PR-SET7在食管癌中表達及其臨床意義

鄭建，陳建，葉鋼

（武警江蘇省總隊醫(yī)院 胸外科，江蘇 揚州 225003）

PR-SET7是現(xiàn)今發(fā)現(xiàn)唯一能夠特異性單甲基化組蛋白H4賴氨酸20位（histoneH4 lysine20，H4K20）的賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（Lysinemethyltransferase）[1-2],PR-SET7又稱SETD8、SET8、KMT5a，與人類腫瘤的發(fā)生、生長、轉(zhuǎn)移等多個環(huán)節(jié)密切相關(guān)[3]，TAKAWA等[4]研究發(fā)現(xiàn)PR-SET7在肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多種腫瘤組織中的表達均增強，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展呈正相關(guān)。本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測食管癌組織中PR-SET7的表達，探討食管癌組織中PR-SET7的表達及其與臨床特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本取自2010年6月-2011年2月武警江蘇省總隊醫(yī)院胸外科行手術(shù)治療，經(jīng)病理讀片確定為食管鱗狀細胞癌患者32例。其中，男性19例，女性13例。年齡48～73歲，平均62歲。所有患者術(shù)前均未行放化療治療。

1.2 免疫組織化學(xué)染色及評估

所有標(biāo)本均取自該院病理科，組織經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋，切成4μm切片，65℃烘片24 h，常溫儲存?zhèn)溆谩Ｈ〗M織石蠟切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，超純水洗3次，甲醇+H2O2去過氧化物；PBS洗5 min；檸檬酸緩沖液修復(fù)10 min，室溫自然冷卻，PBS洗2次；羊血清封閉2 h；加一抗孵育，一抗為鼠抗人PR-SET7多抗（1∶300，武漢Abcam公司），4℃過夜；1%PBS-T洗2次，PBS洗1次5 min；二抗為鼠兔通用型二抗[基因科技(上海)有限公司]，室溫1 h，PBS洗3次，切片經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蒸餾水終止，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，45℃水浴返藍，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，PR-SET7陽性基因判斷標(biāo)準(zhǔn)以癌組織或癌旁組織的胞漿及胞核出現(xiàn)棕黃色為陽性,免疫組織化學(xué)評分采用H-score評分系統(tǒng)法[5]，H-score=陽性強度×100個細胞中陽性細胞數(shù)目。陽性強度分為陰性（0分）、弱陽性（1分）、中等陽性（2分）和強陽性（3分）。本研究將評分0～200分的組織定義為低表達，＞200分的組織定義為高表達。結(jié)果由2位資深病理科醫(yī)師閱片，取所得的H-score均值納入統(tǒng)計。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以百分率（%）表示，運用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PR-SET7在食管癌組織中的表達

PR-SET7主要在細胞核中表達，在食管癌組織中高表達，在癌旁組織中低表達（見附圖）。統(tǒng)計學(xué)分析表明PR-SET7在食管癌組織中的高表達率為81.25%，在癌旁組織中的高表達率為15.62%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

附圖 PR-SET7在食管癌組織及癌旁組織中的表達（免疫組織化學(xué)染色 ×200）

表1 食管癌組織及癌旁組織PR-SET7蛋白的表達量 [n=32，例（%）]

2.2 PR-SET7表達與食管癌臨床特征的相關(guān)性

PR-SET7在食管癌組織中的表達量與腫瘤細胞分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），腫瘤分化程度低、Ⅲ期伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織PRSET7具有高表達率。與患者的性別、年齡無相關(guān)（P＞0.05）。見表2。

表2 PR-SET7在食管癌組織中的表達與臨床特征的相關(guān)性 例（%）

3 討論

研究表明，PR-SET7在細胞周期、DNA復(fù)制起始、基因組穩(wěn)定、DNA損傷修復(fù)及細胞凋亡等多方面發(fā)揮作用[6-10]，涉及到腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后等多個環(huán)節(jié)。多種研究表明，PR-SET7的rs16917496位點單核苷酸多態(tài)性有可能成為腫瘤發(fā)病和預(yù)后的指標(biāo)之一[3]，其通過相關(guān)癌基因及抑癌基因進行轉(zhuǎn)錄調(diào)控，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。例如PR-SET7介導(dǎo)的p53K382me1修飾可增強L3MBTL1與p53的相互作用，抑制p53的轉(zhuǎn)錄作用。然而當(dāng)DNA損傷時，PR-SET7表達降低，導(dǎo)致p53K382me1水平下降，L3MBTL1與p53的結(jié)合作用減弱，L3MBTL1從p53靶基因解離，促使p53靶基因轉(zhuǎn)錄活化增強[11]。

本研究通過免疫組織化學(xué)方法檢測PR-SET7在食管癌組織及癌旁組織中的表達，證實癌組織中PRSET7強表達，主要位于食管癌腫瘤細胞的胞核中，在胞漿中也有表達。根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果，其在食管癌腫瘤細胞中的表達量高于癌旁組織，其與食管癌的腫瘤分化程度、病理學(xué)分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，提示PR-SET7的異常表達與食管癌的進展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，但其在食管癌中的調(diào)控機制尚不明確。

在當(dāng)前腫瘤生物學(xué)研究中，表觀遺傳學(xué)改變已經(jīng)成為熱點，通過DNA甲基化、非編碼RNA調(diào)控、染色質(zhì)重塑等領(lǐng)域的研究，對腫瘤預(yù)后評估提供了諸多有價值的分子標(biāo)志[12]。目前研究提示在食管癌組織中存在多條異常激活的信號傳導(dǎo)通路[13]，進一步研究PR-SET7在食管癌中調(diào)控機制，了解PR-SET7在食管癌中是否有其專屬的調(diào)節(jié)通路，以及該通路上所存在的相關(guān)靶基因，對食管癌的預(yù)測、早期診斷、病情發(fā)展及預(yù)后等方面具有重要的價值，可作為一個評估食管癌潛在風(fēng)險的重要因素，為食管癌的治療及藥物研發(fā)提供新的方向。

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