UPLC用于喘可治注射液中淫羊藿苷穩(wěn)定性的考察

陳換飛 鄒靜 白蘭 彭婷 張梅（通訊作者）

（1成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 四川 成都 611137）

（2 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 四川 成都 610072）

喘可治注射液的主要成分為4種黃酮類化合物：朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷，因注射劑對主成分含量穩(wěn)定性要求嚴(yán)格，且2015版藥典針對淫羊藿飲片主要測定淫羊藿苷含量情況，故本文就喘可治注射液中指標(biāo)成分淫羊藿苷進(jìn)行UPLC分析測定，以實(shí)現(xiàn)喘可治注射液更準(zhǔn)確有效的質(zhì)量控制。

1.儀器與試藥

Ultimate 3000 U HPLC系統(tǒng)，PDA檢測器，Thermo Fisher公司；分析天平(上海市天平儀器廠)；離心機(jī)(LC-4016)；真空干燥箱(江蘇南京海汪制藥機(jī)械裝備有限公司)；藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱(LHH-150SD)；

淫羊藿苷對照品（中國食品藥品檢定研究院）；喘可治注射液（國藥四川醫(yī)藥集團(tuán)有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水為實(shí)驗(yàn)室自制重蒸水；色譜乙腈；分析純甲酸。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH‐C18 色譜柱（2.1 mm×150 mm,1.7μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水/0.1%甲酸（B）；梯度洗脫∶0～10min（15%A），10～30min（15%～25% A），30～45min（25%～35% A），45～60min（35%～50% A）；柱溫35℃；流速0.3mL/min；檢測波長270nm；進(jìn)樣量5μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥的淫羊藿苷對照品2.5mg于10mL容量瓶中，乙腈-0.1%甲酸水溶液（35：65）溶解并定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取喘可治注射液1ml，乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)稀釋至10ml，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 以乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)為溶劑，取對照品適量，配制含淫羊藿苷10、40、80、120、180、250μg/ml對照品溶液。依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以被測物濃度為橫坐標(biāo)x，被測物峰面積為縱坐標(biāo)y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=3.53×107X+52087，r=0.9998。結(jié)果表明，淫羊藿苷在0.01～0.25mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

圖1 淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.2 精密度考察 取“2.4.1”項(xiàng)下0.05mg/mL對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算精密度，RSD為0.08%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 準(zhǔn)確度考察 取同一0.05mg/mL對照品溶液，揮干溶劑后加入等量0.05 mg/mL淫羊藿苷對照品溶液，溶解，0.45μm微孔濾膜過濾，進(jìn)樣測定峰面積，計(jì)算回收率。見表。

表加樣回收率實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果（n=6）

2.4.4 重復(fù)性考察 取同一0.05mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定含量，得RSD小于1.1%，表明重復(fù)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性考察取 同一0.05mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時(shí)進(jìn)樣測定淫羊藿苷含量，得RSD為1.3%，表明該成分在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 淫羊藿苷含量測定

取藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中50℃、75%相對濕度條件下儲(chǔ)存7日的5個(gè)批次喘可治注射液，依“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定淫羊藿苷含量。

2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5批次高溫高濕儲(chǔ)存的喘可治注射液中淫羊藿苷含量分別為99.8%、100.2%、99.3%、99.0%、99.2%，平均含量為99.5%，RSD為0.49%。說明該注射液中淫羊藿苷成分在相對較高的溫度和濕度下儲(chǔ)存，穩(wěn)定性良好。

3.討論

本文建立了UPLC測定喘可治注射液中有效成分淫羊藿苷的方法，以乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）為流動(dòng)相，流速0.3mL/min，梯度洗脫。柱溫35℃，檢測波長270nm，進(jìn)樣量5μL。試驗(yàn)表明該分析方法精準(zhǔn)確度和重復(fù)性好，可有效檢測淫羊藿苷的含量變化。同時(shí)考察該注射液在50℃、相對濕度75%條件下儲(chǔ)存7日淫羊藿苷的含量變化，結(jié)果表明注射液中淫羊藿苷含量高于標(biāo)示量的99.5%，說明其耐熱耐濕性良好。

[1]耿和平.喘可治注射液的免疫調(diào)節(jié)作用及臨床應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2008(10)：143-144.

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[4]CFDA標(biāo)準(zhǔn)頒布件[S].標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：WS3-839-(Z-164)-2004(Z)-2012.