應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法揭示黃酮類化合物燈盞花乙素分子機制研究進展＊

杜庭彥，鄭昌博，翁稚穎，代澤蘭，陳 晨，楊為民

（昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室 昆明 650500）

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)（network pharmacology）[1,2]由英國Dundee大學(xué)Andrew L.Hopkins于2007年提出，指將藥物作用網(wǎng)絡(luò)與生物網(wǎng)絡(luò)整合在一起，分析藥物在此網(wǎng)絡(luò)中與特定節(jié)點或模塊的相互作用關(guān)系，從而理解藥物和機體相互作用的科學(xué)。融合了[3]系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)、計算生物學(xué)、網(wǎng)絡(luò)分析等多學(xué)科的技術(shù)和內(nèi)容，從多靶點的研究策略出發(fā)，實現(xiàn)藥物作用的綜合網(wǎng)絡(luò)分析的新型藥理學(xué)研究方法。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的基礎(chǔ)建立在治療領(lǐng)域中，許多有效藥物作用于多個目標而不是單個目標[4]這一基本概念上，從而提供了1種“多目標，多種效應(yīng)，復(fù)雜疾病”的新型網(wǎng)絡(luò)模式。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)有助于揭示和發(fā)現(xiàn)疾病致病的分子機制，以及藥物的作用機制，并在疾病-靶點-藥物之間建立分子網(wǎng)絡(luò)，揭示藥物作用于疾病的分子機制。

黃酮類化合物[5]（flavonoids）是植物特有的次生代謝產(chǎn)物，指2個苯環(huán)通過中央3個碳原子相互連接形成具有C6-C3-C6基本結(jié)構(gòu)的一系列化合物。目前已知的黃酮類化合物超過10000種，根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同可以分為[6]二氫黃酮（2H-flavanones）、黃酮（flavones）、異黃酮（isoflavones）、黃酮醇（flavonols）、黃烷醇（flavanols）和花色素6大類（anthocyanidins）。黃酮類化合物是多種藥用植物的主要有效成分，例如，黃芩[7]中的黃芩苷和黃芩素為黃酮及黃酮醇類化合物；甘草[8]中分離得到了300多種黃酮類化合物，包括二氫黃酮、二氫黃酮醇、查耳酮、異黃烷、異黃酮、黃酮、黃酮醇、異黃酮和異黃酮等，其中，二氫黃酮和查耳酮是主要類型；銀杏葉[9]含黃酮類化合物30種以上，其中雙黃酮6種，黃酮苷元7種，黃酮苷17種；葛根[10]中的葛根素為異黃酮類化合物?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明黃酮類化合物具有抗癌[6]、抗氧化[11]、抗炎[12]、抗動脈粥樣硬化[13]、抗腫瘤[14]、抗菌[15]等多種藥理活性。

燈盞花乙素[16]（scutellarin，SCU）又名野黃芩苷（C21H18012），為菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.中提取分離所得的黃酮類化合物。按干燥品計算，其含量不得低于90.0%（供口服用）或98.0%（供注射用）。其功能為活血化瘀，通絡(luò)止痛，腦絡(luò)瘀阻，心脈痹阻，胸痹心痛。臨床上用于中風(fēng)及其后遺癥、冠心病和心絞痛。除以上藥典中明確指出的功能主治，還有其他的臨床應(yīng)用：抗炎、治療燙傷、糖尿病腎病、慢性腎小球腎炎、頸性眩暈、血管性癡呆、乙型肝炎以及慢性阻塞性肺氣病等。

大量文獻對SCU以及其他的黃酮類化合物的作用機制進行了研究，提出了它們潛在的臨床應(yīng)用以及其可能的作用機制[17，18]，但具體的分子機制還需要進一步研究，這就需要尋找一個高效的方法，為分子機制的假設(shè)和實驗研究提供思路。本文將對網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法在藥理學(xué)研究中的應(yīng)用，SCU以及其他的黃酮類化合物的傳統(tǒng)藥理學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究進展做出綜述。

1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

1.1 常用研究技術(shù)

1.1.1 預(yù)測某藥可能有的作用靶點及通路

通常步驟如下：繪制藥物活性分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，將此結(jié)構(gòu)式導(dǎo)入如Pharm Mapper數(shù)據(jù)庫中，得到基于此結(jié)構(gòu)而預(yù)測的活性靶點，使用String、Bio Grid、HRPD等蛋白質(zhì)標準數(shù)據(jù)庫剔除重復(fù)作用的數(shù)據(jù)，得到蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系，建立以藥物化學(xué)成分為中心的生物信息網(wǎng)絡(luò)。參照KEGG、Signa Link、Reactome和Pathway Linker標準數(shù)據(jù)庫中的代謝網(wǎng)絡(luò)及相關(guān)蛋白，預(yù)測藥物潛在靶點的生物學(xué)調(diào)控通路。采用Cytoscape軟件的Merge功能構(gòu)建成分?靶點?通路的網(wǎng)絡(luò)模型。在輸出的網(wǎng)絡(luò)中，以不同顏色的節(jié)點（node）表示活性成分、靶點以及作用通路。若某一靶點為化合物的潛在作用靶點，則以邊（edge）相連；類似地，若某一蛋白對某條通路具有調(diào)節(jié)作用，也通過邊連接。不同顏色節(jié)點間的連接原則為當(dāng)活性成分作用靶點與作用通路相關(guān)靶點相同時，則將活性成分、潛在靶點和作用通路以邊關(guān)聯(lián)起來。

1.1.2 若要預(yù)測某藥對某疾病作用的分子機制

一般步驟如下：運用藥物化學(xué)數(shù)據(jù)庫如：Pubchem搜索出關(guān)鍵活性化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)；再用化合物靶標關(guān)系數(shù)據(jù)庫Stitch、Drug Bank等數(shù)據(jù)庫檢索已知的被預(yù)測的化合物和蛋白之間相互關(guān)系；用OMIM、HPO等數(shù)據(jù)庫檢索疾病相關(guān)蛋白；然后借助String數(shù)據(jù)庫構(gòu)建藥物疾病靶標網(wǎng)絡(luò)。最終基于上述網(wǎng)絡(luò)，用Cytoscape軟件進行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建以及網(wǎng)絡(luò)拓撲結(jié)構(gòu)計算及挖掘其重要的節(jié)點，預(yù)測藥物治療疾病的關(guān)鍵分子，最后用David軟件對關(guān)鍵靶標功能進行富集分析，預(yù)測可能的作用通路。

1.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的應(yīng)用

近幾年來，網(wǎng)絡(luò)藥理在藥理學(xué)研究中應(yīng)用的文獻報道逐年增多：Ming Hong等[19]為了進一步探索黨參的保肝作用，運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對黨參中活性化合物及分子靶點進行了預(yù)測并得出黨參抗氧化保肝可能是由于作用于以下靶點：MMP2（Matrixmetalloproteinase-2）、PPARα（Peroxisome proliferatoractivated receptor alpha）和 CYP1A2（CytochromeP450，family 1，subfamily A，polypeptide2），為黨參后續(xù)的體內(nèi)外進一步的實驗研究提供潛在的研究方向。

Shi-Zhang We等[20]運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，揭示了三草顆粒（SCG）中11個活性成分中有16個靶點與治療肝纖維化有關(guān)，且這種系統(tǒng)的方法已經(jīng)成功地揭示了這16個靶點與肝纖維化治療密切相關(guān)。這些靶點富集分析顯示TGF-β1/Smad信號通路相對重要。他們后續(xù)的動物實驗也證明，SCG可通過抑制TGF-β 1/Smad途徑顯著改善肝纖維化。

Hai-Yang Fang等[21]對麝香保心片（SBP）的心血管疾?。–VD）的作用機制進行了研究。該研究使用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究SBP對深度CVD的治療效果，并用Western blot的方法進行了驗證，結(jié)果表明，SBP的血漿吸收化合物在SBP治療CVD中起主要作用，其通過多種成分調(diào)節(jié)CVD相關(guān)網(wǎng)絡(luò)多基因間的相互作用來實現(xiàn)其臨床療效。

綜上，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)通常用于研究：預(yù)測活性化合物或中藥復(fù)方中活性成分的作用靶點，為開展藥物藥理實驗研究提供線索；用于發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)藥物的新臨床應(yīng)用；揭示藥物作用于疾病的分子機制，為藥物的臨床應(yīng)用，以及后續(xù)的新藥研發(fā)提供依據(jù)。

2 黃酮類化合物的藥理作用

2.1 抗腫瘤

近幾年來的研究發(fā)現(xiàn)[6-22]，黃酮類化合物抗腫瘤的藥理作用主要與其抑制腫瘤細胞的增殖，誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡有關(guān)，主要涉及以下幾條通路：抑制Ras-MAPK通路的相關(guān)信號因子；抑制PI3K-Akt-mTOR通路；抑制JAK-STAT通路，下調(diào)相關(guān)因子的mRNA水平，減少蛋白的磷酸化水平；影響Wnt-β-catenin通路，下調(diào)抗調(diào)亡因子、周期刺激因子，上調(diào)凋亡因子、增殖抑制因子；通過下調(diào)或抑制細胞周期蛋白，細胞周期蛋白依賴性激酶和周期蛋白依賴性激酶抑制劑蛋白水平或蛋白表達，抑制細胞周期，從而抑制腫瘤細胞的增殖，并誘導(dǎo)其凋亡。與此同時，黃酮類化合物還與抑制腫瘤細胞血管生成以及腫瘤細胞向其他部位的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)：減少血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的分泌和表達，從而抑制血管生成。抑制腫瘤細胞侵襲與抑制以下靶點有關(guān)：抑制胞內(nèi)靶點如PI3K-Akt，Ras-MAPK通路，影響胞外主要作用靶點包括抑制參與降解的蛋白水解酶包括基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），尿激酶型纖溶酶原激活劑（urokinase-type plasminogen activator，u PA）；增加E-鈣粘素（E-cadherin）的蛋白表達；抑制粘著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）的激活等，降低腫瘤細胞的黏附力，減少腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移。除此之外，黃酮類化合物可通過阻斷機體細胞DNA和染色質(zhì)的異常行為變化而起到抗腫瘤的作用，還可以通過抑制P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）和多藥耐藥相關(guān)蛋白（multidrug resistance related protein，MRP）等蛋白的表達從而逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的耐藥行為。

有文獻指出[23]黃酮類化合物還可以抑制芳香化酶（aromatase，CYP19）、雌激素受體（estrogen receptor，ER）從而抑制雌激素的生成，而抑制ERα陽性的乳腺癌細胞增殖，還可以抑制微管的生成，達到抑制腫瘤細胞增殖、促進其凋亡的作用。

在運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測黃酮類化合物抗腫瘤研究中，張莉華[24]等對葛根抗腫瘤潛在機制進行了探討，最終確定葛根中16個活性成分與34個腫瘤靶蛋白有相互關(guān)系，且涉及了44條信號通路，通路之間大多彼此相互聯(lián)系，說明葛根作用于多個靶點，協(xié)同多條通路產(chǎn)生抗腫瘤的藥理作用，為后續(xù)葛根抗腫瘤的分子機制研究實驗提供了方向和理論依據(jù)。

2.2 抗炎

黃酮類化合物[12-25]可以通過直接清除活性氧（reactive oxygen species，ROS）和活性氮（reactive nitrogen species，RNS）；抑制產(chǎn)生的氧化酶，如黃嘌呤氧化酶，微粒體單加氧酶等；激活抗氧化酶，如谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶；螯合痕量金屬；抑制脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）基因表達和iNOS活性，減少一氧化氮（nitric oxide，NO）產(chǎn)生，減輕由NO引起的氧化應(yīng)激發(fā)揮抗氧化活性。抑制促炎癥因子：p38 MAPK（p38 mitogen-activated protein kinase）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、磷脂酶 A2（phospholipase A2，PLA2）、誘導(dǎo)型環(huán)氧化酶（inducible cyclooxygenase，COX-2）、脂 氧 合 酶（lipoxygenase，LOX）、前列腺素 E2（prostaglandin E2，PGE2）等的生成發(fā)揮抗炎作用。

運用分子對接和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，張立虎[26]等對銀杏提取物（銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯）潛在的抗炎機制進行了研究。預(yù)測出此提取物中有123種化合物滿足藥性，主要涉及PPARA、IL-2、CHRM1、HO-1、MMPs，IL-17A、SELE、CXCL3、PPARG和CYP1A2這10個炎癥相關(guān)靶點，其中111個提取物分子與PPARA靶點蛋白有作用，說明它是銀杏提取物最主要的抗炎靶點。PPARA、HO-1、PPARG等靶點與NF-κB相關(guān)，而黃酮類化合物通過抑制NF-κB從而發(fā)揮抗炎作用已經(jīng)得到了實驗證實，其他還未進行實驗研究的靶點，也為后續(xù)銀杏提取物的抗炎機制實驗研究提供了方向。

2.3 心血管作用

黃酮類化合物[27]的心血管保護作用機制主要包括抑制產(chǎn)生氧自由基相關(guān)的酶類，對抗ROS從而抵消血漿低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）氧化，改善血管內(nèi)皮炎癥；抑制LOX活性，并清除LDL氧化過程中的自由基，直接清除超氧離子、過氧亞硝基陰離子，抑制脂質(zhì)過氧化；下調(diào)炎癥因子iNOS、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α，COX-2活性，激活NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。

Kirsty MacRae[28]等通過使用不同抑制劑孵育大鼠離體血管后，觀察血管舒縮反應(yīng)，動作電位、靜息電位變化情況，發(fā)現(xiàn)表兒茶素（一種黃酮類化合物）的血管反應(yīng)和心臟保護作用是通過阿片受體、NO、鉀通道和鈣通道激活來介導(dǎo)的。

運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，魏志成[29]等對沙棘總黃酮治療心肌缺血的潛在靶點進行預(yù)測，結(jié)果篩選出沙棘總黃酮的7個活性成分，31個靶點，23條通路直接或間接與心肌缺血有關(guān)，從血小板聚集、脂質(zhì)代謝、炎癥相關(guān)、細胞凋亡、心臟功能和血管舒張、血管韌性和通透性等6個方面產(chǎn)生治療心肌缺血的作用。預(yù)測得到的鈣離子信號通路（calcium signaling pathway），VEGF signaling pathway和縫隙連接信號通路（Gap junction signaling pathway）3個通路與已有文獻報道吻合，證實了預(yù)測結(jié)果的準確性，其余還未被研究的信號通路也為后續(xù)的實驗研究提供了方向。

3 燈盞花乙素的藥理作用

3.1 抗炎作用

Nak Yoon Sung等[30]研究發(fā)現(xiàn)SCU通過直接抑制與NF-κB活化相關(guān)的Src激酶活性來進行抗炎。

郭新華等[31]通過觀察蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）選擇性抑制劑SCU對甲醛炎性痛時大鼠自發(fā)痛反應(yīng)、脊髓NOS表達和NO含量的影響，證實鞘內(nèi)注射燈盞花乙素可明顯抑制甲醛誘導(dǎo)的自發(fā)痛反應(yīng)及脊髓傷害性信息神經(jīng)元NOS表達和NO的合成，從而減輕炎性疼痛。

景艷蕓等[32]利用碘化丙錠（propidium iodide，PI）染色法檢測LPS合并三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）誘導(dǎo)小鼠J774A.1巨噬細胞發(fā)生細胞凋亡，同時，運用Western blot法檢測細胞裂解液和上清中IL-1b、caspase-1、HMGBl等蛋白的表達水平和基于微珠的免疫測定法檢測細胞上清中IL-1b的分泌水平，證實SCU通過調(diào)節(jié)蛋白激酶A（protein kinase A，PKA）活性 ，抑 制 NLRP3（NOD-like receptor family，pyrin domain-containing 3）炎癥小體的活化與細胞凋亡，從而發(fā)揮抗炎作用。

3.2 抗心腦缺血作用

曹小雨等[33]通過對大鼠腦缺血再灌注（ischemiareperfusion，I/R）模型給藥后進行研究，用實時熒光定量法檢測腦組織內(nèi)的細胞色素（cytochrome，CYP）4A1，CYP4A3，CYP4A8的表達情況，用酶聯(lián)反應(yīng)吸附測定法檢測大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）含量，與模型組比較，燈盞花素高劑量組可下調(diào)大鼠腦組織CYP4A3，CYP4A8表達和血清eNOS含量；燈盞花素低劑量組可顯著下調(diào)腦組織CYP4A3，CYP4A8表達和eNOS含量，表明燈盞花素可能是通過下調(diào)腦組織CYP4A3，CYP4A8的表達來改善大鼠腦缺血再灌注損傷。

Pan等[34]研究發(fā)現(xiàn)長期給予SCU通過抑制間質(zhì)纖維化改善心肌梗塞（myocardial infarction，MI）大鼠的心臟功能，其機制可能涉及抑制促纖維化細胞因子TGFβ 1（transforming growth factorβ1）表達，抑制 ERK1/2（extracellular signal-regulated kinase）和p38 MAPK磷酸化。

Hao Zhou等[35]基于研究表明Notch信號傳導(dǎo)在抗纖維化治療中起著重要的作用。在過表達Notch配體Jagged1的轉(zhuǎn)基因小鼠中，發(fā)現(xiàn)Notch抑制心臟纖維化。做了實驗進行驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)異丙腎上腺素（isoprenaline，ISO）處理組中Notch1，Jagged1和Hes1等蛋白的蛋白表達顯著低于對照組，而SCU增加了這些蛋白質(zhì)的表達。這些結(jié)果表明SCU抑制心肌纖維化可能與Notch途徑相關(guān)。但是證據(jù)有限，還需要進一步研究。

Xi-Peng Sun等[36]在大量文獻報道SCU具有自由基清除，抗氧化等作用的基礎(chǔ)上，提出SCU也許可以對抗多柔比星（doxorubicin，DOX）誘導(dǎo)的心肌損傷的假設(shè)，SCU可以在不改變血漿藥代動力學(xué)的基礎(chǔ)上，減少DOX在心臟的蓄積，并在后續(xù)的實驗中證實了這一假設(shè)。但具體的分子機制還需要進一步研究。

Zhou Wang等[37]通過研究發(fā)現(xiàn)：I/R增加了心肌細胞中肌酸激酶（creatine kinase，CK）以及促炎細胞因子TNFα，IL-1β，IL-6和IL-8的釋放。I/R損傷后心肌細胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS），馬來酸二醛（maleic dialdehyde，MDA）和細胞凋亡增加，細胞增殖，線粒體膜電位，超氧化物歧化酶（superoxide dismutas，SOD）表達降低。SCU劑量依賴性地抑制I/R損傷誘導(dǎo)的促炎細胞因子和CK釋放，氧化應(yīng)答，線粒體膜電位喪失，以及增強細胞增殖和抗氧化劑SOD表達。進一步分析表明，SCU促進JAK/STAT3活化和促生存蛋白Bcl2，VEGF，MMP2和MMP9的表達。抑制促凋亡分子Bax和caspase-3的表達。以上實驗結(jié)果表明，SCU可能通過激活JAK2/STAT3信號通路從而調(diào)節(jié)I/R損傷誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和凋亡。

運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法方面，程驍[38]等對SCU的潛在作用靶標進行了虛擬篩選，在Pharm Mapper服務(wù)器中上傳了SCU的化學(xué)結(jié)構(gòu)后，Pharm Mappe返回了300個潛在的作用靶標，然后經(jīng)分析、歸類，列出與原方適應(yīng)證相聯(lián)系的20個潛在作用靶標，預(yù)測SCU會作用于胰島素受體。大量文獻表明，SCU在臨床上已經(jīng)廣泛運用于治療糖尿病的多種并發(fā)癥，有人對它這一藥理作用進行了分子機制研究[17,39]認為，其主要是抑制PKC的活性，抑制PKCβⅠ，βⅡ和δ的易位；下調(diào)血管生成因子的表達；抑制TGFβ1的表達而治療糖尿病并發(fā)癥，還沒有人對它是否是作用于胰島素受體而產(chǎn)生藥理作用進行研究，這就為后續(xù)的研究提供了一個新方向。

此外，苑婕[40]對心腦血管類中藥燈盞花進行了初步的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究，從化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫和Pubchem數(shù)據(jù)庫下載已報道的燈盞花所含化學(xué)成分。將這10個化合物與四種已知的靶點進行組合，構(gòu)建預(yù)測集。預(yù)測集進行相應(yīng)處理后，然后代入隨機森林（Random Forest，RF）模型進行靶點預(yù)測。預(yù)測后列出了與燈盞花化學(xué)成分作用頻次較高的前15個靶點，提示它們可能是燈盞花治療心腦血管類疾病的關(guān)鍵靶標；進一步地，應(yīng)用Cytoscape軟件構(gòu)建燈盞花成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)模型，對計算得到的燈盞花與心腦血管疾病相關(guān)的潛在作用靶點進行了文獻驗證，發(fā)現(xiàn)預(yù)測出的四類受體相應(yīng)靶點均有相關(guān)實驗研究的文獻報道。

（1）酶蛋白受體

預(yù)測的潛在作用靶點主要磷酸二酯酶3B（cGMP-inhibited 3′，5′-cyclic phosphodiesterase B，PDE3B），細胞色素 P450 2C19酶（cytochrome P450 2C19，CYP2C19）等。賀師鵬、楊挺的實驗推測燈盞花顆粒的作用可能是抑制PDE，升高血小板內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）的含量，使細胞內(nèi)Ca2+濃度降低，從而產(chǎn)生抑制血小板聚集，增加腦組織血供，保護缺血性腦組織的作用。證實了這一靶點的預(yù)測。

（2）離子通道受體

預(yù)測的潛在作用靶點主要是電壓依賴型鈣通道（voltage-dependent calcium channel，CACN）受體，電壓門控型鉀離子通道（potassium voltage-gated channel，KCN）受體，鈉通道蛋白（sodium channel protein，SCN）受體，γ-氨基丁酸受體（gamma-aminobutyric acid receptor，GABA）等。鄭廣華、潘雪刁、王麗娟、唐承靜等通過研究發(fā)現(xiàn)SCU可能是通過抑制電壓依賴性Ca2+通道，開放心室肌細胞的K+通道，直接阻斷Na+通道等方式產(chǎn)生抗心律失常的作用?；疽沧C實了預(yù)測與實驗結(jié)果的一致性。

（3）G蛋白受體

預(yù)測的潛在作用靶點主要是腎上腺素受體（adrenergic receptor，ADR）、5-羥 色 胺 受 體（5-hydroxytryptamine receptor，5-HT）等。王勇等在研究SCU抗腎上腺素實驗性心律失常的作用中推測，SCU的作用可能是通過多方面的機制而產(chǎn)生的，如阻斷β-ADR、抑制Ca2+內(nèi)流、抑制K+外流等。而王兆鋮、陳一岳在SCU有無拮抗5-HT的作用上有分歧。SCU是否作用于ADR，5-HT受體還不能完全確定，仍有待進一步研究。

（4）核蛋白受體

預(yù)測的潛在作用靶點主要是核受體（estrogen receptor，ER），預(yù)測結(jié)果與文獻驗證有差異。羅祖明等在燈盞花對腦I/R保護作用的實驗研究中發(fā)現(xiàn)，燈盞花未能使I/R后大腦神經(jīng)元ER增加，說明燈盞花的腦保護作用不是通過ER實現(xiàn)的。說明通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法預(yù)測藥物作用靶點還有一定的不準確性和局限性，這是現(xiàn)有的技術(shù)所無法避免的，所以需要用實驗對預(yù)測的結(jié)果進行進一步驗證并不斷完善網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法。

3.3 神經(jīng)、血管保護作用

張靜等[41]觀察燈盞細辛對大腦皮層神經(jīng)細胞存活的影響證實燈盞細辛具有神經(jīng)保護功能且SCU是其主要腦神經(jīng)保護活性成分。

尹延慶等[42]通過研究發(fā)現(xiàn)，SCU能作為PKC的非競爭性抑制劑，抑制PKC-γ蛋白表達，減輕由PKC-γ介導(dǎo)的興奮毒性氨基酸釋放引起的神經(jīng)損傷。

Ya-Juan CHEN等[43]通過缺氧再給氧大鼠模型SCU預(yù)孵育冠狀動脈血管后的實驗結(jié)果表明SCU通過激活蛋白激酶G（protein kinase G，PKG）信號通路以內(nèi)皮依賴性方式誘導(dǎo)冠狀動脈血管舒張并修復(fù)缺氧再給氧誘導(dǎo)的血管損傷。

4 結(jié)語

綜上所述，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)已經(jīng)開始在藥理學(xué)研究中廣泛應(yīng)用，并且很多預(yù)測的結(jié)果經(jīng)實驗驗證也與預(yù)測的結(jié)果基本一致，說明網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法是一種新興的，有效的，現(xiàn)代藥理學(xué)研究可以使用的方法，它為藥理學(xué)從分子層面研究藥物對疾病的作用機制提供了線索，也為開發(fā)藥物新的作用機制提供了可能，使得傳統(tǒng)、有效、安全的藥物，得以有新的臨床應(yīng)用，也為現(xiàn)在新藥研發(fā)失敗率高這一難題提供了一個可行的解決方法。

黃酮類化合物，因為結(jié)構(gòu)相似，所以有很多相似的藥理作用，可以將其類比研究。既可以找出彼此間的共性，使臨床應(yīng)用中有替代品可供選擇，也可以發(fā)掘各自特有的藥理作用，拓寬臨床適用范圍。這一方法也可用于其他有效成分結(jié)構(gòu)相似的中藥的藥理學(xué)分子機制研究，由于這類中藥藥理作用廣泛，通過多靶點，多途徑作用于人心腦血管系統(tǒng)，腫瘤細胞或組織。雖然大量文獻報道集中在黃酮類化合物的傳統(tǒng)藥理分子機制得基礎(chǔ)研究以及臨床應(yīng)用，為它現(xiàn)有的心腦血管、抗腫瘤方面的臨床應(yīng)用提供了理論一定依據(jù)，但還有許多網(wǎng)絡(luò)藥理作用的分子機制仍不清楚，這就需要結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)來協(xié)助我們?nèi)ネ诰蚰切┻€未被人們發(fā)現(xiàn)和研究的作用機制，為發(fā)現(xiàn)新的藥理作用提供理論依據(jù)和研究方向。

SCU作為燈盞花的主要活性成分，在臨床上得到廣泛地應(yīng)用，很多人對它的作用機制進行了研究，但主要是對它心腦血管方面的作用機制進行研究，雖有人報道過一些新的臨床應(yīng)用，但具體的分子機制并未做研究，使這些新的臨床應(yīng)用缺乏有力的理論依據(jù)。其作用機制復(fù)雜，盲目地依靠現(xiàn)有文獻進行分子機制假設(shè)，不僅耗費大量的實驗資源，且研究的層面也很局限，傾向于集中于文獻已報道的靶點上進行反復(fù)研究，可能會錯過它某些未知的作用靶點。如果運用上網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，對其的作用靶點進行預(yù)測，對預(yù)測出的作用靶點進行實驗驗證，既節(jié)省經(jīng)費、時間，也節(jié)省人力、物力，使研究更高效，準確，還可能會發(fā)現(xiàn)新的作用靶點，為發(fā)現(xiàn)其新的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。查閱中文數(shù)據(jù)庫知網(wǎng)、萬方、維普，以及外文數(shù)據(jù)庫Pubmed后僅找到兩篇中文文獻運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對SCU的藥理作用進行研究，說明關(guān)于SCU的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究還不夠深入，還有很多未知的領(lǐng)域可以被挖掘。這兩篇文獻運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對SCU心腦血管作用的分子靶點進行了初步的研究，并經(jīng)過查閱相關(guān)文獻，驗證了預(yù)測結(jié)果與其他人實驗研究的結(jié)果有較高的一致性，說明了這一方法的可行性，為后續(xù)燈盞花乙素其他分子機制研究提供了參考的范例。作為黃酮類化合物，結(jié)構(gòu)相似性使得它可能也會具有其他類黃酮化合物所具有的藥理作用，因此它的藥理研究可以參考其他黃酮類化合物的現(xiàn)有的研究進行展開。