藏藥毛訶子水溶性化學(xué)成分研究＊

李 師，梁文儀，梁林金，葉 婷，簡(jiǎn)平，周 坤，張?zhí)m珍

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 102448）

藏藥毛訶子(Terminalia billirica(Gaert.)Roxb.)為使君子科（Combretaceae）欖仁樹屬（Terminalia Linn.）植物，主產(chǎn)于南亞、東南亞，少量分布于我國(guó)西藏、云南等地[1-3]。其去核果實(shí)常作為一種藏族習(xí)用藥材，具有清熱解毒，收斂養(yǎng)血，調(diào)和諸藥之功效，此外還具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗驚厥、保肝，降膽固醇、降血糖、預(yù)防心肌壞死等多種藥理活性[4-6]。傳統(tǒng)藏醫(yī)藥中，毛訶子常與余甘子和訶子配伍，即合稱為藏藥大三果，用于治療肝陽(yáng)上亢、肺胃熱盛等引起的“培根”、“赤巴”以及脾肺濕熱導(dǎo)致的“黃水”病[7-9]，關(guān)于毛訶子的化學(xué)成分研究較少，目前僅報(bào)道了13個(gè)化合物的分離鑒定[10-15]。本文對(duì)毛訶子水溶性部位化學(xué)成分進(jìn)行分離，為毛訶子的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 儀器與材料

Varian NOVA-600 MHz核磁共振儀（美國(guó)Varian公司）；Diaion HP-20大孔樹脂柱（日本三菱公司）；MCI gel CHP 20P樹脂柱（日本三菱公司）；C18（ODS）色譜柱（日本三菱公司）；Sephadex LH-20凝膠柱（Pharmacia公司）；Toyopearl HW-40（Coarse）（日本Tosoh公司）；Toyopearl HW-40（Fine）（日本Tosoh公司）；聚酰胺薄層板（浙江黃巖四青生化材料廠）；萃取、分離及純化所用有機(jī)試劑（分析純）均為北京化工廠生產(chǎn)。

所用藥材藏藥毛訶子是于2016年4月在西藏采集，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系劉春生教授鑒定為使君子科植物毗黎勒Terminalia billerica（Gaertn.）Roxb.干燥成熟去核果實(shí)，并在北京中醫(yī)藥大學(xué)植物標(biāo)本室保藏了一份標(biāo)本（編號(hào)：20160419）。

檢識(shí)：聚酰胺薄層，顯色劑：2%FeCl3乙醇溶液和FeCl3-K3[Fe(CN)6]水溶液

2 提取分離

干燥成熟去核的藏藥毛訶子果肉10 kg，粉碎，過(guò)5目篩，70%丙酮10倍量溫浸提取7天，溫浸4次，合并提取液，40℃減壓濃縮至無(wú)丙酮味，得藏藥毛訶子藥材總濃縮液，約5 L藥液，相當(dāng)于藥材濃度2 g·mL-1。利用溶劑萃取系統(tǒng)，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取藥材總濃縮液（每次萃取至有機(jī)層接近無(wú)色為止，便可更換下一種萃取溶劑），得到不同極性的萃取部位，40℃下再依次將各個(gè)部位減壓濃縮，并真空干燥成固態(tài)，得到石油醚萃取部位、二氯甲烷萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、水萃取部位。水萃取部位約200 g超聲分散于適量水中，過(guò)濾，濾液上大孔吸附樹脂Diaion HP-20柱，依次用10%、20%、30%、40%、50%、70%、95%EtOH進(jìn)行梯度洗脫，聚酰胺薄層檢識(shí)，2%FeCl3乙醇溶液和FeCl3-K3[Fe(CN)6]水溶液顯色，40℃下減壓回收溶劑至干，得到7個(gè)洗脫部分。30%EtOH（32.4 g）和50%EtOH（45.8 g）2個(gè)洗脫部分的干燥物分別超聲分散于適量水溶液后，再各自通過(guò)ODS柱，并依次用不同濃度甲醇梯度洗脫，回收溶劑分別通過(guò)，MCI gel CHP 20P和Sephadex LH-20（甲醇）柱純化后，行Toyopearl HW-40（Fine）反復(fù)純化，得到化合物3（11.1 mg）。流份Fr.23行ODS柱，以H2O-MeOH梯度洗脫后，再經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）柱和MCI gel CHP 20P樹脂純化，得到化合物1（6.2 mg）、化合物2（12.6 mg）、化合物4（9.3 mg）；流份Fr.25行MCI gel CHP 20P樹脂柱，以H2O-MeOH梯度洗脫，再經(jīng)Toyopearl HW-40（Fine）凝膠柱以H2O-MeOH梯度洗脫，得到化合物5（6.9 mg）；流份 Fr.27行 Toyopearl HW-40（Fine）凝膠柱，以H2OMeOH梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）柱和MCI gel CHP 20P樹脂交替反復(fù)純化，得到化合物6（5.7 mg）；化合物7（15.5 mg），化合物8（10.2 mg）化合物9（11.8 mg)、化合物10（9.6 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：類白色無(wú)定形粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 633[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 7.09（Galloyl，2H，s，H-2，H-6），δ 6.70（HHDP，1H，s，H-3′），δ 6.68（HHDP，1H，s，H-3），δ 4.98（1H，t，J=10.8，H-6b），δ 4.82（1H，s，H-3），δ 4.53（1H，m，H-5），δ 4.48（1H，t，J=1.5Hz，H-4），δ 4.18（1H，m，H-6a），δ 4.00（1H，d，J=1.8Hz，H-2）。13C-NMR（150MHz，CD3OD）：δ 95.02（Glc，C-1），δ 69.52（Glc，C-2），δ 71.72（Glc，C-3），δ 62.49（Glc，C-4），δ 76.23（Glc，C-5），δ 65.04（Glc，C-6），δ 120.63（Galloyl，C-1），δ110.93（Galloyl，C-2，C-6），δ 146.40（Galloyl，C-3，C-5），δ140.41（Galloyl，C-4），δ 166.69（Galloyl，C-7）；δ 125.47（HHDP，C-1），δ 116.73（HHDP，C-2），δ 108.31（HHDP，C-3），δ 137.70（HHDP，C-4），δ 145.64（HHDP，C-5），δ 145.23（HHDP，C-6），δ 170.12（HHDP，C-7），δ 125.48（HHDP，C-1′），δ 117.21（HHDP，C-2′），δ 110.13（HHDP，C-3′），δ 138.18（HHDP，C-4′），δ 146.05（HHDP，C-5′），δ 145.33（HHDP，C-6′），δ 168.53（HHDP，C-7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16-20]所報(bào)道基本一致，故推測(cè)該化合物為柯里拉京（Corilagin）。

化合物2：類白色無(wú)定形粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 309[M+Na]+。1H-NMR（600 MHz，D2O）：δ 7.16（1H，t，J=7.5Hz，H-4），δ 7.22（1H，d，J=8.4Hz，H-6），δ 7.38（1H，d，J=7.8Hz，H-5），δ 7.41（1H，t，J=7.2Hz，H-3），δ 4.73（1H，dd，J=12.6，11.4 Hz，H-7a），δ 5.12（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′），δ 3.94（1H，d，J=12.6 Hz，H-6b′），δ 4.53（1H，m，H-7b），δ 3.75（1H，dd，J=6.0，12.6 Hz，H-6a′），δ 3.63（1H，m，H-4′），δ 3.51（1H，t，J=9.3Hz，H-2′）。13CNMR（150MHz，D2O）：δ 100.39（Glc，C-1′），δ 72.87（Glc，C-2′），δ 76.00（Glc，C-3′），δ 69.30（Glc，C-4′），δ 75.50（Glc，C-5′），δ 60.41（Glc，C-6′），δ 154.46（C-1），δ 129.29（C-2），δ 129.56（C-3），δ 123.24（C-4），δ 129.60（C-5），δ 115.19（C-6），δ 59.14（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21-23]所報(bào)道基本一致，推測(cè)該化合物為水楊苷（Salicoside）。

化合物3：無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇）；ESI-MS：m/z 165[M+H]+。13C-NMR（150MHz，CD3OD）：δ 109.34（C-1），δ 82.63（C-2），δ 79.04（C-3），δ 84.76（C-4），δ 62.96（C-5），δ 60.57（-OCH3）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 3.59～4.00（m）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]所報(bào)道基本相符，推測(cè)化合物分別為甲基-α-D-阿拉伯糖苷（Methyl-α-D-arabinofuranoside）。

化合物4：無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇）。13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ 101.63（C-1），δ 71.57（C-2），δ 69.39（C-3），δ 65.22（C-4），δ 71.11（C-5），δ 64.48（C-6），δ 73.95（1-OCH3），δ 63.03（4-OCH3）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 3.45～3.49（m）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]所報(bào)道基本一致，推測(cè)該化合物為1，4-二甲基-β-D-吡喃果糖（1，4-dimethyl-β-D-fructopyranose。）

化合物5和化合物6：無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇）；ESIMS：m/z 179[M-H]-。13C-NMR（150MHz，D2O）：δ 65.91（C-1），δ 99.17（C-2），δ 69.39（C-3），δ 71.83（C-4），δ 71.26（C-5），δ 64.54（C-6）；δ 64.81（C-1′），δ 105.30（C-2′），δ 78.67（C-3′），δ77.21（C-4'），δ 83.57（C-5′），δ 64.81（C-6′）。1H-NMR（600 MHz，D2O）：δ 3.25-4.00（m）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]所報(bào)道基本相符，故本論文確定該化合物分別為β-吡喃果糖（β-fructopyranose）和β-呋喃果糖（β-fructofuranose）。

（注：在重水中，果糖以兩種形式存在，相互轉(zhuǎn)化，且吡喃型分布較多，約占75%，而呋喃型占20%左右。）

化合物7:類白色無(wú)定型粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 169[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 7.07（2H，s，H-2，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ 170.38（C=O），δ 121.94（C-1），δ 110.31（C-2，C-6），δ 146.37（C-3，C-5），δ 139.58（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27-28]所報(bào)道基本一致，推測(cè)該化合物為沒食子酸（Gallic acid）。

化合物8:土黃色無(wú)定型粉末（甲醇）；ESI-MS：m/z 301[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，Pyridine-d5）：δ 8.17（2H，s，H-5，H-5′）。13C-NMR（150MHz，Pyridine-d5）：δ 161.04（C=O，C-7，C-7′），δ 138.21（C-3，3′），δ 112.23（C-5，C-5′），δ 150.69（C-4，C-4′），δ 113.94（C-6，C-6′），δ 109.20（C-1，C-1′），δ 142.20（C-2，C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29-30]所報(bào)道基本一致，推測(cè)該化合物為鞣花酸（Ellagic acid）。

化合物9：棕黃色無(wú)定型粉末（甲醇）；FeCl3-K3[Fe(CN)6]溶液顯藍(lán)色斑點(diǎn)，推斷該化合物含有酚羥基。ESI-MS：m/z 963[M+Na]+。 1H-NMR（400 MHz，DMSO-d5）：δ 6.35（1H，d，J=9.6 Hz，H-1），δ5.44（1H，t，J=9.6 Hz，H-2），δ 5.96（1H，t，J=9.6Hz，H-3），δ5.42（1H，t，J=9.6 Hz，H-4），δ 4.44（1H，m，H-5），δ4.36（1H，d，J=11.2 Hz，H-6a）和δ4.53（1H，dd，J=11.2，6.4 Hz，H-6b），分別為葡糖上的質(zhì)子信號(hào)；此外δ7.00左右處有五個(gè)單峰，分別顯示2個(gè)質(zhì)子信號(hào)，為沒食子?；|(zhì)子信號(hào)，δ 6.96（2H，s，H-2′，H-6′），δ 6.90（2H，s，H-2″，H-6″），δ 6.83（2H，s，H-2?，H-6?），δ 6.80（2H，s，H-2″″，H-6″″），δ 6.75（2H，s，H-2″?，H-6″?），為五沒食子?；〈咸擒?。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d5）：δ 91.17（C-1），δ 71.39（C-2），δ 71.40（C-3），δ 70.05（C-4），δ 71.60（C-5），δ 67.24（C-6）為一個(gè)β-D-葡萄糖苷的碳信號(hào)；在低場(chǎng)區(qū) δ 163.42（C-7′），δ 163.94（C-7″），δ 164.98（C-7?），δ 164.30（C-7″″），δ 164.91（C-7″?）分別為五個(gè)酰基碳信號(hào)，且有五組對(duì)稱的苯環(huán)上碳信號(hào)，即δ 116.84（C-1′）、δ 108.20（C-2′，C-6′）、δ 144.87（C-3′，C-5′）、δ 138.25（C-4′）、δ 117.41（C-1″）、δ 108.22（C-2″，C-6″）、δ 144.95（C-3″，C-5″）、δ 138.40（C-4″）、δ 117.54（C-1?）、δ 108.27（C-2?，C-6?）、δ 144.99（C-3?，C-5?）、δ 138.60（C-4?）、δ 117.57（C-1″″）、δ 108.37（C-2″″，C-6″″）、δ 145.05（C-3″″，C-5″″）、δ 138.63（C-4″″）以及 δ 118.37（C-1″?）、δ 108.50（C-2?″，C-6?″）、δ 145.17（C-3″?，C-5″?）、δ 139.12（C-4?″），經(jīng)與文獻(xiàn)對(duì)照[31-33]，推測(cè)化合物9為1，2，3，4，6-五-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖吡喃苷。

化合物10：類白色無(wú)定形粉末（甲醇）；FeCl3-K3[Fe(CN)6]溶液顯藍(lán)色斑點(diǎn)，推斷該化合物含有酚羥基。ESI-MS m/z 953[M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ 6.52（1H，s，H-1）；δ 5.41（1H，brs，H-2），δ 5.06（1H，brs，H-3），δ 5.24（1H，brs，H-4），δ 4.87（1H，t，J=9.0 Hz，H-5），δ 4.82（1H，dd，J=10.8，9.0 Hz，H-6a）和 δ 4.44（1H，d，J=10.8 Hz，H-6b）分別為糖上的質(zhì)子信號(hào)；在δ 7.09處，顯示有一個(gè)沒食子?；p質(zhì)子信號(hào)，Galloyl，2H，s，H-2，6）；δ6.86，δ 6.66 有2個(gè)單質(zhì)子信號(hào)，為一個(gè)HHDP結(jié)構(gòu)的兩個(gè)氫。其余質(zhì)子信號(hào)為訶子酰基上的質(zhì)子信號(hào)，即δ7.50（1H，s，ChebubylH-3″），δ 4.91（1H，d，J=6.0 Hz，ChebubylH-2′），δ 5.06（1H，d，J=6.0 Hz，ChebubylH-3′），δ 3.83（1H，m，ChebubylH-4'），δ 2.12（2H，m，ChebubylH-5′）。 13C-NMR（150MHz，CD3OD）：δ 92.20（C-1），δ 70.78（C-2），δ 66.46（C-3），δ 66.67（C-4），δ 73.95（C-5），δ 62.09（C-6）為一個(gè)β-D-葡萄糖苷的碳信號(hào)；δ 119.76（Galloyl，C-1），δ 110.57（Galloyl，C-2，C-6），δ 145.01（Galloyl，C-3，C-5），δ 140.05（Galloyl，C-4），δ 165.92（Galloyl，C-7）為沒食子?；系奶夹盘?hào)；δ 115.65（HHDP，C-1），δ 124.49（HHDP，C-2），δ 107.87（HHDP，C-3），δ 145.21（HHDP，C-4），δ 137.24（HHDP，C-5），δ 145.28（HHDP，C-6），δ 166.06（HHDP，C-7）和δ 115.90（HHDP，C-1′），δ 125.53（HHDP，C-2′），δ 110.11（HHDP，C-3′），δ 146.82（HHDP，C-4′），δ 140.52（HHDP，C-5′），δ 146.22（HHDP，C-6'），δ 167.15（HHDP，C-7′）為 HHPD 結(jié)構(gòu)上的碳信號(hào)；δ 169.78（Chebubyl，C-1′），δ 64.68（ Chebubyl，C-2′），δ 41.41（Chebubyl，C-3′），δ 39.67（Chebubyl，C-4′），δ 30.15（Chebubyl，C-5′），δ 170.41（Chebubyl，C-6′），δ 174.07（Chebubyl，C-7'），δ 167.15（Chebubyl，C-8'），δ 117.29（Chebubyl，C-1″），δ 118.70（Chebubyl，C-2″），δ 117.31（Chebubyl，C-3″），δ 147.06（Chebubyl，C-4″），δ 138.33（Chebubyl，C-5″），δ 140.08（Chebubyl，C-6″）為訶子酰基上的碳信號(hào)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[34-35]所報(bào)道基本一致，推測(cè)該化合物為訶黎勒酸。

4 小結(jié)

本研究從毛訶子水萃取部位中分離得到了鞣質(zhì)類、酚酸類及糖類成分，其中柯里拉京（1）、水楊苷（2）、甲基-α-阿拉伯糖苷（3）、1，4-二甲基-β-D-吡喃果糖（4）、β-吡喃果糖（5）和 β-呋喃果糖（6）1，2，3，4，6-五-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖吡喃苷（9）和訶黎勒酸（10）為首次從毛訶子中分離得到，化合物2-6為首次從欖仁樹屬植物中分離得到。