動(dòng)物疫病檢測結(jié)果分析及數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性影響因素

石偉峰

（遼寧省朝陽市畜牧獸醫(yī)監(jiān)測預(yù)警中心，遼寧 朝陽 122000）

動(dòng)物疫病監(jiān)測包括4個(gè)部分：采集、記錄、傳輸數(shù)據(jù)，整理分析數(shù)據(jù)，把通過分析獲得的信息在不同范圍內(nèi)發(fā)送和公布，根據(jù)獲得的信息采取行動(dòng)控制疫病。因此，監(jiān)測是與疫病預(yù)防控制緊密結(jié)合在一起，不可分離。樣品的檢測結(jié)果信息能夠揭示一些深層的東西，能夠提供流行病學(xué)調(diào)查需要的關(guān)鍵信息，但是需要謹(jǐn)慎、合理分析檢測結(jié)果，否則很有可能得出錯(cuò)誤的結(jié)論。

1 單個(gè)樣品的檢測結(jié)果分析

1.1 抗體檢測陽性結(jié)果分析

如果某份血清針對某種疫病的抗體檢測為陽性，如豬口蹄疫A型抗體檢測為陽性，通過分析可以得出5種結(jié)果：被檢測豬感染了A型口蹄疫，而且感染時(shí)間可能已經(jīng)超過7 d；被檢測豬接種過該型疫苗；體內(nèi)有母源抗體的存在；交叉反應(yīng)，即被檢測豬感染類似的病原，而且感染時(shí)間較長；假陽性，其原因可能是檢測方法不完美（如用于檢測抗體的抗原不純），或者檢測過程中存在失誤的操作。

在檢測過程中不能因?yàn)闄z測到抗體陽性就判定某個(gè)動(dòng)物感染了某種病原，如假定在某地發(fā)現(xiàn)某只羊小反芻獸疫抗體陽性，由于該地區(qū)的羊都沒有免疫小反芻獸疫疫苗，所以懷疑這只羊感染小反芻獸疫病毒。但是這只能是一種懷疑，不能說是確診，因?yàn)檫@個(gè)陽性檢測結(jié)果可能是不正確的，也就是假陽性。這時(shí)首先要隔離那只羊所在的羊群，防止可能存在的疫情擴(kuò)散開來，然后開展緊急流行病學(xué)調(diào)查，調(diào)查該地區(qū)的羊，特別是與那只羊同群的羊，是否出現(xiàn)可疑癥狀，是否攜帶小反芻獸疫病原，血清中針對小反芻獸疫的抗體水平如何，流動(dòng)性如何。如果臨床監(jiān)測沒有發(fā)現(xiàn)這些羊群曾經(jīng)出現(xiàn)過可疑疫情，病原學(xué)檢測結(jié)果全為陰性，但是群體的小反芻獸疫抗體有4%的陽性率，基本上可以認(rèn)定抗體檢測的陽性全部為假陽性。這是因?yàn)槿绻_實(shí)存在小反芻獸疫疫情，那么依據(jù)其流行病學(xué)特征，其感染率和抗體陽性率都應(yīng)該＞4%，而且對于從來沒有出現(xiàn)小反芻獸疫的地區(qū)，羊群感染小反芻獸疫應(yīng)該出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀。

1.2 抗體檢測陰性結(jié)果分析

如果某份血清針對某種疫病的抗體檢測為陰性，也同樣存在5 種情況：被檢測畜禽沒有自然感染該病毒；沒有人工接種該型疫苗；被檢測畜禽感染了該病原，但未產(chǎn)生抗體（原因是處于感染的早期，或者先天感染導(dǎo)致免疫耐受，或者是免疫功能低下，或者是因?yàn)樘厥獾倪z傳體質(zhì)）或者接種對應(yīng)的疫苗，但是無刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體（原因是新接種的，或者疫苗有問題，或者接種方法不對、免疫抑制病、母源抗體等）；痊愈后，經(jīng)過較長時(shí)間，抗體水平自然下降到檢測不出或消失；假陰性，其原因可能是檢測方法不完美（如用于檢測抗體的抗原量不足或結(jié)構(gòu)不對，試劑保存條件不正確），或者檢測過程中存在失誤的操作。

因此，也不能因?yàn)闄z測到抗體陰性就就斷定未感染某種病原或者疫苗免疫無效。舉例說來，假定在某地開展禽流感緊急免疫，免疫后沒有檢出禽流感抗體，不能斷定疫苗免疫失敗；免疫后沒有檢出禽流感抗體的原因可能是疫苗才接種數(shù)日，還沒有刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，或者檢測方法不好，靈敏度太低。

1.3 病原檢測陽性結(jié)果分析

如果某份樣品病原學(xué)檢測為陽性，如大腸桿菌檢測為陽性，常見情況有3種：被檢測畜禽自然感染了大腸桿菌病原，并且大腸桿菌是主要致病因素；被檢畜禽自然感染了大腸桿菌，但是大腸桿菌不是主要的致病因素，只是混合或繼發(fā)感染的病原；假陽性，通常在PCR 病原學(xué)檢測或免疫學(xué)檢測中比較常見。

因此不能通過簡單的病原檢測陽性就判定是某個(gè)動(dòng)物發(fā)病的原因。例如從一只咳嗽發(fā)熱的豬體內(nèi)檢測到豬鏈球菌，不能斷定豬鏈球菌引起這只豬咳嗽發(fā)熱。豬鏈球菌所發(fā)揮的作用還需要其他一些信息才能確定。

1.4 病原檢測陰性結(jié)果分析

如果某份樣品病原學(xué)檢測為陰性，如口蹄疫病原學(xué)檢測為陰性，常見情況有3種：被檢測畜禽個(gè)體沒有感染口蹄疫病原；被檢測畜禽已經(jīng)感染過該病原，但已經(jīng)被機(jī)體清除；假陽性，常見于病原分離方法檢測。

因此也不能因?yàn)椴≡瓕W(xué)檢測陰性就斷定某個(gè)畜禽未感染該病原。比如從一只患關(guān)節(jié)炎的豬體內(nèi)沒有檢測到豬鏈球菌，不能排除豬鏈球菌是引起這頭豬患關(guān)節(jié)炎的病原。樣品采集、運(yùn)輸、檢測等諸多環(huán)節(jié)都存在諸多因素可以導(dǎo)致本來豬鏈球菌病原學(xué)陽性的檢測結(jié)果呈陰性。

2 群體樣品的檢測結(jié)果分析

群體樣品的檢測結(jié)果分析時(shí)，需要考慮以下4個(gè)方面。檢測方法本身的特性，檢測方法具有有效性、準(zhǔn)確性、精確性、精密性、可重復(fù)性和可復(fù)制性，以及檢測方法的靈敏度、特異性、真陽率和真陰率。疫病的頻率，被檢測疫病的頻率，包括發(fā)病率、流行率、感染率、免疫合格率等。陽性結(jié)果的聚集現(xiàn)象，例如，某次流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)陽性樣品都集中在某個(gè)地區(qū)，或者累積數(shù)次流行病學(xué)調(diào)查的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)某種疫病的陽性樣品都集中在某個(gè)季節(jié)，這些聚集現(xiàn)象是分析疫病的分布特征、發(fā)展態(tài)勢和防控措施的重要信息。信息的綜合能夠較為全面的反映現(xiàn)實(shí)情況，也有助于反映深層次的規(guī)律。例如，在進(jìn)行高致病性禽流感病原學(xué)調(diào)查時(shí)，綜合臨床信息、免疫信息、抗體檢測信息和病原檢測信息，能夠判定疫苗對當(dāng)前的毒株（可能已發(fā)生變異）是否有效。例如調(diào)查發(fā)現(xiàn)，某地家禽免疫后，高致病性禽流感抗體都很高，但從某些抗體水平較高的家禽中檢測到高致病性禽流感病毒，說明免疫所用的疫苗無法阻擋病毒的感染。

3 疫苗免疫效果監(jiān)測

因商品畜禽和種用畜禽用途不同，而且同用途的代次也有差異，因此所選用的疫苗和免疫程序也會(huì)不同。商用畜禽主要考慮成活率，從而保證產(chǎn)肉率，種用畜禽在此基礎(chǔ)上還要考慮到子代均勻的母源抗體。

在疫苗免疫程序和用量相同的情況下，可以根據(jù)免疫保護(hù)率高低和整齊度，對是否存在野毒感染產(chǎn)生的抗體進(jìn)行初判，如果存在抗體水平異常升高且群體免疫水平不均衡時(shí)，極有可能有野毒的存在?？贵w水平是否均勻有效與以下幾個(gè)方面有關(guān)。

畜群整體健康情況。健康的畜群特別是免疫器官良好的情況下，才能產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答。如果存在免疫抑制性疾病時(shí)就會(huì)造成免疫失敗，比如雞群存在法氏囊炎、傳貧、呼腸孤病、J-亞型白血病等感染時(shí)，或者豬群有豬藍(lán)耳病病毒、豬環(huán)狀病毒、豬瘟、豬流感病毒、弓形體病、附紅細(xì)胞體病、傳染性胸膜肺炎感染時(shí)，都會(huì)造成免疫失敗。影響畜禽健康的因素有很多，但最主要還是精細(xì)的飼養(yǎng)管理和優(yōu)良的品種。

當(dāng)?shù)匾卟×餍星闆r。除了國家和省里規(guī)定的強(qiáng)制免疫種類外，要根據(jù)當(dāng)?shù)匾卟〉牧餍星闆r，有針對性選擇疫苗的種類以及接種次數(shù)。

母源抗體的頡頏情況。當(dāng)對新生畜禽進(jìn)行免疫時(shí)，母源抗體較高時(shí)，會(huì)與疫苗發(fā)生頡頏作用，從而降低免疫效果。因此當(dāng)群體母源抗體水平比較均衡時(shí)，抗體值較高，建議推遲首免時(shí)間，反之，提前首免時(shí)間；如果當(dāng)母源抗體水平不均衡，高低都存在時(shí)，建議進(jìn)行多次免疫，使所有畜禽都達(dá)到抗體保護(hù)水平。

多次免疫間隔情況。根據(jù)免疫后抗體的維持時(shí)間決定，一般來說，首次進(jìn)行免疫主要為了激活免疫應(yīng)答，產(chǎn)生的抗體水平較低并且維持時(shí)間較短，因此要縮短與二免的時(shí)間間隔；二次加強(qiáng)免疫后，抗體水平不但高而且維持時(shí)間也會(huì)變長，所以可以適當(dāng)延長三免的時(shí)間。

疫苗間的相互干擾作用。多種疫苗同時(shí)進(jìn)行免疫時(shí)，會(huì)產(chǎn)生干擾作用，更不能混在一起使用，一般來說最少間隔時(shí)間為3 d。

疫苗的活力強(qiáng)弱。一般來說疫苗的活力越強(qiáng)，免疫效果越好，但對畜禽產(chǎn)生的應(yīng)激也越大。這種疫苗多用于日齡較大或加強(qiáng)免疫的畜禽。

免疫方式和操作。要根據(jù)疫苗的種類選擇適合的免疫方式，從而發(fā)揮免疫的最大效果，常用的免疫方式有滴鼻點(diǎn)眼、皮下注射、肌肉注射、噴霧免疫和飲水等。免疫操作是保障免疫成功的關(guān)鍵，正確和規(guī)范的操作手法才能保證疫苗用量均等和最大限度的減少應(yīng)急。

4 影響檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性因素

對樣品檢測結(jié)果分析是否準(zhǔn)確，最主要的還要看檢測后所呈現(xiàn)出來的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確程度，數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確程度能夠完美的體現(xiàn)出檢測機(jī)構(gòu)水平的檢測水準(zhǔn)，這一檢測水準(zhǔn)直接關(guān)系到該檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的發(fā)展，關(guān)系到為政府和社會(huì)提供的檢測數(shù)據(jù)的是否準(zhǔn)確可靠，甚至關(guān)系到政府的決策。而影響實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的因素多種多樣，主要是由人員、設(shè)施條件、儀器設(shè)備、檢驗(yàn)方法、檢測過程、試劑和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等諸多因素的影響[1-2]。為確保實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果真實(shí)有效，應(yīng)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行綜合管控。

4.1 專業(yè)技術(shù)人員對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

從事動(dòng)物疫病檢測的專業(yè)技術(shù)人員是第一責(zé)任人，所有開展動(dòng)物疫病檢測工作都是以實(shí)驗(yàn)室專業(yè)技術(shù)人員為中心，因此檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性直接取決于專業(yè)技術(shù)人員的專業(yè)水平的高低[3]。動(dòng)物疫病檢測工作是專業(yè)性非常強(qiáng)的技術(shù)工種，從事該工作的實(shí)驗(yàn)室人員必須具備較強(qiáng)的專業(yè)知識(shí)和熟練的操作能力；實(shí)驗(yàn)室為了要保證檢測數(shù)據(jù)的質(zhì)量，專業(yè)技術(shù)人員必須要熟悉各種檢測的操作流程和使用相關(guān)儀器設(shè)備的使用能力；專業(yè)技術(shù)人員還應(yīng)具有一定的從業(yè)經(jīng)驗(yàn)和綜合判斷能力。為此，從事動(dòng)物疫病檢測的專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)定期開展綜合業(yè)務(wù)培訓(xùn)，組織開展內(nèi)部比對活動(dòng)，每年進(jìn)行能力驗(yàn)證，并對從業(yè)人員進(jìn)行定期考核，尤其是對實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備的實(shí)操要進(jìn)行考核，通過這些途徑來不斷的提高實(shí)驗(yàn)室從業(yè)人員的專業(yè)技術(shù)水平，以便能更好地完成動(dòng)物疫病檢測工作。同時(shí)專業(yè)技術(shù)從業(yè)人員還必須熟練掌握各種動(dòng)物疫病的常規(guī)檢測方法，操作過程中要嚴(yán)格按照國家規(guī)定的實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，按步進(jìn)行操作，重視檢驗(yàn)檢測過程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)，不能隨心所欲，確保檢測過程無錯(cuò)誤，這樣才能提高檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

4.2 實(shí)驗(yàn)室硬件條件對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

實(shí)驗(yàn)室的硬件條件的好壞是決定檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的先決條件，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和設(shè)施條件必須滿足相關(guān)國家相關(guān)法律法規(guī)、技術(shù)規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)的要求[4]。實(shí)驗(yàn)室硬件條件達(dá)不到檢測的標(biāo)準(zhǔn)，就會(huì)造成檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，甚至造成本次檢測為無效檢測。在建造設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室時(shí)要嚴(yán)格按照國家相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，在使用實(shí)驗(yàn)室時(shí)每天要對實(shí)驗(yàn)室的溫濕度等相關(guān)情況進(jìn)行如實(shí)記錄，如發(fā)現(xiàn)不利于實(shí)驗(yàn)室檢測的相關(guān)情況要及時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的處理；對于實(shí)驗(yàn)室操作間內(nèi)的物品及用具要定期進(jìn)行清潔消毒，保證實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施條件完全滿足相關(guān)要求，消除由于實(shí)驗(yàn)室硬件條件對檢測數(shù)據(jù)帶來的影響。

4.3 檢測方法對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

檢測方法是對數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性最直接最主要的影響因素，檢測方法的選擇要嚴(yán)格按照相關(guān)的技術(shù)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選擇，不可具有隨意性，要選擇適宜的檢測方法[5]。在實(shí)際檢測工作中，檢測人員要根據(jù)相關(guān)檢測的指標(biāo)進(jìn)行選擇適宜的檢測方法，并定期對檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行更新，避免在檢測中出現(xiàn)選擇已經(jīng)作廢的檢測方法來進(jìn)行檢測，從而影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

4.4 檢測儀器準(zhǔn)確度對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

檢測儀器設(shè)備的準(zhǔn)確度是對一個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測的最基本要求，是影響檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的直接因素之一，因此，要定期對檢測儀器設(shè)備進(jìn)行定期維護(hù)，對檢測儀器要進(jìn)行定期計(jì)量檢定，在使用前要進(jìn)行校準(zhǔn)，在使用過程中要嚴(yán)格選擇檢測設(shè)備的精度、量程等與檢測項(xiàng)目相適宜，尤其是對于一些對環(huán)境等因素要求比較嚴(yán)格的檢測設(shè)備，更要做好檢測儀器準(zhǔn)確性的檢定工作，確保檢測數(shù)據(jù)真實(shí)有效。

4.5 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

針對動(dòng)物疫病檢測來說，檢測試劑及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇對檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性有著直接影響。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行動(dòng)物疫病檢驗(yàn)中，需采用通過國家GMP 認(rèn)證的試劑，最好這些試劑與國標(biāo)方法相同，對于買來的試劑，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室必須對試劑做確認(rèn)試驗(yàn)。不同批次的試劑也要進(jìn)行比對。

4.6 抽樣和樣品制備對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

抽樣和樣品制備是檢測工作中重要的一步，按照抽樣的相關(guān)要求進(jìn)行抽取樣品，才能保證樣品具有代表性[6]。在抽取樣品過程中，應(yīng)根據(jù)不同的檢測內(nèi)容和不同的檢測目的，選擇相應(yīng)的抽樣標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測結(jié)果具有代表性。抽樣的樣品制備同樣也影響檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，抽取的樣品要嚴(yán)格按照相應(yīng)的檢測方法的要求進(jìn)行處理，不可隨意處理或減少處理的環(huán)節(jié)，使制備的樣品符合檢測標(biāo)準(zhǔn)，提高檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

4.7 檢測時(shí)間對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

動(dòng)物疫病檢測過程中抽取的一些特定樣品由于其保質(zhì)期較短，所以對檢測時(shí)間有一定要求，對于這類樣品一定要按照在規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行處理，及時(shí)檢測，消除時(shí)間對檢測結(jié)果的影響。

4.8 質(zhì)量控制對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制程序及其相關(guān)計(jì)劃是監(jiān)控檢測全過程的有效手段。比對試驗(yàn)和驗(yàn)證試驗(yàn)在本質(zhì)上是對一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測水平及能力的真實(shí)考查，通過這些手段，可以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)堅(jiān)持利用人員對比、留樣檢測、盲樣檢測等方法對檢測工作進(jìn)行驗(yàn)證，還可通過借助外部力量進(jìn)行驗(yàn)證，尤其是實(shí)驗(yàn)室間的比對。如通過上述方法進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)異常，應(yīng)積極找出原因，并針對原因提出改進(jìn)的相關(guān)措施，保證檢測數(shù)據(jù)的真實(shí)可靠。

4.9 原始記錄對檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的影響

原始記錄作為實(shí)驗(yàn)室檢測工作的最終結(jié)果十分重要，是動(dòng)物疫病檢測結(jié)果的的最終體現(xiàn)，原始記錄的準(zhǔn)確性和可靠性，直接關(guān)系到對養(yǎng)殖戶的切身利益，直接影響政府的決策。在實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)束后，專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)按照相關(guān)技術(shù)規(guī)范的要求及程序，出具本次實(shí)驗(yàn)的檢測數(shù)據(jù)，得出本次動(dòng)物疫病檢測的結(jié)果，原始記錄的數(shù)據(jù)要準(zhǔn)確、真實(shí)，嚴(yán)格按數(shù)據(jù)修約規(guī)則對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，結(jié)果中的數(shù)據(jù)一定要與標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定保持一致，標(biāo)記好法定計(jì)量單位，最終得出正確客觀的結(jié)果。

5 小 結(jié)

動(dòng)物疫病檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性受多種因素影響，定期培訓(xùn)提高專業(yè)技術(shù)人員的專業(yè)素質(zhì)，不斷提高實(shí)驗(yàn)室設(shè)施水平，制定適合本地區(qū)的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)和方法，及時(shí)更新檢測標(biāo)準(zhǔn)，按照規(guī)定檢定計(jì)量器具，正確使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，把好抽樣關(guān)，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行樣品的制備及檢測，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確記錄和分析，才能最終得到準(zhǔn)確性高的動(dòng)物疫病檢測結(jié)果。只有牢牢抓住這些關(guān)鍵環(huán)節(jié)，才能不斷提升檢測水平，從而確保檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。