CD147在涎腺粘液表皮樣癌中的表達(dá)及意義

廖垠林 黎明（通訊作者）

（1達(dá)州市中心醫(yī)院口腔科 四川 達(dá)州 635000）（2昆明醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 云南 昆明 650031）

粘液表皮樣癌是最常見(jiàn)的涎腺惡性腫瘤，在涎腺上皮性惡性腫瘤中約占30%[1]。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)CD147蛋白在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)，探討其臨床病意義。

1.標(biāo)本來(lái)源

收集1991年1月—2011年3月在昆明醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科行手術(shù)切除后的涎腺組織存檔的石蠟切片標(biāo)本，共52個(gè)，其中，涎腺粘液表皮樣癌組織32例，正常涎腺組織20例。涎腺惡性腫瘤發(fā)生于大涎腺者（腮腺、頜下腺及舌下腺）24例，發(fā)生于小涎腺者（腭腺、唇腺、頰腺及磨牙后腺）8例；年齡14～78歲，平均46歲；腫瘤直徑≤2cm者20例，＞2cm者12例；伴有癌細(xì)胞侵潤(rùn)周圍組織者25例，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者7例。

1.2 主要試劑

兔抗人CD147多克隆抗體，購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，超敏鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶連接法(S-P法)免疫組化試劑盒：購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司；

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

免疫組織化學(xué)染色方法（VltrasensitiveTM S-P免疫組化）依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。取凍存的部分涎腺腫瘤組織行石蠟包埋，石蠟塊作4μm 切片供免疫組織化學(xué)染色。SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)涎腺腫瘤標(biāo)本中CD147的表達(dá)，CD147抗體濃度配制為原濃度的1/300倍。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

HE染色切片由兩名病理科主任醫(yī)師讀片證實(shí)診斷，在帶有moticam2005醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)的顯微鏡下觀察并采集圖像，每例隨機(jī)觀察高倍鏡下200個(gè)腫瘤細(xì)胞，CD147陽(yáng)性表達(dá)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色程度和百分率進(jìn)行半定量結(jié)果判定。CD147主要定位于細(xì)胞膜，以細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃染色為陽(yáng)性，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞記0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%～25%記1分，26～50%記2分，51%～75%記3分，≥76%記4分；胞漿和/或胞膜基本不著色記0分，染色棕黃色計(jì)1分，染色棕色計(jì)2分，染色棕褐記3分。評(píng)價(jià)方法：每張切片以陽(yáng)性細(xì)胞百分率和染色程度兩項(xiàng)得分乘積分?jǐn)?shù)分為4級(jí)，即陰性(-)為0～1分，弱陽(yáng)性(+)為2～3分，陽(yáng)性(++)為4～6分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)為≥6分。所有染色結(jié)果均用雙盲法測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，CD147在粘液表皮樣癌和正常唾液腺組織的不同表達(dá)采用χ2檢驗(yàn)，CD147的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性用spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 CD147在正常唾液腺組織和粘液表皮樣癌中的表達(dá)

CD147蛋白在正常涎腺組織中主要表達(dá)于分泌管上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，呈弱陽(yáng)性染色，正常腺泡細(xì)胞不表達(dá)（圖1）。CD147在涎腺粘液表皮樣癌中的表達(dá)主要為腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿染色，以黏液細(xì)胞和表皮樣細(xì)胞為主（圖2)。

圖1 正常涎腺組織

圖2 涎腺粘液表皮樣癌

2.2 CD147在涎腺粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)結(jié)果

CD147在正常涎腺組織中CD147陽(yáng)性表達(dá)率為10.0%(2/20)；在32例涎腺粘液表皮樣癌中CD147（-）6例，（+）9例，（++）12例，（+++）5例，陽(yáng)性表達(dá)率為81.1%(26/32)。涎腺粘液表皮樣癌中CD147的表達(dá)高于正常涎腺，CD147陽(yáng)性表達(dá)率在正常涎腺組與涎腺粘液表皮樣癌組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-6.495，P=0.000＜0.05)。

2.3 CD147表達(dá)與MEC臨床病理特征之間的關(guān)系

CD147在癌細(xì)胞侵犯周圍組織的MEC陽(yáng)性表達(dá)率為92.3%(12/13)，CD147在癌細(xì)胞未侵犯周圍組織的MEC陽(yáng)性表達(dá)率為73.7%(14/19)。CD147在MEC中的表達(dá)與癌細(xì)胞侵犯周圍組織顯著相關(guān)(P=0.014＜0.05)；在粘液表皮樣癌組織中CD147蛋白的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤原發(fā)部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均無(wú)關(guān)(均P＞0.05)。

3.討論

細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN/CD147）是一種高度糖基化的跨膜蛋白，廣泛表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，可刺激腫瘤周圍間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，從而降解細(xì)胞外基底膜和間質(zhì)成分，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[2]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CD147在粘液表皮樣癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常涎腺組織中的表達(dá)。以往研究表明，CD147在腫瘤的演變過(guò)程中起著十分關(guān)鍵的作用[3]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在癌細(xì)胞侵犯周圍組織的粘液表皮樣癌組織中CD147表達(dá)較無(wú)癌細(xì)胞侵犯周圍組織者明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014＜0.05)，說(shuō)明CD147與粘液表皮樣癌的侵襲性密切相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CD147在涎腺粘液表皮樣癌組織中有特異性表達(dá)[4]。結(jié)合有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們可以推測(cè)在涎腺粘液表皮樣癌的治療中用siRNA干擾CD147的表達(dá)，可以抑制腫瘤細(xì)胞的惡性行為，同時(shí)還可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。這將為涎腺惡性腫瘤的治療提供一個(gè)新的策略與方向。

[1]于世鳳口腔組織病理學(xué)[M]第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社.2000:250-253.

[2]Suzuki S，Sato M，Senoo H，et al.Direct cell-cell interaction enhances pro-MMP-2 production and activation in co-culture of laryngeal cancer cells and fibroblasts:involvement of EMMPRIN and MT1-MMP[J].Exp Cell Res，2004，293(2):259-266.

[3]Lim M，Martinez T，Jablons D，et al.Tumor-derived EMMPRIN (extracellular matrix metalloproteinase inducer)stimulates collagenase transcription through MAPK p38[J].FEBS Lett，1998，441(1):88-92.

[4]楊新杰，雷德林，張圃，等.CD147和MMP-2、VEGF在腺樣囊性癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(3):372-376.