微生物控制對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物培育的研究

黃治朝

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院（血液學(xué)研究所），天津 300020)

0 引言

近年來隨著生物醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物培養(yǎng)及模型動(dòng)物的建立成為了醫(yī)學(xué)研究必需的材料，其中SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇及飼養(yǎng)中各種控制性因素是影響醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要原因，因此良好的管理制度和規(guī)范化的飼養(yǎng)流程是保障高質(zhì)量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的前提[1-2]。在SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理中，影響動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的重要指標(biāo)在于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其周圍物料的微生物控制，有效的微生物控制措施，不僅可以保障實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，同時(shí)可以保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康培育[3]。為有效驗(yàn)證微生物控制對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響，本文從微生物控制角度分析微生物控制對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物培育的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

80只40日齡，體重在30g左右的SPF級(jí)KM小鼠作為研究對(duì)象（均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），將上述實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，各40只，每組共20對(duì)，按照雌雄1：1長(zhǎng)期合籠隨機(jī)交配方式進(jìn)行飼養(yǎng)繁殖。

1.2 飼養(yǎng)管理

兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均飼養(yǎng)在SPF級(jí)屏障設(shè)施內(nèi)，飼養(yǎng)間均采用程序化自動(dòng)設(shè)置控制室溫、光照、濕度及噪音在合理范圍內(nèi)。對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料、飲水及墊料等均按照普通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障環(huán)境飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)流程操作，普通飲水和普通全價(jià)顆粒飼料經(jīng)真空高壓滅菌（0.2mPa 、121℃、30min）；觀察組均接受SPF體系化處理，包括飼料雙層小包裝并經(jīng)Co60滅菌全價(jià)顆粒料、飲水為酸化處理結(jié)合預(yù)真空高壓滅菌處理、墊料（真空壓縮包裝聯(lián)合Co60滅菌的刨花）。兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)人員及籠具等均嚴(yán)格按照相同高壓真空滅菌流程，且飼喂飼料營(yíng)養(yǎng)均符合《GB 14924.3-2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分》規(guī)定。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁殖均在相同飼養(yǎng)間，準(zhǔn)確記錄各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的產(chǎn)仔數(shù)及窩重、離乳仔數(shù)。

1.3 微生物檢測(cè)

在相同條件下，實(shí)施不同的微生物防控措施，依照《GB14922.2-2011實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》程序，對(duì)不同環(huán)境下滅菌后0h及使用12h、24h、36h期間屏障環(huán)境、物料的菌落數(shù)進(jìn)行對(duì)比。隨機(jī)抽取兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其第1代、第2代及第3代20日齡小鼠各20只進(jìn)行無菌解剖分離培養(yǎng)，經(jīng)PCR檢測(cè)兩組氣管分泌物、腸內(nèi)容物及臟器中沙門氏菌、鼠棒狀桿菌陽(yáng)性率。

1.4 評(píng)定指標(biāo)

繁殖性能指標(biāo)（第1胎-第3胎20日齡、60日齡、離乳小鼠體重變化；第1胎-第3胎出生體重、離乳活健仔數(shù)、離乳率及胎次間隔）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染沙門氏菌及鼠棒狀桿菌陽(yáng)性率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS（17.0）進(jìn)行t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析差異性變化，P＜0.05差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物感染陽(yáng)性率對(duì)比分析

表1 兩組所用墊料及飲水中菌落總數(shù)含量對(duì)比分析（CFU/皿，n=20）

表2 兩組20日齡各代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中微生物菌落含量對(duì)比分析（CFU/皿，n=20）

由表1可知，兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所使用的物料，經(jīng)不同時(shí)間段微生物菌落總數(shù)含量分離培養(yǎng)對(duì)比分析可知，0h進(jìn)入的墊料和飲用的水中均符合無菌要求；放置12h、24h、36h后，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組中的墊料和飲水中菌落總數(shù)含量顯著高于觀察組，差異顯著（P＜0.05）。由表2可知，兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物原代均無沙門氏菌和鼠棒狀桿菌感染；經(jīng)過對(duì)其第1-第3代小鼠組織臟器無菌條件下培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組第1-第3代小鼠中沙門氏菌和鼠棒狀桿菌培養(yǎng)菌落含量均極顯著高于觀察組，差異顯著（P＜0.05）。

2.2 兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖性能對(duì)比分析

表3 兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖性能對(duì)比分析

由表3可知，兩組的第1代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，除20日齡體重和60日齡體重方面，觀察組顯著高于對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），其余各指標(biāo)均差異不顯著（P＞0.05）；兩組第2代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在0日齡窩重、20日齡平均體重、60日齡平均體重及離乳窩均活健仔數(shù)方面，觀察組均顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05）；兩組第3代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在0日齡窩重、20日齡平均體重及60日齡平均體重方面，觀察組顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05）。同時(shí)，兩組第1-第3胎次的離乳率及胎次間距差異不顯著（P＜0.05）。

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型的不斷深入研究，動(dòng)物模型所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)化管理成為近年來社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。有效的標(biāo)準(zhǔn)化管理，不僅要保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生存環(huán)境條件、日糧營(yíng)養(yǎng)水平，同時(shí)還應(yīng)該對(duì)環(huán)境及物料中微觀生物進(jìn)行有效的控制[4-5]。為有效保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的合格化生產(chǎn)，國(guó)家出臺(tái)了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物檢測(cè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)《GB14922.2-2011實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》，通過這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)可以有效檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在SPF級(jí)環(huán)境條件下是否符合SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。盡管近年來有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)得到有效優(yōu)化，SPF環(huán)境及SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的培養(yǎng)得到穩(wěn)步進(jìn)行，但是對(duì)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁育方面卻未得到有效重視，其中有關(guān)微生物影響SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物培育的研究報(bào)道較少[6]。

本研究通過對(duì)80只SPF級(jí)KM實(shí)驗(yàn)小鼠在不同環(huán)境下的微生物監(jiān)控結(jié)果可知，有效的微生物監(jiān)控不僅可以保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康生長(zhǎng)，同時(shí)可以降低其子代的發(fā)病率及提高子代繁殖性能，因此優(yōu)化微生物控制對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的培育具有重要意義。

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