TP-ELISA、TPPA和TRUST三種方法聯(lián)合檢測(cè)梅毒的回顧性分析

楊劍，王小明，黃永建

(萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 萍鄉(xiāng) 337055)

梅毒是由梅毒螺旋體感染人體后引起的傳播疾病，具有高傳染性[1]，主要通過性接觸、母嬰和輸血的方式進(jìn)行傳播，可致全身各組織和器官產(chǎn)生慢性系統(tǒng)性病變，臨床表現(xiàn)不一，病程較長(zhǎng)。近年來我國(guó)梅毒的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[2]，因此臨床上對(duì)梅毒的準(zhǔn)確診斷和有效治療顯得尤為重要。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)主要為兩類：一類是非特異性試驗(yàn)，包括RPR和TRUST；另一類是特異性試驗(yàn)，包括ELISA、CLIA、TPPA、TPHA及免疫印跡試驗(yàn)等。本實(shí)驗(yàn)室采用TPELISA進(jìn)行梅毒篩查檢測(cè)，TPPA加以確認(rèn)，TURST進(jìn)行輔助診斷和療效觀察[3-7]?，F(xiàn)將此套梅毒檢測(cè)流程檢測(cè)出的結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本來源 本院2016年7月至2017年6月住院和門診病人TP-ELISA篩檢后(弱)陽性血清標(biāo)本1156例。

1．2 主要儀器和試劑 Anthos-2010酶標(biāo)儀；BioTek ELX50洗板機(jī)；WZR-H5000數(shù)顯混勻器；TP-ELISA試劑由北京萬泰生物藥業(yè)有限公司和上?？迫A生物有限公司提供；TPPA試劑由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供；TRUST試劑由上海榮盛生物技術(shù)有限公司。

1．3 方法 采用真空采血管取肘靜脈血5ml，離心后的血清標(biāo)本分別用北京萬泰TP-ELISA試劑（ELISA1）進(jìn)行篩查檢測(cè)梅毒抗體，陽性或弱陽性結(jié)果均采用TPPA和TRUST方法同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。另外，弱陽性結(jié)果還用上?？迫ATP-ELISA(ELISA2)試劑進(jìn)行復(fù)查。所有檢測(cè)均按照SOP文件和使用說明書操作。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 分別統(tǒng)計(jì)各方法的陽性結(jié)果和陽性符合率，比較分析采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2．1 ELISA1、ELISA2、TPPA 和 TRUST 法 檢測(cè)結(jié) 果在ELISA1檢測(cè)為陽性或弱陽性的1156例標(biāo)本中，S/CO值≥4的874例，即陽性結(jié)果；S/CO值1～3．99的282例，即弱陽性結(jié)果。三種試劑同時(shí)測(cè)定為陽性的標(biāo)本1103例，其中874例S/CO值≥4的均為陽性。而 282例 S/CO值 1～3．99的標(biāo)本采用ELISA2進(jìn)行復(fù)查，同為陽性的為247例，35例為陰性結(jié)果；采用TPPA法確認(rèn)陽性的標(biāo)本為239例。1156例標(biāo)本均進(jìn)行TRUST檢測(cè)，陽性數(shù)為541。見表1。

2．2 ELISA1檢測(cè)弱陽性標(biāo)本與TPPA陽性符合率結(jié)果祥 見表2。

表1 3種試劑檢測(cè)1156份梅毒標(biāo)本的陽性結(jié)果（n）

表2 ELISA檢測(cè)弱陽性標(biāo)本與TPPA陽性符合情況

3 討論

人體感染梅毒螺旋體后數(shù)周血清中可產(chǎn)生抗梅毒螺旋體抗體（特異性抗體）和具有抗類脂抗體性質(zhì)的反應(yīng)素（非特異性抗體）。梅毒螺旋體特異性抗體出現(xiàn)較早于非特異性抗體1周左右，大約2～4周出現(xiàn)IgM抗體，4～6周出現(xiàn)IgG抗體，可終生存在體內(nèi)，即便治療有效后仍可存在。

我們發(fā)現(xiàn)，用TP-ELISA2試劑復(fù)查TP-ELISA1試劑檢測(cè)出的弱陽性標(biāo)本中，有35例標(biāo)本檢測(cè)為陰性結(jié)果，這說明ELISA法存在假陽性，且試劑1的抗體檢出率高于試劑2，這在有的文獻(xiàn)中也有過報(bào)道[8]。而TP-ELISA試驗(yàn)陽性結(jié)果的874例標(biāo)本中TRUST試驗(yàn)陽性的僅335例，說明TRUST敏感性較低。由于TRUST在梅毒感染最初4周，機(jī)體未產(chǎn)生一定的反應(yīng)素供檢測(cè)出來，一般為陰性，4周后陽性率逐漸升高，6至8周可達(dá)100%，晚期梅毒和治療后反應(yīng)素下降，且治愈3至6月逐漸消失，因此其滴度檢測(cè)可作為療效觀察[9]。

從表1和表2中可見，TP-ELISA檢測(cè)出S/CO值≥4的結(jié)果與TPPA達(dá)到非常好的吻合，幾乎100%，當(dāng)然這還需要更多量的標(biāo)本來進(jìn)一步驗(yàn)證。而對(duì)于TP-ELISA檢測(cè)判斷為弱陽性的標(biāo)本，與TPPA 符合率為 84．75%，與魏方[5]等報(bào)道的 88．7%相近。隨著S/CO值的降低，兩者的符合率越低，在處于 1～1．99 值內(nèi)的符合率僅 20．83%。 因此，TPELISA陽性的結(jié)果需TPPA進(jìn)一步進(jìn)行確證，而且弱陽性結(jié)果要進(jìn)行追蹤復(fù)查以免誤診，避免給患者及家人造成一定的心理壓力和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

TP-ELISA和TPPA試驗(yàn)是針對(duì)抗梅毒螺旋體抗體的試驗(yàn)，有較高的特異性和敏感性[10-12]。TPPA是目前國(guó)內(nèi)常用的梅毒螺旋體確認(rèn)試驗(yàn)之一[10，11]，但由于操作較復(fù)雜，結(jié)果判斷具有主觀性，不便于自動(dòng)化，因此不適合用于大批量的標(biāo)本檢測(cè)。而TP-ELISA法操作簡(jiǎn)單，易自動(dòng)化，被大多數(shù)醫(yī)院用于梅毒篩查檢測(cè)，但是可出現(xiàn)一定的假陽性的結(jié)果，原因很多，主要存在老年人、妊娠和腫瘤患者，這與此類人群體內(nèi)存在異嗜性抗體密切相關(guān)[13]。因此對(duì)于TP-ELISA陽性結(jié)果的標(biāo)本需要TPPA進(jìn)一步確證。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)室采用TP-ELISA（北京萬泰）法進(jìn)行大規(guī)模的梅毒篩查檢測(cè)，弱陽性結(jié)果采用另一廠家（上海科華）試劑復(fù)查，同時(shí)進(jìn)行TPPA和TRUST檢測(cè)，幾種方法所得結(jié)果綜合分析，對(duì)于仍為弱陽性的病例進(jìn)行追蹤觀察，在臨床上有很好的使用價(jià)值。這一套檢測(cè)流程和報(bào)告體系可以極大可能地降低梅毒的誤診和漏診，且整套檢測(cè)不需要貴重的儀器，在基層醫(yī)院更為值得推廣。當(dāng)然，臨床醫(yī)師還需結(jié)合病人臨床上的病史及體征進(jìn)行梅毒診斷，盡量減少醫(yī)療糾紛的產(chǎn)生。

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