通過抑制干擾素調(diào)節(jié)因子9減少免疫反應(yīng)性基因-1和衣康酸表達(dá)，從而在缺血肌肉中誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞極化，促進(jìn)血管生成、動(dòng)脈生成和灌注恢復(fù)。

2.2.3 miR-1246 TP53基因(編碼p53蛋白)突變是人類癌癥中最常見的遺傳改變之一，突變的TP53基因(mutp53)可消除p53介導(dǎo)的抑癌作用。Cooks等[11]研究報(bào)道，mutp53癌細(xì)胞可通過核外通信物質(zhì)重編程巨噬細(xì)胞。研究者發(fā)現(xiàn)，與mutp53敲低或敲除相比，攜帶mutp53的M0和M2型巨噬細(xì)胞IL-10、趨化因子CCL2和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)增加，TNF-α表達(dá)減少。進(jìn)一步蛋白組學(xué)分析顯示，mutp53腫瘤細(xì)胞重編程的巨噬細(xì)胞中促炎因子IL-8、IFN-γ、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)水平下降，CD206和CD163表達(dá)增加；質(zhì)譜分析顯示，巨噬細(xì)胞與mutp53腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)的分泌物中促腫瘤發(fā)生因子分泌增加，如基質(zhì)金屬肽酶9、血管非炎性分子1和TNF-β誘導(dǎo)基因；并發(fā)現(xiàn)mutp53腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體富含miR-1246等miRs，轉(zhuǎn)染miR-1246的M2型巨噬細(xì)胞與mutp53腫瘤細(xì)胞共注射免疫缺陷小鼠后，腫瘤體積增大、癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。隨后，研究者選取43例結(jié)直腸癌患者進(jìn)一步驗(yàn)證了miR-1246與mutp53的關(guān)聯(lián)性及它們?cè)谀[瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。由此可見，mutp53腫瘤細(xì)胞釋放的富含miR-1246的外泌體被鄰近的巨噬細(xì)胞內(nèi)化，促使巨噬細(xì)胞重編程為M2表型，發(fā)揮抗炎和促進(jìn)腫瘤發(fā)展作用。該研究對(duì)結(jié)腸癌的診斷和治療有一定的指導(dǎo)意義，然而，外泌體內(nèi)其他組分是否也能發(fā)揮作用及miR-1246的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

2.2.4 miR-26a Sahu等[12]在感染結(jié)核分枝桿菌(MTb)的巨噬細(xì)胞和結(jié)核患者的外周血中均觀察到miR-26a表達(dá)下降，其靶基因KLF4水平增高，后者通過CREB-C/EBPβ信號(hào)軸發(fā)揮促M(fèi)2極化的作用。Ahluwalia等[13]利用生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，miR-155、miR-33、miR-27a和miR-27b在促M(fèi)2型巨噬細(xì)胞極化中發(fā)揮重要作用，進(jìn)而調(diào)控巨噬細(xì)胞中MTb的生存。

此外，Hsu等[14]發(fā)現(xiàn)，肺癌患者血清及低氧誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞衍生的細(xì)胞外囊泡(EV)富含miR-103a。巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-103a可靶向抑制抑癌基因磷酸酶及張力蛋白同源物表達(dá)，進(jìn)而激活A(yù)KT、信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3、免疫抑制因子和促血管生成因子的表達(dá)。相反，miR-103a抑制劑可減少低氧介導(dǎo)的M2型極化。外泌體中的ncRNAs在腫瘤免疫治療中的研究是繼外泌體熱之后的又一新興熱點(diǎn)，對(duì)臨床治療有很大的啟發(fā)。

Baer等[15]條件性敲除miRNA加工酶Dicer(即核糖核酸內(nèi)切酶)后發(fā)現(xiàn)活化的IFN-γ/STAT1信號(hào)將腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞重編程為M1巨噬細(xì)胞。Guerriero等[16]則利用Ⅱa類組蛋白去乙酰化酶抑制劑TMP195治療巨噬細(xì)胞依賴性原發(fā)性乳腺癌小鼠，證明其可通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型改變腫瘤微環(huán)境，從而發(fā)揮巨噬細(xì)胞的抗腫瘤潛能并減少肺轉(zhuǎn)移。這些研究利用表觀遺傳學(xué)工具重編程巨噬細(xì)胞表型有可能為癌癥治療提供新的手段。

3 LncRNA對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響

LncRNA是一類長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子，參與多種病理生理過程，包括胚胎發(fā)育、表觀遺傳調(diào)控、腫瘤轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化和細(xì)胞周期調(diào)控等，是遺傳學(xué)的研究熱點(diǎn)。已有研究報(bào)道，LncRNA在不同疾病過程中具有關(guān)鍵功能，近年越來越多的研究顯示，LncRNA可調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。

巨噬細(xì)胞與糖尿病并發(fā)癥中炎癥相關(guān)機(jī)制是研究熱點(diǎn)。研究表明，糖尿病可通過調(diào)節(jié)與巨噬細(xì)胞功能相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子影響巨噬細(xì)胞表型。Reddy等[17]首次揭示，LncRNA在糖尿病巨噬細(xì)胞中存在差異表達(dá)，其中LncRNA E330013P06在2型糖尿病患者的單核細(xì)胞及胰島素抵抗2型糖尿病小鼠的巨噬細(xì)胞中均顯著上調(diào)，而1型糖尿病小鼠則沒有，這說明E330013P06依賴的機(jī)制只適用于2型糖尿病。高糖和棕櫚酸處理的小鼠巨噬細(xì)胞中，E330013P06隨著炎癥基因表達(dá)而增加。過表達(dá)E330013P06促進(jìn)炎性基因表達(dá)，增強(qiáng)對(duì)炎癥信號(hào)的應(yīng)答及泡沫細(xì)胞形成。相反，沉默E330013P06抑制糖尿病誘導(dǎo)的炎性基因表達(dá)。這些結(jié)果證明LncRNA通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化治療炎性糖尿病并發(fā)癥的可能性。

此外，巨噬細(xì)胞引起的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)是種植體周圍骨溶解的病理生理機(jī)制之一。已有研究報(bào)道，促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞極化可緩解與磨損顆粒相關(guān)的種植體周圍骨溶解。Gao等[18]首次報(bào)道，KCNQ1OT1可靶向抑制miR-21a-5p，上調(diào)IL-10表達(dá)、逆轉(zhuǎn)聚甲基丙烯酸甲酯誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞極化，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化，減輕顆粒誘導(dǎo)的骨質(zhì)溶解。

Du等[19]研究顯示，LPS誘導(dǎo)的LncRNA Mirt2可阻遏炎癥的異常激活，是巨噬細(xì)胞極化的潛在調(diào)節(jié)因子。LPS可通過TLR4信號(hào)激活依賴E3泛素連接酶(TRAF6)的促炎信號(hào)途徑，LncRNA Mirt2可靶向TRAF6降低Lys63(K63)的泛素化水平進(jìn)而抑制NF-κB和MAPK的活化及促炎因子的產(chǎn)生。異位表達(dá)Mirt2的巨噬細(xì)胞受到IL-4刺激后M2型表面標(biāo)記分子精氨酸酶-1、CD206、Fizz1、Ym1和CCL24水平迅速增加，而TNF、IL-1β、IL-6和IL-12等M1型表面標(biāo)記分子被抑制。

Sun等[20]亦發(fā)現(xiàn)，LncRNA GAS5為小膠質(zhì)細(xì)胞極化的表觀遺傳調(diào)節(jié)物。功能學(xué)研究表明，GAS5通過招募多梳抑制復(fù)合物2抑制M2型巨噬細(xì)胞極化的關(guān)鍵因子TRF4的轉(zhuǎn)錄，從而抑制小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型極化。因此，GAS5有望成為脫髓鞘疾病的治療靶點(diǎn)。另有研究[21]顯示，用LPS和固定化IgG(免疫復(fù)合物，IC)刺激骨髓來源的巨噬細(xì)胞(BMDM)極化為M2b表型后GAS5 RNA水平降低，在CpG DNA(一個(gè)典型的M1型誘導(dǎo)物)刺激并轉(zhuǎn)染GAS5后巨噬細(xì)胞向M1型極化。進(jìn)一步研究證實(shí)，活化無義介導(dǎo)的RNA衰變途徑下調(diào)GAS5 RNA表達(dá)可促進(jìn)BMDM極化為M2b型巨噬細(xì)胞，但其具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚未明晰。M2b巨噬細(xì)胞極化是增加某些患者對(duì)腸道細(xì)菌相關(guān)性膿毒癥易感性的原因，因此，GAS5基因轉(zhuǎn)導(dǎo)可能成為控制這些感染的新策略。

Huang等[22]則對(duì)人外周血單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞和THP-1細(xì)胞中LncRNAs進(jìn)行高通量測(cè)序后，發(fā)現(xiàn)TCONS_00019715在M1型巨噬細(xì)胞中表達(dá)增高，當(dāng)M1型轉(zhuǎn)化為M2型時(shí)TCONS_00019715表達(dá)降低；在IFN-γ和LPS刺激的THP-1細(xì)胞中敲低TCONS_00019715后M1型表面標(biāo)記表達(dá)降低，M2型表面標(biāo)記表達(dá)升高；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，敲低TCONS_00019715后調(diào)控巨噬細(xì)胞極化的關(guān)鍵基因PAK1表達(dá)降低。這些數(shù)據(jù)表明TCONS_00019715可能在促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞極化方面發(fā)揮重要作用，PAK1可能與之密切相關(guān)。

LncRNA cox-2在Pam3CSK4、LPS或R848處理的巨噬細(xì)胞中以MyD88-和NF-κB依賴性方式產(chǎn)生。已有研究表明，LncRNA cox-2通過促進(jìn)M1型極化和抑制M2型極化來抑制肝癌細(xì)胞的免疫逃逸、侵襲和遷移。Ye等[23]發(fā)現(xiàn)，M1型巨噬細(xì)胞高表達(dá)LncRNA cox-2，沉默LncRNA cox-2后IL-12、iNOS和TNF-α表達(dá)水平降低；相反，IL-10、精氨酸酶-1和Fizz-1表達(dá)增加。巨噬細(xì)胞與肝癌細(xì)胞株共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，沉默cox2可逆轉(zhuǎn)M1型巨噬細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)活性、集落形成、侵襲和遷移的抑制作用，并增強(qiáng)M2型巨噬細(xì)胞對(duì)上述肝癌細(xì)胞生物學(xué)過程的促進(jìn)作用。

眾多研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)在免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用。Li等[24]發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)重子癇前期患者的臍帶組織和MSCs中LncRNA MALAT1表達(dá)降低，過表達(dá)MALAT1后MSCs可通過分泌更多的IDO促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化，進(jìn)而增強(qiáng)MSCs在體內(nèi)的免疫抑制作用。MALAT1作為MSCs的內(nèi)源調(diào)節(jié)因子，可能在先兆子癇中發(fā)揮免疫抑制作用。

基因間轉(zhuǎn)錄超保守RNAs(T-UCRs)作為一種特殊的LncRNA類型，可調(diào)控小鼠、大鼠和人類嚴(yán)格保守的mRNA的表達(dá)和翻譯。鑒于巨噬細(xì)胞及T-UCRs在腫瘤中的重要作用，Luo等[25]觀察到M2型向M1型極化的U937細(xì)胞中有2 977個(gè)差異表達(dá)的T-UCRs，且在30例假手術(shù)組和252例病例組中發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞來源的uc.306在富含M1型巨噬細(xì)胞(CD68+)的肝癌癌旁正常組織中高表達(dá)，在以M2型巨噬細(xì)胞(CD163+)為主的肝癌組織中低表達(dá)，且uc.306通過BTRC(β-TrCP)-Wnt信號(hào)通路影響HBV相關(guān)肝癌的進(jìn)展。該發(fā)現(xiàn)可能為肝癌診斷和治療提供新的分子標(biāo)志物。

4 circRNA與巨噬細(xì)胞極化

circRNA是一類由單個(gè)RNA分子通過末端共價(jià)連接形成的一類特殊的非編碼RNA，是RNA領(lǐng)域最新的研究熱點(diǎn)。circRNA在人體細(xì)胞中廣泛表達(dá)，可通過調(diào)控巨噬細(xì)胞極化在炎癥相關(guān)疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。

Zhang等[26]通過芯片分析比較兩種不同極化狀態(tài)(IFN-γ和LPS刺激誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞及IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞)下BMDM中circRNA表達(dá)譜變化，發(fā)現(xiàn)共有189個(gè)circRNAs在M1型和M2型巨噬細(xì)胞之間存在差異表達(dá)(與M2相比，M1中有62個(gè)circRNAs上調(diào)，127個(gè)circRNAs下調(diào))。進(jìn)一步通過RT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，M1型中circRNA-003780、circRNA-010056及circRNA-010231表達(dá)上調(diào)，circRNA-003424、circRNA-013630、circRNA-001489和circRNA-018127顯著下調(diào)，與芯片分析結(jié)果一致。隨后生物信息學(xué)預(yù)測(cè)顯示，M1型中高表達(dá)的circRNA-010231與miR-141-5p、miR-145a-5p、miR-1964-5p、miR-19b-2-5p、miR-6950-5p可能存在相互作用。這項(xiàng)分析有助于了解在不同刺激條件下circRNA在調(diào)控巨噬細(xì)胞極化中的作用。circRNA/miRNA之間的交互作用在調(diào)控巨噬細(xì)胞極化的相關(guān)機(jī)制可能成為未來研究熱點(diǎn)。

有研究發(fā)現(xiàn)，circHECTD1和circZC3H4 RNA可通過影響巨噬細(xì)胞活化調(diào)節(jié)矽肺的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。矽肺患者肺組織中HECTD1、鋅指CCCH型蛋白ZC3H4均與巨噬細(xì)胞標(biāo)志物F4/80存在共定位。在SiO2誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，circHECTD1表達(dá)減少，HECTD1蛋白水平則與NOS2、ARG和SOCS3水平呈時(shí)間依賴性增加。HECTD1通過泛素-蛋白酶體系統(tǒng)降解ZC3H12A，從而下調(diào)IL-1β、IL-6、IL-12p40 mRNA水平，circHECTD1/HECTD1和ZC3H12A之間的相互作用使M1/M2失衡，從而促M(fèi)2型巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量促纖維化細(xì)胞因子，導(dǎo)致肺組織進(jìn)行性纖維化的發(fā)生。相反，circZC3H4 RNA與ZC3H4在SiO2誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞中表達(dá)增多。miR-212可抑制ZC3H4蛋白表達(dá)，circZC3H4 RNA則通過與miR-212堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合調(diào)節(jié)其活性，因此，沉默circZC3H4 RNA則逆轉(zhuǎn)其效應(yīng)。由此可見，HECTD1和ZC3H4可能成為矽肺的潛在標(biāo)志物。

另有研究發(fā)現(xiàn)，敲低mcircRasGEF1B可減少LPS誘導(dǎo)的ICAM-1表達(dá)，已有報(bào)道ICAM-1可以抑制腫瘤微環(huán)境中M2型巨噬細(xì)胞極化?？梢圆聹y(cè)，mcircRasGEF1B的低表達(dá)可能導(dǎo)致TAM轉(zhuǎn)向M2表型，即circRasGEF1B通過調(diào)節(jié)成熟ICAM-1 mRNA的穩(wěn)定性來正向調(diào)節(jié)ICAM-1的表達(dá)，這是一種有別于經(jīng)典“海綿作用”的新機(jī)制，有待進(jìn)一步研究。

5 小結(jié)與展望

除以上三類非編碼RNA外，其他類型的非編碼RNA也有可能在調(diào)控巨噬細(xì)胞極化中發(fā)揮重要作用，如Y RNAs是EVs中豐富存在的非編碼RNA。CDC源性外泌體中富含的Y RNA片段可增加IL-10分泌、減少促炎細(xì)胞因子釋放，減小心肌梗死面積，從而增強(qiáng)CDC對(duì)心臟的保護(hù)作用。

盡管過去幾十年取得了很大的進(jìn)展，但與巨噬細(xì)胞極化有關(guān)的更多可能機(jī)制有待發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞極化對(duì)生理功能和病理變化的影響尚有很大的研究空間。巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性和可塑性使巨噬細(xì)胞與微環(huán)境之間的相互作用成為一個(gè)復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的過程，目前對(duì)這種相互作用的了解有限。不過，包括單細(xì)胞分析和計(jì)算生物學(xué)方法在內(nèi)的新技術(shù)的應(yīng)用將更好地促進(jìn)這一領(lǐng)域的發(fā)展，并有望實(shí)現(xiàn)更大的突破，如發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)科學(xué)研究到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。