蜜蜂檢測環(huán)境中殺蟲劑的試驗設(shè)計

黃仁才

（福建農(nóng)林大學(xué)，福州 350002）

蜜蜂對于殺蟲劑等有毒有害物質(zhì)是極其敏感的，蜜蜂在通過噴灑過殺蟲劑的植物花朵和蜜腺進行花粉的采集和蜂蜜的積累時，可以根據(jù)蜜蜂的身體及蜂產(chǎn)品的狀況來判斷殺蟲劑的毒性大小[1-4]。例如，一些毒性較強的殺蟲劑可使蜜蜂在接觸噴灑過的植物后就立即死亡或因中毒而無法返回蜂巢而死在采蜜途中，對于一些毒性較小的殺蟲劑，在蜜蜂接觸噴灑過的植物后不會立即死亡，甚至可以將花粉和蜂蜜帶回蜂巢而緩慢死亡，或?qū)⒂卸拘缘臍⑾x劑的有毒有害物質(zhì)體現(xiàn)在花粉或蜂蜜等蜂產(chǎn)品中[5-10]。因此，可以根據(jù)統(tǒng)計蜜蜂在蜂巢內(nèi)外的死亡數(shù)量或者占比，以及蜂產(chǎn)品中有毒有害殺蟲劑的檢測來確定環(huán)境中殺蟲劑污染的情況和程度[11-15]。此外，還有一些環(huán)境中殺蟲劑可能不會造成蜜蜂的死亡，而是引起蜜蜂的應(yīng)激反應(yīng)，如愛蜇人、狂飛亂舞等，這些都使得通過分析蜜蜂的自身不良情況來分析和判斷環(huán)境中殺蟲劑的污染狀況[1]。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

目前依據(jù)檢測表明，環(huán)境中常用的殺蟲劑包括有機氯類、氨基甲酸鹽及有機磷類殺蟲劑，如常見的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽乳油、典型殺蟲劑吡蟲啉煙堿類殺蟲劑、氟胺氰菊酯類擬除蟲菊酯類殺蟲劑等[1]。本試驗通過選用吡蟲啉和氟胺氰菊酯殺蟲劑以蜜蜂的中毒致死濃度，通過采用“飼喂法”“藥膜法”和“小燒杯法”來分別得出殺蟲劑的毒性回歸方程，進而實現(xiàn)蜜蜂靈敏檢測環(huán)境中殺蟲劑的試驗?zāi)康?。試驗組分別飼喂管法、藥膜法、小燒杯法進行殺蟲劑吡蟲啉、氟胺氰菊酯的試驗，每個處理20 只成年工蜂，試驗重復(fù)3 次，每次重復(fù)試驗20 只蜜蜂。對照組分別采用飼喂管法、藥膜法、小燒杯法進行殺蟲劑吡蟲啉、氟胺氰菊酯的試驗，每個處理20 只成年工蜂，試驗重復(fù)3次，每次重復(fù)試驗20只蜜蜂。

1.2 試驗動物

蜜蜂取自農(nóng)業(yè)大學(xué)蜜蜂研究所中的同一蜂齡和王蜂群的成年工蜂，蜜蜂身體狀況一致，大小統(tǒng)一，然后放入人工氣候箱中飼養(yǎng)同一時間待試驗所用。

1.3 試驗材料

吡蟲啉購于湖北中料化工有限公司，氟胺氰菊酯購于河南省長葛市翼蜂產(chǎn)品有限公司，丙酮和血清瓶購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司，人工氣候箱購于上海左樂儀器有限公司。

1.4 試驗方法

飼喂管法：選用飼養(yǎng)同一時間的成年工蜂來用于試驗，試驗用的蜂籠的長為22.8 cm、寬為19.2 cm、高為24.0 cm的網(wǎng)紗襯里的蜂籠，在蜂籠的頂部放1個裝有用蔗糖水溶液稀釋過的吡蟲啉殺蟲劑藥液的飼喂管來供蜜蜂吸食，過4 h將飼喂管取出，并記錄消耗藥液的量，然后改用裝有蔗糖水溶液且無藥液的飼喂管繼續(xù)供蜜蜂吸食，本試驗設(shè)計空白對照，在飼喂管中只裝入蔗糖水溶液，試驗組可以采用蔗糖水將吡蟲啉藥液稀釋成不同的濃度記錄不同的濃度梯度試驗組，然后將空白組和試驗組均置于室溫和相對濕度在約65%的避光環(huán)境中進行，然后計時在24 h進行1次蜜蜂中毒和死亡情況的記錄，在48 h再記錄1次蜜蜂中毒和死亡狀況，同時，利用氟胺氰菊酯殺蟲劑進行同樣的試驗設(shè)計，來對蜜蜂的中毒和死亡率進行相應(yīng)的記錄[3]。

藥膜法：選用在人工氣候箱中飼養(yǎng)同一時間的成年工蜂來進行試驗，采用丙酮將吡蟲啉殺蟲劑藥液稀釋成不同濃度梯度的試驗藥液，然后取1 mL 不同濃度的吡蟲啉稀釋液加入到100 mL 的血清瓶中，然后將血清瓶放在水平桌面上來回滾動，以達到吡蟲啉藥液均勻的涂在血清瓶璧上，以至血清瓶中的藥液完全涂在血清瓶內(nèi)壁上而無明顯液體存于瓶內(nèi)，然后將涂抹好不同濃度吡蟲啉藥液的血清瓶放于陰涼處進行干燥待用，并且在血清瓶底放入用蜂蜜水浸沒過的棉球，并用細窗紗將瓶口進行密封，然后將經(jīng)過不同處理的血清瓶放入人工氣候箱中，試驗設(shè)計的空白組只用丙酮而不加吡蟲啉藥液，每個處理選用20 只蜜蜂，在氣候箱溫度為33 ℃，相對濕度為60%時進行蜜蜂的試驗，然后同樣分別在24 h 和48 h 各進行1次蜜蜂中毒和死亡率情況的記錄，同時，利用氟胺氰菊酯殺蟲劑進行同樣的試驗設(shè)計，來對蜜蜂的中毒和死亡率進行相應(yīng)的記錄[6]。

小燒杯法：同樣選用飼養(yǎng)同一時間的成年工蜂來用于試驗，用蔗糖水溶液將吡蟲啉藥液進行不同濃度的稀釋來配置成不同濃度梯度的吡蟲啉藥液待用，取5 mL 配置的吡蟲啉藥液注入放有脫脂棉的5 mL小燒杯中，然后再將5 mL小燒杯移入500 mL的大燒杯中，在500 mL大燒杯中放入20只蜜蜂，然后將大燒杯進行封口處理。試驗設(shè)計的空白組只在放有脫脂棉的5 mL 小燒杯中注入5 mL蔗糖溶液而不含吡蟲啉藥液，然后將不同處理的500 mL 大燒杯放于設(shè)置為室溫，相對濕度為70%左右的人工氣候箱中，同樣在試驗24 h 和48 h 時對不同處理的蜜蜂的中毒和死亡情況進行統(tǒng)計和記錄，同時，利用氟胺氰菊酯殺蟲劑進行同樣的試驗設(shè)計，來對蜜蜂的中毒和死亡率進行相應(yīng)的記錄[1]。

1.5 數(shù)據(jù)分析

以吡蟲啉藥液或者氟胺氰菊酯的濃度對數(shù)值為橫坐標(biāo)自變量（X），以相應(yīng)吡蟲啉藥液或氟胺氰菊酯濃度下的蜜蜂中毒和死亡率為縱坐標(biāo)（Y）來對數(shù)據(jù)進行回歸分析，采用DPS 數(shù)據(jù)處理軟件對試驗結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析，從而得出線性回歸方程、95%置信限等。

2 試驗結(jié)果

根據(jù)上述3種試驗方法的數(shù)據(jù)，以吡蟲啉藥液或者氟胺氰菊酯的濃度對數(shù)值為橫坐標(biāo)自變量，以相應(yīng)濃度下的蜜蜂中毒死亡率為縱坐標(biāo)來對數(shù)據(jù)進行回歸分析，進而建立吡蟲啉或氟胺氰菊酯藥液濃度與蜜蜂中毒死亡率之間的關(guān)系。

2.1 吡蟲啉殺蟲劑對蜜蜂的毒性影響分析

吡蟲啉殺蟲劑對蜜蜂的毒性影響分析見表2。

表1 吡蟲啉藥液對蜜蜂的毒性影響回歸曲線（24 h）

表2 吡蟲啉藥液對蜜蜂的毒性影響回歸曲線（48 h）

由表2 可知，采用“飼喂管法”“藥膜法”“小燒杯法”，吡蟲啉藥液對蜜蜂的24 h 致死中濃度（LC50）分別為3.138、0.677、2.334 mg·L-1，由此可知，“飼喂管法”的蜜蜂致死濃度最高，“藥膜法”的蜜蜂致死濃度最低?！帮曃构芊ā北取八幠しā焙汀靶ā钡拿鄯渲滤乐袧舛纫?，而采用“藥膜法”的蜜蜂致死中濃度最低。

2.2 氟胺氰菊酯殺蟲劑對蜜蜂的毒性影響分析

氟胺氰菊酯殺蟲劑對蜜蜂的毒性影響分析見表3、4。

表3 氟胺氰菊酯藥液對蜜蜂的毒性影響回歸曲線（24 h）

表4 氟胺氰菊酯藥液對蜜蜂的毒性影響回歸曲線（48 h）

由表3、4可知，氟胺氰菊酯對蜜蜂的毒性比吡蟲啉弱。采用“飼喂管法”“藥膜法”“小燒杯法”，氟胺氰菊酯對蜜蜂的24 h 致死中濃度（LC50）分別為178.453、7.227、139.535 mg·L-1。由此可知，蜜蜂處于藥膜環(huán)境中殺蟲劑的危害要遠大于直接飼喂管法和小燒杯法。

3 討論與結(jié)論

在進行蜜蜂檢測環(huán)境中殺蟲劑的試驗中，統(tǒng)一飼養(yǎng)的同齡蜜蜂、相同的試驗參數(shù)（如人工氣候箱的設(shè)置條件）等都可以減少試驗的系統(tǒng)誤差，從而使試驗得到的數(shù)據(jù)和結(jié)果具有有效性和代表性。通過試驗測試和分析，可得出以下結(jié)論：根據(jù)不同的試驗分析可知，環(huán)境中吡蟲啉殺蟲劑對蜜蜂的毒性影響要遠大于氟胺氰菊酯的毒性影響；根據(jù)不同的試驗方法“飼喂管法”“藥膜法”和“小燒杯法”來分別對同一種環(huán)境中的殺蟲劑進行蜜蜂的檢測試驗，其中“藥膜法”的蜜蜂致死中濃度（LC50）最低，蜜蜂處于藥膜環(huán)境殺蟲劑中的危害是最大的。