沉水樟芝降血糖作用的初步藥效學(xué)研究

王 瑾，陳耀金，王 宮

（福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003）

牛樟芝是一種原產(chǎn)于我國(guó)臺(tái)灣省的珍稀藥用菌。研究證實(shí)，其具有降血糖、解毒保肝、抗腫瘤、補(bǔ)腎強(qiáng)心、益胃整腸、強(qiáng)化免疫、鎮(zhèn)痛抗菌等多種作用［1-4］。牛樟樹(shù)作為自然界中樟芝的唯一宿主，只分布在臺(tái)灣地區(qū)，數(shù)量極為稀少，加上野生牛樟芝生長(zhǎng)緩慢，資源嚴(yán)重短缺，價(jià)格十分昂貴。其高昂的價(jià)格嚴(yán)重制約了樟芝這種具有極大藥用價(jià)值的菌類的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)。我們利用福建地區(qū)資源豐富的沉水樟樹(shù)來(lái)作為樟芝的新宿主，培育出沉水樟芝。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行沉水樟芝降血糖的初步藥效學(xué)研究，旨在為沉水樟芝資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小鼠，雌雄兼用，體重16～20 g，由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SGXK（閩）2004-0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 二甲雙胍（深圳中聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)：201511299）；四氧嘧啶（德國(guó) Fluka）；胰島素注射液（Lilly France S.A.S，批號(hào)：20150 906），葡萄糖（AR 級(jí)，批號(hào)：F20150811）；葡萄糖測(cè)定試劑盒（上海榮勝生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：2016 0206）；游離脂肪酸測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20160331）；沉水樟芝（福建永安，人工培育）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 可見(jiàn)紫外分光光度儀（島津公司，UV25 01PC）；電子天平（BP211D，塞多利斯）；穩(wěn)步快速血糖儀（強(qiáng)生公司）；冷凍干燥儀（Savant ModulyoD，美國(guó)熱電）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 沉水樟芝藥液的制備 取沉水樟芝適量，加入10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h，合并兩次濾液，濃縮，即得沉水樟芝藥液（含生藥量0.4 g／mL），置于冰箱，備用。

2.2 2型糖尿病模型的建立 取60只小鼠禁食12 h，稱重，10只做正常對(duì)照，其余小鼠灌胃脂肪乳10 d，10 d后禁食12 h，腹腔注射四氧嘧啶200 mg／kg。給藥72 h后，測(cè)空腹血糖，以空腹血糖值≥10 mmol／L者納入實(shí)驗(yàn)范圍，即2型糖尿病模型成立。

2.3 分組及給藥 取2型糖尿病小鼠40只，分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組和高劑量組各10只。 低劑量組、高劑量組分別予 4 g／kg、16 g／kg沉水樟芝藥液灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組予0.25 g／kg二甲雙胍藥液灌胃，對(duì)照組及模型組予等量生理鹽水灌胃。每周重稱1次，調(diào)整灌胃量，共灌胃干預(yù)30 d。

2.4 觀察指標(biāo) ① 分別于灌胃給藥15 d、30 d后，禁食12 h，割尾靜脈取血，測(cè)定4組小鼠血清葡萄糖（Glu）和游離脂肪酸（NEFA）含量。② 糖耐量實(shí)驗(yàn)：灌胃30 d后，將各組小鼠禁食12 h，灌胃葡萄糖 0.2 g／kg，分別測(cè)定灌胃前、灌胃后 0.5 h、1 h、2 h血糖值，觀察各組血糖變化，計(jì)算曲線下面積，曲線下面積越大，說(shuō)明糖耐量越差，糖尿病越嚴(yán)重。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用PEMS3.1 for Windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，采用t檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 6組小鼠干預(yù)后Glu和NEFA含量比較 見(jiàn)表1。

表1 6組小鼠干預(yù)后Glu和NEFA含量比較（）mmol／L

表1 6組小鼠干預(yù)后Glu和NEFA含量比較（）mmol／L

注：與對(duì)照組比較，1） P＜0.01，2） P＜0.05；與模型組比較，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

組 別對(duì)照組模型組二甲雙胍組低劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 Glu NEFA灌胃后15 d 5.89±0.88 24.38±0.652）16.97±1.502）4）12.66±1.722）4）11.58±0.792）4）灌胃后30 d 5.50±0.77 12.00±3.321）10.95±2.672）3）8.77±2.342）4）8.45±0.072）3）灌胃后15 d 2.72±0.40 3.98±0.372）3.40±0.242）3）2.67±0.104）2.34±0.094）灌胃后30 d 2.62±0.51 3.98±0.332）3.26±0.233）2.87±0.394）2.34±0.094）

3.2 4組小鼠糖耐量水平比較 見(jiàn)表2。

表2 4組小鼠糖耐量水平比較（）

表2 4組小鼠糖耐量水平比較（）

注：與對(duì)照組比較，1） P＜0.01，2） P＜0.05；與模型組比較，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

組 別對(duì)照組模型組二甲雙胍組低劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 0 h 5.50±0.77 12.10±3.32 10.95±2.67 8.77±2.34 8.45±0.07糖耐量實(shí)驗(yàn)后血清 Glu／（mmol／L）0.5 h 7.58±1.08 26.50±1.83 26.90±1.27 24.28±3.46 25.10±1.69 1 h 6.50±0.16 26.30±2.12 16.50±0.35 16.60±3.30 16.45±2.47 2 h 5.86±0.83 16.00±0.35 9.30±0.14 9.17±1.79 8.35±1.34曲線下面積AUC 12.70±0.65 44.01±1.501）33.20±0.981）3）31.36±5.481）3）31.18±3.372）4）

4 討論

沉水樟芝低、高劑量組均有降低糖尿病小鼠血糖、脂肪酸和提高糖耐受作用，高劑量組效果更為明顯，說(shuō)明沉水樟芝具有較好降低2型糖尿病小鼠血糖和改善糖尿病小鼠身體機(jī)能的作用，并有一定的量效關(guān)系。

在造模型過(guò)程中，我們應(yīng)用脂肪乳灌胃和四氧嘧啶所誘導(dǎo)對(duì)非胰島素依賴型糖尿病模型，其中灌胃脂肪乳10 d后造成胰島素抵抗，再通過(guò)注射四氧嘧啶，導(dǎo)致胰腺代償性分泌胰島素障礙。在四氧嘧啶劑量選擇中200 mg／kg的劑量。此造模方法最接近于2型糖尿病患者的發(fā)病機(jī)理，具有很好的類比性。

葡萄糖、游離脂肪酸、糖耐量均是反映糖尿病情況的重要指標(biāo)，其中正常血清中NEFA含量極微，饑餓、運(yùn)動(dòng)及情緒激動(dòng)可以升高，在甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、注射腎上腺素或去甲腎上腺素及生長(zhǎng)激素后可升高。任何疾病影響血中激素水平者，均對(duì)游離脂肪酸有影響。未治療糖尿病中血清游離脂肪酸可達(dá)1.5 mmol／L。所以，血清中NEFA含量越大，證明其糖尿病越嚴(yán)重。實(shí)驗(yàn)測(cè)定了各時(shí)間段各組小鼠空腹血糖值、游離脂肪酸值、糖耐量，顯示灌胃沉水樟小鼠的血糖值、游離脂肪酸含量、糖耐量的曲線下面積均顯著小于模型組小鼠。其中灌胃1 g／kg與4 g／kg沉水樟芝無(wú)顯著差異，顯示此兩劑量藥效相似。

由于沉水樟芝具有較豐富的使用價(jià)值和顯著的降血糖效果，而且純天然，安全、無(wú)毒副作用，無(wú)疑對(duì)廣大糖尿病患者是一個(gè)極大的福音，可開(kāi)辟臨床防治糖尿病及其并發(fā)癥新途徑，提高糖尿病的治療水平，因而具有廣闊的前景。有關(guān)糖尿病有效成分研究和降血糖的作用機(jī)理，還需進(jìn)一步探討和研究。

［1］ 張遠(yuǎn)騰，李曉波.牛樟芝化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展［J］.中草藥，2016，47（6）：1034-1042.

［2］ 韓金龍，趙培城，劉士旺.樟芝藥理學(xué)作用研究進(jìn)展［J］.食用菌學(xué)報(bào)，2014，21（1）：76-82.

［3］ 陸震鳴，敖宗華，陶文沂，等.樟芝菌粉對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中草藥，2007，38（3）：420-422.

［4］ CHEN Y J，THANG M W，CHAN Y T，et al.Global assessment of Antrodia cinnamomea-induced microRNA alterations in hepatocarcinoma cells ［J］.PLoS One，2013，8（12）：e82751.