重組禽流感病毒（H5-H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）在種鴿中免疫的試驗效果觀察

王瑞深 陳藝強 陳 杰 梁柱良 鐘冠環(huán)

（1.深圳市光明新區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東深圳 518107；

2.深圳市光明集團有限公司光明鴿飲食發(fā)展分公司，廣東深圳 518107）

疫苗免疫仍是預防禽流感的有效手段之一，被一些國家和地區(qū)采用。為滿足H7亞型流感疫情防控急需，國家禽流感參考實驗室研制了重組禽流感病毒（H5-H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8株 H7-Re1株）。作為一種新結(jié)合型疫苗，此二價苗在雞中的免疫已在兩廣推開，但在種鴿中的應用還較少，缺少相關(guān)的資料，并且有相當一部分鴿子養(yǎng)殖場對禽流感的防治不太重視，只免疫一次或只進行飲水免疫，甚至不免疫?；诖?，為了探討此種新型二價滅活疫苗在種鴿中的免疫效果，本實驗選擇了一個大型種鴿場進行接種免疫試驗，在接種免疫后隨機采集鴿血進行實驗室檢測，通過免疫不同的劑量和免疫后各時間段的抗體水平對比，得出更為有效的免疫方案，以期為該疫苗在種鴿中的推廣使用提供參考。具體試驗情況如下：

1 臨床試驗基本信息

1.1 重組禽流感病毒（H5-H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8株 H7-Re1株）疫苗說明：

疫苗名稱 作用與用途 用法與用量 貯藏與有效期重組禽流感病毒（H5-H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）2-8℃保存，有效期12個月批準文號 生產(chǎn)批號 生產(chǎn)廠家 生產(chǎn)日期 有效期獸藥臨字080012297 2017028 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司 20170630 20180629用于預防由H5亞型和H7亞型禽流感病毒引起的禽流感胸部肌肉或頸部皮下注射。2-5周齡雞，每只0.3ml；5周齡以上雞，每只0.5ml

1.2 臨床免疫情況

1.2.1 免疫對象：種鴿。

1.2.2 免疫數(shù)量：2100羽。

1.2.3 免疫方式：胸肌注射。

1.2.4 免疫劑量（分三組）：（1）未進行免疫；（2）免疫0.3ml/羽；（3）免疫0.5ml/羽。

1.2.5 免疫后的應激反應：以未免組為參照。

（1）免疫0.5ml/羽的種鴿組第一個月死亡數(shù)量和死胎數(shù)量大幅度提高，產(chǎn)蛋數(shù)量同時大幅度下降，之后第二、第三個月死亡數(shù)量與參照組基本一致，死胎數(shù)量略高于參照組，產(chǎn)蛋數(shù)量開始回升，但對比參照組還是有著較大的下降。

（2）免疫0.3ml/羽的種鴿組在死亡數(shù)量和死胎數(shù)量上都高于未免參照組，產(chǎn)蛋數(shù)量同時下降，但對比免疫0.5ml/羽的種鴿組，免疫0.3ml/羽的種鴿組應激反應要輕微了許多。

1.3 血清采集

在免疫后21d、28d、60d、90d都分別隨機采集三組種鴿的血清樣本進行實驗室檢測。

2 實驗室檢測情況

2.1 檢測項目

H5亞型禽流感抗體、H7N9亞型禽流感抗體。

2.2 檢測方法

高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2003）：血凝與血凝抑制試驗。

2.3 檢測試劑（抗原、陽性血清）

2.3.1 試劑廠家：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

2.3.2 試劑批號：H5N1 Re-8株抗原（2017001），H5N1 Re-8株陽性血清（2016002）；H7N9 H7-Re1株抗原（2017003），H7N9 H7-Re1株陽性血清（2017002）。

2.4 儀器

90度V型血凝板，微量移液器，微量振蕩器，離心機。

2.5 主要試劑

0.1mol/L PBS（PH7.2），阿氏液，1%的雞紅細胞懸液。

2.6 實驗檢測結(jié)果統(tǒng)計

2.6.1 未免組的檢測結(jié)果：在免疫后21d、28d、60d、90d采集的血清樣本經(jīng)H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株的抗體檢測未發(fā)現(xiàn)有抗體。

2.6.2 免疫0.5ml/羽的檢測結(jié)果，見表1。

2.6.3 免疫0.3ml/羽的檢測結(jié)果，見表2。

3 結(jié)果分析與討論

（1）免疫0.3ml/羽的種鴿與免疫0.5ml/羽的種鴿經(jīng)實驗室檢測，抗體水平有一定差異，免疫0.5ml/羽的抗體水平在免疫成功的種鴿中表現(xiàn)要稍微好些，但差異不大，而免疫0.5ml/羽的種鴿組在應激反應上表現(xiàn)得比較重，不利于企業(yè)的持續(xù)化生產(chǎn)，對企業(yè)造成了一定的影響，建議重組禽流感病毒（H5-H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）在種鴿中的免疫劑量以0.3ml/羽比0.5ml/羽為宜。

（2）通過免疫后不同時間段的對比，可以發(fā)現(xiàn)抗體水平在2個月后開始呈現(xiàn)顯著的下降，在三個月后已經(jīng)基本呈現(xiàn)在預警區(qū)，因此，只進行一次免疫的種鴿，在抗體水平上難以長時間保持在較高的水準，建議應當加強免疫，增強種鴿的抵抗力，且二次免疫時間應當間隔3個月以上。

（3）免疫二價苗后，種鴿H7N9的抗體水平在免疫后21d和免疫后28d都呈現(xiàn)較高的水準；通過各時間段的對比，H7N9的抗體水平都基本比H5N1的稍高，但由于血清采集是從大群體中隨機抽取的，缺乏針對性，并且數(shù)量也不多，因此數(shù)據(jù)比對存在一定的偏差，并不能代表H5N1 Re-8株的免疫效果比H7N9 H7-Re1株的免疫效果差，也有可能與疫苗在制備過程中的抗原量配比有關(guān)。

表1

表2

（4）由于整個試驗涉及面廣，施行過程中避免不了各方面因素的影響，試驗結(jié)果會存在一定的偏差，因此，本次試驗結(jié)果只作為參考用。