Numb蛋白在乳腺癌組織的表達(dá)及其臨床病理相關(guān)性分析

范小慶+陶姍姍+熊秋云+雷秋模

【摘要】 目的：Numb蛋白在乳腺癌中有不同程度的表達(dá)缺失，本研究旨在探討乳腺癌組織Numb蛋白的表達(dá)，及其與表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER-2）、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）表達(dá)的關(guān)系。方法：收集2015年8月-2017年3月江西省南昌市第三醫(yī)院收治的200例乳腺癌患者的臨床病理資料，同時(shí)應(yīng)用免疫組織化學(xué)Elivison方法檢測(cè)200例乳腺癌組織的Numb、HER-2、ER和PR的表達(dá)。結(jié)果：Numb蛋白在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率51.0%（102/200），淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者Numb表達(dá)高于淋巴無(wú)轉(zhuǎn)移者（ 字2=6.72，P=0.02），HER-2陽(yáng)性者Numb表達(dá)低于HER2陰性者（ 字2=7.00，P=0.02），ER陽(yáng)性者Numb表達(dá)高于ER陰性者（ 字2=13.55，P=0.00）。Luminal型Numb陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于HER-2過(guò)表達(dá)型和三陰型（ 字2=7.26，P=0.01），HER-2過(guò)表達(dá)型和三陰型Numb陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.76，P=0.12）。Numb表達(dá)在不同年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)及PR狀態(tài)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.13，P=0.72； 字2=0.55，P=0.46； 字2=0.46，P=0.59； 字2=0.06，P=0.80）。結(jié)論：Numb蛋白在乳腺癌中有較高表達(dá)，其表達(dá)與HER-2、ER和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Numb能否成為乳腺癌新的治療靶點(diǎn)或預(yù)測(cè)因子有待進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌； ER； Numb蛋白； HER-2

【Abstract】 Objective：The expression of Numb protein in breast carcinomas had different degrees of expression，to explore the expression of Numb protein in breast carcinomas and examine the correlation between its expression and expression of human epidermal growth factor receptor-2（HER-2），estrogen receptor（ER），ogesterone receptor（PR）.Method：The clinicopathological data of 200 breast cancer patients admitted in the Third Hospital of Nanchang from August 2015 to March 2017 were collected and analyzed.Immunohistochemical method was used to detect the expression of HER-2，ER，PR and Numb protein.Result：The rate of Numb protein expression was 51.0%（102/200），the expressions of Numb in ER positive patients were significantly higher than those of ER negative patients，and this trend extended to HER-2 negative and no node metastasis patients（ 字2=13.55，P=0.00； 字2=7.00，P=0.02； 字2=6.72，P=0.02）. The expressions of Numb protein in Luminal subtype was signifycantly higher than in HER-2 over-expression subtype and basal like subtype （ 字2=7.26，P=0.01），but there was no significant difference between HER-2 over-expression subtype and basal like subtype（ 字2=0.76，P=0.12）.No correlations existed between the expression of Numb protein and age，tumor size，histologic grade or PR of breast cancer patients（ 字2=0.13，P=0.72； 字2=0.55，P=0.46； 字2=0.46，P=0.59； 字2=0.06，P=0.80）.Conclusion：Numb protein is highly expressed in breast cancer，and its expression is related to lymph node status，HER-2 and ER，and node metastasis.However，Numb can be a new therapeutic target or predictor for breast cancer remains to be further studied.

【Key words】 Breast carcinoma； ER； Numb protein； Her-2

First-authors address：The Third Hospital of Nanchang，Nanchang 330009，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.23.007

近來(lái)發(fā)現(xiàn)Numb在人體成熟組織中廣泛分布，在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)分化、穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中發(fā)揮重要作用，在多種腫瘤細(xì)胞中均有不同程度的表達(dá)缺失。目前，人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）、雌激素受體（estrogen receptor，ER）及孕激素受體（progesterone，PR）的表達(dá)是指導(dǎo)乳腺癌治療和預(yù)后的重要生物學(xué)指標(biāo)。Numb與乳腺癌組織HER-2、ER及PR也可能存在密切相關(guān)性，已逐漸成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。為此，本研究檢測(cè)了200例乳腺癌中Numb蛋白、HER-2、ER及PR的表達(dá)，旨在研究Numb蛋白表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年8月-2017年3月在南昌市第三人民醫(yī)院手術(shù)治療的乳腺癌患者，入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）女性；（2）可手術(shù)；（3）術(shù)后均經(jīng)常規(guī)石蠟切片病理檢查確診為乳腺浸潤(rùn)性癌；（4）術(shù)前未接受過(guò)放療、化療和內(nèi)分泌治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他部位的惡性腫瘤；（2）妊娠或哺乳期乳腺癌患者。共獲得200例乳腺癌患者的臨床病理資料。年齡29～70歲，中位年齡49歲，年齡≤35歲23例（11.5%），>35歲177例（88.5%）。腫瘤≤2 cm者56例（28.0%），>2 cm者144例（72.0%）。腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者121例（60.5%），無(wú)轉(zhuǎn)移者79例（39.5%）。本研究得到醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和患者的知情同意。

1.2 方法 采用免疫組化Elivison方法對(duì)所有乳腺癌患者的Numb、ER、PR及HER-2表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，所有組織經(jīng)10%甲醛固定制作成4 um切片。免疫組化法嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，乳腺癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。主要試劑：Numb（NB500-178H）美國(guó)Epitomics公司，HER-2（ZM0065）、ER（ZA0120）、PR（ZA0255）、KI67（ZM-0186）及相關(guān)試劑盒均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn) 觀察在乳腺浸潤(rùn)性癌組織中Numb、ER、PR及HER-2表達(dá)的表達(dá)，分析Numb的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系，以及與ER、PR和Her-2的表達(dá)的相關(guān)性。Numb蛋白陽(yáng)性反應(yīng)為棕黃色顆粒定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，采用SINICROPE改良法判斷陽(yáng)性，即染色細(xì)胞計(jì)數(shù)所占比例至少包括5個(gè)400倍視野區(qū)域。每張切片計(jì)分=染色細(xì)胞數(shù)分?jǐn)?shù)×染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)，所得的分?jǐn)?shù)<1分為陰性結(jié)果，1～3分為弱陽(yáng)性（+），4～5分為中度陽(yáng)性（++），>5分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），以（++）和（+++）結(jié)果計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)率。HER-2陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞膜棕黃染色為陽(yáng)性。無(wú)細(xì)胞染色或<10%的細(xì)胞膜較弱染色為（-）；>10%的細(xì)胞膜部分較弱染色為（+）；>10%的細(xì)胞膜完全較弱到中等染色為（++）；>10%的細(xì)胞膜完全強(qiáng)染色為（+++）。對(duì)HER-2（++）者進(jìn)一步進(jìn)行FISH檢測(cè)。ER和PR陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：≥1%的細(xì)胞核棕黃染色則為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織中Numb蛋白的表達(dá)情況 Numb蛋白表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。Numb蛋白在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為51.0%（102/200），其中（+++）表達(dá)率為14.5%（29/200），（++）表達(dá)率為36.5%（73/200），（+）表達(dá)率為31.0%（62/200），（-）表達(dá)率為18.0%（36/200），見(jiàn)圖1。

2.2 Numb蛋白的表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理學(xué)及分子特征的關(guān)系 淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者Numb陽(yáng)性表達(dá)顯著低于淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移者（ 字2=6.72，P=0.02）。ER（+）者的Numb陽(yáng)性表達(dá)顯著高于ER（-）者（ 字2=13.55，P=0.00）。HER-2（+）者的Numb陽(yáng)性表達(dá)顯著低于HER-2（-）者（ 字2=7.00，P=0.02）。Numb陽(yáng)性表達(dá)在年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)和PR組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.13，P=0.72； 字2=0.55，P=0.46； 字2=0.46，P=0.59； 字2=0.06，P=0.80），見(jiàn)表1。

2.3 Numb蛋白與乳腺癌不同分子亞型的關(guān)系 本研究結(jié)果顯示，Luminal型乳腺癌中，Numb陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于HER-2過(guò)表達(dá)型和三陰型乳腺癌（ 字2=7.26，P=0.01）。而HER-2過(guò)表達(dá)型和三陰型乳腺癌Numb陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

（ 字2=0.76，P=0.12），見(jiàn)表2。

3 討論

Numb在多種腫瘤細(xì)胞，如胃癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、乳腺癌和卵巢癌中均有不同程度的表達(dá)缺失，其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的角色成為新的研究熱點(diǎn)，Numb作為抑癌基因在腫瘤組織中表達(dá)減低[1-5]。如Numb蛋白可能具有抑制乳腺癌增殖的功能[6]，30%非小細(xì)胞肺癌及10%小細(xì)胞肺癌中觀察到Numb的缺失[7]，食管鱗癌中Numb低表達(dá)與腫瘤術(shù)后高復(fù)發(fā)率及不良預(yù)后顯著相關(guān)[8-9]。然而，在某些腫瘤中Numb也表現(xiàn)出癌基因的特征，如在肝癌中，Numb與肝癌早期復(fù)發(fā)及不良預(yù)后顯著相關(guān)。在前列腺癌中，Numb蛋白與腫瘤高侵襲性及激素治療不敏感密切相關(guān)[10-11]。可見(jiàn)Numb的作用機(jī)制非常復(fù)雜，在不同的腫瘤中的表現(xiàn)不一致。

近來(lái)研究報(bào)道，利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)241例乳腺癌組織標(biāo)本發(fā)現(xiàn)乳腺癌中Numb表達(dá)降低，并且降低程度與乳腺癌的侵襲性相關(guān)，提示Numb在乳腺中可能發(fā)揮抑癌因子作用[12-13]。本研究通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)了200例乳腺癌組織中Numb蛋白的表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為51.0%，與文獻(xiàn)[14-15]報(bào)道結(jié)果相似。本研究分析Numb蛋白的表達(dá)與乳腺癌臨床特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移者Numb蛋白陽(yáng)性表達(dá)高于淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者（P=0.02），Numb蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小及組織學(xué)分級(jí)均無(wú)相關(guān)性（P=0.72、0.46、0.59）。Numb表達(dá)ER陽(yáng)性者顯著高于ER陰性者（P=0.00）。由于ER陽(yáng)性是乳腺癌預(yù)后較好的生物學(xué)指標(biāo)，因此推測(cè)Numb高表達(dá)可能是反應(yīng)ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的良好的相關(guān)因素[16-17]。本研究結(jié)果顯示，Numb表達(dá)在HER-2陽(yáng)性者顯著低于HER-2陰性者（P=0.02），間接提示Numb低表達(dá)的HER-2陽(yáng)性乳腺癌患者可能預(yù)后較差。endprint

乳腺癌患者的分子分型包括導(dǎo)管型（Luminal型：ER+/PR+）、HER-2過(guò)表達(dá)型（ER-、PR-，HER-2+）、三陰型（TN型：ER-、PR-，HER-2-），

不同分子分型預(yù)后不同。本組研究中Luminal型129例（64.5%），HER-2過(guò)表達(dá)型35例（17.5%），三陰型36例（18.0%），其分子分型比例與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)[18-19]報(bào)道相似，在不同的乳腺癌分子亞型中，Luminal型Numb表達(dá)與HER-2過(guò)表達(dá)型和三陰性型比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.01）；三陰性型和HER-2過(guò)表達(dá)型組Numb表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.12）。表明Luminal型乳腺癌患者預(yù)后較好可能與Numb高表達(dá)相關(guān)。

本研究結(jié)果提示，Numb蛋白在乳腺癌組織中有較高的表達(dá)，Numb與乳腺癌組織中ER、PR、HER-2的表達(dá)和淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移之間有著密切關(guān)系，由此可推測(cè)，其在腫瘤侵襲性的預(yù)測(cè)以及評(píng)估腫瘤的轉(zhuǎn)移可能性方面具有一定的參考價(jià)值，但由于目前尚缺乏統(tǒng)一的Numb檢測(cè)和評(píng)估方案，Numb能否成為新的治療靶點(diǎn)或預(yù)測(cè)因子有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]劉學(xué)飛，李文會(huì)，辛彥.Numb和a-atenin蛋白在胃癌中的表達(dá)及其臨床病理意義[J].國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2015，42（12）：896-899.

[2]洪健，何路，周新科.Numb表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的影響[J].廣西醫(yī)學(xué)，2013，35（7）：813-816.

[3]司馬晉，張保，馬鑫，等.Numb基因?qū)Π螂装┘?xì)胞侵襲和遷移能力的影響及機(jī)制研究[J].中華泌尿外科雜志，2014，35（3）：226-229.

[4] Tosoni D，Pambianco S，Ekalle Soppo B，et al.Pre-clinical validation of a selective anti-cancer stem cell therapy for Numb-deficient human breast cancers[J].EMBO，2017，9（5）：655-671.

[5]敬宏，牛曉宇，陳亞麗，等.Numb蛋白在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其與CD117、CD113、ALDH1的關(guān)系[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，47（6）：878-882.

[6] Kikuchi H，Sakakibara-Konishi J，F(xiàn)uruta M，et al.Expression of Notch1 and Numb in small cell lung cancer[J].Oncotarget，2017，8（6）：10 348-10 358.

[7] Hong J，Liu Z，Zhu H，et al.The tumor suppressive role of NUMB isoform 1 in esophageal squamous cell carcinoma[J].Oncotarget，2014，5（14）：5602-5614.

[8] Liu Z，Luo C，Yang W，et al.Increased Numb protein expression predicts poor clinical outcomes in esophageal squamous cell carcinoma patients[J].Cancer Biol Ther，2017，13（4）：6798-6809.

[9] Lu Y，Xu W，Ji J，et al.Alternative splicing of the cell fate determinant Numb in hepatocellular carcinoma[J].Hepatology，2015，62（4）：1122-1131.

[10] Flores A N，McDermott N，Meunier A，et al.NUMB inhibition of NOTCH signalling as a therapeutic target in prostate cancer[J].Nat Rev Urol，2014，11（9）：499-507.

[11] Kim S Y，Hong C，Wie J，et al.Reciprocal positive regulation between TRPV6 and NUMB in PTEN-deficient prostate cancer cells[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，447（1）：192-196.

[12] Raimondi M，Marcassa E，Cataldo F，et al.Calpain restrains the stem cells compartment in breast cancer[J].Cell Cycle，2016，15（1）：106-116.

[13] Zhang J，Shao X，Sun H，et al.NUMB negatively regulates the mesenchymal transition of triple-negative breast cancer by antagonizing Notch signaling[J].Oncotarget，2016，7（38）：

61 036-61 053.

[14] Saha S K，Choi H Y，Kim B W，et al.KRT19 directly interacts with β-catenin/RAC1 complex to regulate NUMB-dependent NOTCH signaling pathway and breast cancer properties[J].Oncogene，2017，36（3）：332-349.

[15] Ma C X，Bose R，Ellis M.Prognostic and Predictive Biomarkers of Endocrine Responsiveness for Estrogen Receptor Positive Breast Cancer[J].Adv Exp Med Biol，2016，882：125-154.

[16] Tan W，Li Q，Chen K，et al.Estrogen receptor beta as a prognostic factor in breast cancer patients：A systematic review and meta-analysis[J].Oncotarget，2016，7（9）：10 373-10 385.

[17]范小慶，熊秋云，涂劍宏，等.乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Tau蛋白表達(dá)及其與臨床病理因素相關(guān)性分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2013，93（16）：1258-1261.

[18] Chen J，Wang Z，Lv Q，et al.Comparison of Core Needle Biopsy and Excision Specimens for the Accurate Evaluation of Breast Cancer Molecular Markers：a Report of 1003 Cases[J].Pathol Oncol Res，2017，21（6）：1-7.

[19]陳敬佩，唐上坤，肖華.三陰性乳腺癌與HER-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌MRI動(dòng)態(tài)增強(qiáng)及彌散加權(quán)成像特征分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2017，14（8）：17-20.

（收稿日期：2017-06-28） （本文編輯：程旭然）endprint