USP22在女性宮頸癌組織中的表達及與患者病理學(xué)特征和預(yù)后的關(guān)系

常靜

(周口市兒童醫(yī)院（周口市婦幼保健院）婦產(chǎn)科，河南 周口 466000)

宮頸癌是在我國女性中常見的惡性腫瘤之一，其在臨床上的高發(fā)病率以及高死亡率嚴重影響我國女性的生活質(zhì)量、生育甚至威脅生命安全[1-3]。近年來臨床上對宮頸癌的治療取得了不小的進步，但由于其發(fā)生到形成是一個多源性、多個步驟及多階段的過程，并且其發(fā)病原因并不十分清楚，常規(guī)治療難以達到理想的治療效果，因此對宮頸癌的患者來說，發(fā)現(xiàn)新的分子靶點，并對其采取針對性治療成為臨床的熱點[4-6]。特異性肽酶22（USP22）是泛素特異性水解酶之一，其在多種惡性腫瘤中都有表達，近年來有研究表明USP22在腫瘤細胞生長過程中起到關(guān)鍵作用，其可以調(diào)控基因的復(fù)制和表達，從而調(diào)控細胞周期，USP22缺乏的癌細胞出現(xiàn)細胞生長緩慢和停滯的現(xiàn)象[7-9]。因此本文通過研究USP22的表達水平對宮頸癌腫瘤細胞的生長的影響，來探討其與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取我院因?qū)m頸癌行手術(shù)治療的術(shù)后標(biāo)本100例（收集時間：2012年1月～2013年12月），因?qū)m頸上皮瘤變（CIN）行手術(shù)治療的術(shù)后標(biāo)本60例。

宮頸癌組織， 年齡 41～66 歲， 平均 52．4±9．5歲，臨床分期：Ⅰ期42例、Ⅱ期58例，病理學(xué)分級：G1級24例、G2級40例、G3級32例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例。CIN組織，年齡37～65歲，平均50．4±10．8 歲，其中 CINⅡ級 29 例、CINⅢ級 31 例：兩組患者的年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0．05）。

1．2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1．2．1 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考人民衛(wèi)生出版社《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵所有患者均在本院接受手術(shù)治療，標(biāo)本來源于手術(shù)后；⑶CIN組織標(biāo)本來源于因CINⅡ級～Ⅲ級手術(shù)后標(biāo)本；⑷宮頸癌患者臨床分期：Ⅰ期～Ⅱ期；⑸所有患者手術(shù)前均未接受放化療。

1．2．2 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴轉(zhuǎn)移性宮頸癌；⑵合并其他部位惡性腫瘤疾病疾??；⑶未經(jīng)病理學(xué)證實；⑷既往具有放化療病史。

1．3 免疫組化染色方法 二甲苯脫蠟后，采用梯度乙醇水化各5min，再用PBS沖洗，抗原修復(fù)后再次用PBS沖洗液沖洗切片，先滴加1：150稀釋的一抗 （兔抗人USP22單克隆抗體），4℃保持10-12h；以PBS沖洗后再滴加二抗，37℃保持半小時，PBS清洗后DAB顯色，蘇木精復(fù)染后梯度乙醇脫水，二甲苯透明，并用中性樹膠封片。

1．4 免疫組化結(jié)果判斷 免疫組化結(jié)果判定：USP22蛋白陽性著色表達于細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據(jù)著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≧3分為陽性?？偡郑? 分：“-”表達；為 3～5 分，“+”表達；為6～9 分，“++”表達；＞9 分，“+++”表達。

1．5 術(shù)后隨訪 本研究納入的100例宮頸癌患者，術(shù)后均進行了隨訪觀察，主要觀察患者的生存率、生存時間，隨訪方式主要通過電話、患者到門診接受相關(guān)診查，每一次隨訪做好記錄，術(shù)后第1年每一個病例隨訪1次，術(shù)后第2年和第3年每3個月進行一次隨訪。

1．6 統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計軟件采用SPSS 16．0，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進行統(tǒng)計描述；計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗；生存分析采用kaplan-meier法，生存時間分析采用log-rank秩和檢驗；P值＜0．05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組標(biāo)本中USP22蛋白陽性表達率比較 宮頸癌組中的USP22蛋白陽性表達率58．00%、CIN組中的USP蛋白陽性表達率31．67%，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；（表 1，圖 1）。

表1 兩組標(biāo)本中USP22蛋白陽性表達率比較

圖1 A為USP22蛋白在宮頸癌組織中陽性表達，B為USP22蛋白在CIN組織中呈陰性表達，（100倍）

2．2 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 組織學(xué)分級G3級、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶直徑＞5cm宮頸癌組織中的USP22蛋白陽性表達率顯著的高于宮頸癌組織學(xué)分級G1+G2級、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶直徑≤5cm的患者，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；（表 2）。

表2 USP22蛋白陽性表達率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

2．3 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達率與患者預(yù)后的關(guān)系 USP22蛋白陽性表達患者的3年無病生存率58．62%、3年總生存率60．34%均顯著的低于 USP22蛋白陰性患者的 78．57%、85．71%，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；（表 3）。USP22蛋白陽性表達患者的生存時間顯著的低于USP22 蛋 白 陰 性 表 達 患 者 （Z=4．465，P=0．035＜0．05）；圖 2。

表3 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達率與患者預(yù)后的關(guān)系[n（%）]

3 討論

圖2 兩組患者的生存時間函數(shù)圖

在全球范圍內(nèi)，宮頸癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)病率中高居首位，尤其我國為該類腫瘤疾病的高發(fā)地區(qū)，據(jù)統(tǒng)計我國每年發(fā)病患者占全球總數(shù)的1/3-1/4，且隨著人們生活方式和觀念的轉(zhuǎn)變，目前宮頸癌的發(fā)病有明顯年輕化的趨勢，嚴重影響了我國女性的正常生活、生育以及生命。為了盡可能的降低該疾病對女性的傷害，目前臨床上多采用更先進的篩查手段，并逐步提高女性的普查意識，做到該類疾病的早發(fā)現(xiàn)早治療，以提高臨床上的治愈率。宮頸癌發(fā)病的重要原因是乳頭瘤病毒（HPV）感染導(dǎo)致的宮頸正常細胞癌變，臨床上是對確診宮頸癌的患者可采用手術(shù)、放療、化療、藥物及基因等個性化的綜合治療[10]，但目前對于宮頸癌的發(fā)病原因仍不十分清楚，其發(fā)病是一個多源性、多個步驟及多階段的過程，其與諸多因素有關(guān)，例如早婚、早育、多個性伴侶、吸煙、免疫力低下等，因此對宮頸癌發(fā)病機制更深入全面的研究，有助于對于該病的診斷及治療[11]。雖然近年來手術(shù)治療宮頸癌的效果逐漸提高，但是由于癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，嚴重影響了相關(guān)治療的療效，因此在分子水平上尋找治療腫瘤的靶向治療逐漸在臨床上獲得認可，而宮頸癌治療常關(guān)注的分子靶點是VEGF，其可以控制腫瘤組織的血管的生成，從而抑制腫瘤的生長，在臨床上取得了一定療效，因此這也提示我們可以尋找新的抑制腫瘤生長的分子靶點[12，13]。DUBs是一類蛋白酶超家族，可以作用于特異性蛋白質(zhì)-泛素，切斷泛素鏈，從而避免底物降解，其中USP22是DUBs中最多一類，作為一個人類轉(zhuǎn)錄輔助因子復(fù)合物（hSAGA）的亞單位，可以降解對組蛋白H2A、H2B的尾端特異的泛素化分子，并通過這種方式改變核酸的復(fù)制和表達，進而影響癌細胞的增殖，從而控制腫瘤的生長，并有希望成為抑制腫瘤的關(guān)鍵靶點[14，15]，目前已經(jīng)在多種惡性腫瘤發(fā)現(xiàn)其存在，但在宮頸癌卻報道較少，因此本文通過研究UPS22與宮頸癌的關(guān)系，來為臨床上的治療提供新的選擇。

3．1 兩組標(biāo)本中USP22蛋白陽性表達率比較 本文考察了USP22在宮頸癌和CIN中的表達，發(fā)現(xiàn)宮頸癌組中的USP22蛋白陽性表達率高于CIN組，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，這表明USP22在宮頸癌腫瘤細胞的生長過程中扮演著重要角色，其與癌細胞的增殖關(guān)系密切，因此可以以USP22為分子靶點，采用治療藥物干擾其正常的表達，進而抑制癌細胞的增殖，提高患者的治療效果。

3．2 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達率與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 腫瘤病情的發(fā)展進程可由組織學(xué)分級、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤病灶直徑等指標(biāo)來表達，因此可以通過研究USP22與以上指標(biāo)的關(guān)系，來表達其與腫瘤病情發(fā)展的關(guān)系。本文發(fā)現(xiàn)組織學(xué)分級G3級、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶直徑＞5cm宮頸癌組織中的USP22蛋白陽性表達率顯著的高于宮頸癌組織學(xué)分級G1+G2級、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病灶≤5的患者，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，這表明USP22與腫瘤病情發(fā)展關(guān)系密切，推測其與宮頸癌的分化程度有關(guān)，并且參與宮頸癌的淋巴轉(zhuǎn)移過程，還可能參與了腫瘤的生長和浸潤。

3．3 宮頸癌患者癌組織中USP22蛋白陽性表達率與患者預(yù)后的關(guān)系 由于以USP22為分子靶點的治療藥物，具有更高的靶向性，可以在更大程度上抑制癌細胞的擴散，從而達到改善預(yù)后的目的，因此本文以USP22蛋白陽性表達患者治療后的生存率為考察指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)USP22蛋白陽性表達患者的3年無病生存率和3年總生存率均顯著的低于USP22蛋白陰性患者的；USP22蛋白陽性表達患者的生存時間顯著的低于USP22蛋白陰性表達患者，結(jié)果均具有統(tǒng)計學(xué)意義，這表明USP22不僅參與了宮頸癌變的發(fā)生發(fā)展過程，并且還參與了癌細胞的轉(zhuǎn)移和擴散，以USP22為分子靶點的治療明顯可以改善患者預(yù)后，提高患者生存率，延長患者生存時間。

綜上所述，本文通過研究USP22蛋白陽性表達與宮頸癌的關(guān)系，闡明了USP22參與了宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及擴散，并以其為分子靶點的治療明顯提高生存率和改善患者預(yù)后，有望成為新的宮頸癌的治療靶點。

[1]孔琳，雷張濤，周亮．宮頸癌化療進展[J]．中國醫(yī)師進修雜志，2015，38(7)：541-543．

[2]幸瓊，幸情．HR-HPV與TCT篩查宮頸癌及其癌前病變的臨床價值[J]．實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2016，34(6)：761-763．

[3]Mckee SJ，Bergot A，Leggatt GR．Recent progress in vaccination against human papillomavirus-mediated cervical cancer[J]．Reviews in Medical Virology，2015，25(S1)：54-71．

[4]張燕茹，王月云．宮頸癌防治研究進展[J]．中國腫瘤，2015，24(12)：998-1002．

[5]黃璇，張詢，HUANGXuan，等．宮頸癌預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)志物的研究進展[J]．腫瘤防治研究，2016，43(9)：806-810．

[6]Kahng J，Kim EH，Kim HG，et al．Development of a cervical cancer progress prediction tool for human papillomavirus-positive Koreans：A support vector machine-based approach[J]．Journal of International Medical Research，2015，43(4)：217-230．

[7]鄭鳳霞，聶麗菊，孫平風(fēng)，等．宮頸癌中表皮生長因子受體基因狀態(tài)的研究進展[J]．中國婦幼保健，2015，30(15)：2465-2467．

[8]王技軍，賀巖．USP22在惡性腫瘤中的研究進展[J]．實用腫瘤學(xué)雜志，2016，30(6)：551-554．

[9]Jones J，Dean JL，Schrecengost RS，et al．Abstract 1862：Discerning the role of USP22 in prostate cancer development and progression[J]．Cancer Research，2015，75(15)：1862-1862．

[10]古杰超，馮秀蘭，黃偉剛．鱗狀上皮細胞癌抗原(SCCA)與細胞角蛋白19(CK19)聯(lián)合檢測對早期宮頸癌及癌前病變診斷的臨床價值[J]．實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2016，34(5)：618-620．

[11]李霓，鄭榮壽，張思維，等．2003～2007年中國宮頸癌發(fā)病與死亡分析[J]．中國腫瘤，2012，21(11)：801-804．

[12]宋春麗．宮頸癌組織中KISS-1、VEGF的表達及意義[J]．中國熱帶醫(yī)學(xué)，2015，15(10)：1221-1223．

[13]王廣嬌，楊欣，郝敏．血管內(nèi)皮生長因子A在宮頸癌發(fā)病機制中的研究進展[J]．國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2016，43(5)：519-523．

[14]Hu J，Yang D，Zhang H，et al．USP22 promotes tumor progression and induces epithelial-mesenchymal transition in lung adenocarcinoma[J]．Lung Cancer，2015，88(3)：239-245．

[15]敖寧，劉玉琴，AONing，等．USP22在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展[J]．基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，32(10)：1235-1238．