丙氨酰-谷氨酰胺緩解Diquat誘導(dǎo)的斷奶仔豬氧化損傷的影響

辛向榮 葉亞玲 游金明 賀 琴 鄧宸璽

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，江西省動物營養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省營養(yǎng)飼料開發(fā)工程中心，南昌 330045)

動物在正常的生理?xiàng)l件下，機(jī)體內(nèi)氧化和還原水平處于動態(tài)平衡中，即自由基不斷產(chǎn)生，同時(shí)又被及時(shí)清除。如果這種穩(wěn)態(tài)被打破，體內(nèi)自由基將因無法及時(shí)分解或轉(zhuǎn)化而出現(xiàn)大量累積。當(dāng)自由基超過機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的承受能力時(shí)，將造成機(jī)體氧化損傷，進(jìn)而造成動物消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)受損，生產(chǎn)性能下降[1]。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，氧化應(yīng)激是斷奶仔豬常見的生理現(xiàn)象，也是引起養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)損失的一個(gè)主要因素。研究表明，谷氨酰胺(Gln)是哺乳動物血液中最豐富的一種游離氨基酸，在泌乳21 d的母豬乳汁中含量高達(dá)1.93 mmol/L[2]。Gln作為重要的免疫增強(qiáng)因子，可減少氧化應(yīng)激狀態(tài)下的氧化損傷。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加Gln可提高仔豬血漿和空腸組織中游離Gln、谷胱甘肽(GSH)含量。Gln可以緩解斷奶應(yīng)激引起的腸道Gln含量降低及氧化型谷胱甘肽(GSSG)/還原型GSH的比值增加[3]；還可以減少疾病或應(yīng)激狀態(tài)下細(xì)胞凋亡，主要通過增強(qiáng)抗氧化酶防御作用、熱休克蛋白的表達(dá)以及誘導(dǎo)細(xì)胞自噬來發(fā)揮作用[4]。Gln作為小腸細(xì)胞的主要能量來源，也可有效促進(jìn)小腸上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞增殖、分化，修復(fù)小腸黏膜[5]。但由于Gln單體水溶性低、熱不穩(wěn)定，且易分解為有毒的焦谷氨酸和氨，因而大大限制了它在畜禽飼糧中的應(yīng)用。二肽形式的Gln[Gln二肽，如丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)]則可克服單體Gln的缺點(diǎn)，在水溶液、熱環(huán)境下較穩(wěn)定，常溫下保存2年仍保持穩(wěn)定，且在水中溶解度約為單體Gln的4倍[6]。小腸黏膜可吸收Gln二肽，在組織和細(xì)胞內(nèi)快速分解成Gln而被利用，小腸對Gln二肽吸收具有不飽和性，且不存在競爭，相比單體Gln具有更大的吸收利用優(yōu)勢。因此Gln二肽作為Gln的替代物廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)的全胃腸外營養(yǎng)。然而，目前Gln二肽對斷奶仔豬抗氧化能力的影響鮮有報(bào)道。因此，本研究擬以Ala-Gln為試驗(yàn)材料，探討Ala-Gln對Diquat誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激仔豬血清、空腸和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響，旨在為Ala-Gln在仔豬飼糧中的科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用的Ala-Gln購自上海超強(qiáng)化工有限公司，純度≥99%。

1.2 試驗(yàn)動物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用雙因子設(shè)計(jì)，選取24頭健康狀況良好、胎次相近的21日齡斷奶去勢小公豬，隨機(jī)分成2個(gè)組，每組12個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬，2個(gè)組分別飼喂基礎(chǔ)飼糧和基礎(chǔ)飼糧+0.3% Ala-Gln的試驗(yàn)飼糧。預(yù)飼喂7 d后，在前期飼喂基礎(chǔ)上，將仔豬分成4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬，分別為基礎(chǔ)飼糧組、基礎(chǔ)飼糧+0.3% Ala-Gln組、基礎(chǔ)飼糧應(yīng)激組、基礎(chǔ)飼糧+0.3% Ala-Gln應(yīng)激組。應(yīng)激組通過腹腔注射8 mg/kg BW Diquat模擬仔豬氧化應(yīng)激，未應(yīng)激組則注射等量的滅菌生理鹽水。Diquat劑量的確定參照徐靜等[7]的方法。試驗(yàn)期7 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，試驗(yàn)飼糧在基礎(chǔ)飼糧中添加0.3%的Ala-Gln。飼糧配方參照NRC(2012)，以真回腸可消化氨基酸為基礎(chǔ)進(jìn)行配制。基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

預(yù)混料為每千克飼糧提供 The premix provided the following per kilogram of the diet：Fe 120 mg，Cu 7 mg，Mn 25 mg，Zn 130 mg，I 0.2 mg，Se 0.3 mg，Co 1.5 mg，VA 4 800 IU，VD3480 IU，VE 40 IU，VK31.5 mg，VB13 mg，VB28 mg，VB63.5 mg，VB120.04 mg，泛酸 pantothenic acid 25 mg，尼克酸 niacin 35 mg，生物素 biotin0.15 mg，葉酸 folic acid 1 mg。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省動物營養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動物試驗(yàn)中心保育豬舍進(jìn)行。舍溫控制在23～26 ℃，相對濕度保持在55%～65%，粉料飼喂，自由采食、飲水。驅(qū)蟲、去勢、防疫注射等管理措施按豬場常規(guī)程序執(zhí)行。

1.5 樣品采集與處理

于試驗(yàn)期第7天早上，以重復(fù)為單位，仔豬空腹前腔靜脈采血。靜置待凝血后，3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20 ℃保存待測。仔豬靜脈注射5%戊巴比妥鈉麻醉后，放血、剖開腹腔。迅速分離肝臟、空腸，剔除脂肪和可見結(jié)締組織后，用預(yù)冷(4 ℃)生理鹽水沖洗，迅速取樣。肝臟迅速放入液氮，于-70 ℃保存待測。

將小腸和腸系膜推向左下方，暴露出十二指腸腹膜固定段，在此用線結(jié)扎定位空腸頭部位，剪斷分離腸系膜，取空腸中部10 cm左右，用預(yù)冷生理鹽水輕輕沖凈腸內(nèi)壁，剪取2 cm存于1.5 mL凍存管中，液氮速凍，于-70 ℃保存待測。

1.6 測定指標(biāo)與方法

1.6.1 血清抗氧化指標(biāo)

采用南京建成生物工程研究所試劑盒，根據(jù)試劑盒說明要求進(jìn)行檢測，分別測定血清Gln、GSH、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及總抗氧化能力(T-AOC)。

1.6.2 空腸、肝臟抗氧化指標(biāo)

采用南京將建成生物工程研究所試劑盒，根據(jù)試劑盒說明要求進(jìn)行檢測，分別測定空腸、肝臟中GSH、MDA含量和GSH-Px、CAT、T-SOD活性以及T-AOC。

1.6.3 肝臟谷胱甘肽過氧化物酶4(GPx4)、超氧化物歧化酶1(SOD1)mRNA表達(dá)量

1.6.3.1 總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄

按試劑盒說明采用Trizol法提取肝臟總RNA。并測定RNA的濃度與純度，吸光度(OD)260/280在1.8～2.2之間較為理想。利用TaKaRa RR047A反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成第1鏈cDNA，置于-20 ℃保存待測。

1.6.3.2GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量檢測

GPx4、SOD1 mRNA引物和探針采用Primer express 2.0軟件設(shè)計(jì)，并由專門公司合成，引物和探針序列見表2。按下述反應(yīng)條件在FTC2000(Canada)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，PCR反應(yīng)體系為50 μL：25 μL 2×Hotstart Fluo-PCR mix，1 μL×2上、下游引物，0.5 μL Probe (25 pmol/μL)，1 μL cDNA模板，21.5 μL dH2O。熒光定量PCR擴(kuò)增條件的設(shè)置：94 ℃ 4 min；94 ℃ 20 s；60 ℃ 30 s循環(huán)40次。以β-肌動蛋白(β-actin)作為內(nèi)參，采用2-ΔCt法計(jì)算GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量。

表2 GPx4、SOD1和β-actin mRNA的引物和探針序列

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，試驗(yàn)指標(biāo)按因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行雙因素有效互作方差分析，分析主效應(yīng)(Ala-Gln和Diquat)以及兩者的交互效應(yīng)，Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”形式表示。通過2-ΔCt法計(jì)算mRNA表達(dá)量，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”形式表示。P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響見表3。由表中數(shù)據(jù)可知，Diquat對血清GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC及MDA含量有顯著影響(P<0.05)，但對血清Gln、GSH含量和CAT活性沒有影響(P>0.05)；Ala-Gln對血清Gln、GSH含量和GSH-Px、T-SOD活性及T-AOC有顯著影響(P<0.05)，但對血清MDA含量和CAT活性沒有顯著影響(P>0.05)；Diquat與Ala-Gln的交互效應(yīng)對血清T-SOD活性和T-AOC有顯著影響(P<0.01)，但對血清Gln、GSH、MDA含量和GSH-Px、CAT活性沒有顯著影響(P>0.05)。

多重比較發(fā)現(xiàn)，Diquat誘導(dǎo)氧化應(yīng)激后，仔豬血清GSH含量、T-SOD活性顯著下降(P<0.05)。仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln顯著降低了血清T-SOD活性(P<0.05)，顯著提高血清Gln含量和T-AOC(P<0.05)，對血清GSH含量和GSH-Px、CAT活性無顯著影響(P>0.05)；仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln顯著提高了血清Gln、GSH、MDA含量以及GSH-Px、T-SOD活性(P<0.05)。

表3 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

-表示未應(yīng)激，+表示應(yīng)激，Ala-Gln：丙氨酰-谷氨酰胺。同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

- mean no stress, + mean stress, Ala-Gln: anyl-glutamine. In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬空腸抗氧化指標(biāo)的影響

Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬空腸抗氧化指標(biāo)的影響見表4。由表中數(shù)據(jù)可知，Diquat對空腸GSH-Px、CAT、T-SOD活性和MDA含量及T-AOC有顯著影響(P<0.05)；Ala-Gln對空腸GSH-Px、T-SOD活性和MDA含量及T-AOC有顯著影響(P<0.05)，但對空腸CAT活性無顯著影響(P>0.05)；Diquat與Ala-Gln的交互效應(yīng)對空腸MDA含量、GSH-Px活性和T-AOC有顯著影響(P<0.05)，但對空腸CAT、T-SOD活性無顯著影響(P>0.05)。

多重比較發(fā)現(xiàn)，Diquat誘導(dǎo)氧化應(yīng)激后，仔豬空腸GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC顯著下降(P<0.05)，空腸MDA含量顯著上升(P<0.05)。仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln顯著提高了空腸GSH-Px活性和T-AOC(P<0.05)，顯著降低了空腸MDA含量(P<0.05)，但對空腸CAT和T-SOD活性無顯著影響(P>0.05)；仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln顯著提高了空腸GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC(P<0.05)，顯著降低了空腸MDA含量(P<0.05)。

表4 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬空腸抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟抗氧化指標(biāo)的影響見表5。由表中數(shù)據(jù)可知，Diquat對肝臟GSH-Px、CAT、T-SOD活性和MDA含量及T-AOC有顯著影響(P<0.05)；Ala-Gln對肝臟T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量及T-AOC有顯著影響(P<0.05)，但對肝臟CAT活性無顯著影響(P>0.05)；Diquat與Ala-Gln的交互效應(yīng)對肝臟MDA含量、GSH-Px活性以及T-AOC有顯著影響(P<0.05)，但對肝臟CAT、T-SOD活性無顯著影響(P>0.05)。

多重比較發(fā)現(xiàn)，Diquat誘導(dǎo)氧化應(yīng)激后，仔豬肝臟GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC顯著下降(P<0.05)，肝臟MDA含量顯著上升(P<0.05)。仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln顯著提高了肝臟GSH-Px活性以及T-AOC(P<0.05)，顯著降低了MDA含量(P<0.05)，但對肝臟CAT、T-SOD活性無顯著影響(P>0.05)；仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln顯著提高了肝臟GSH-Px、T-SOD活性及T-AOC(P<0.05)，顯著降低了肝臟MDA含量(P<0.05)。

表5 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量的影響

Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量的影響見表6。由表中數(shù)據(jù)可知，Diquat、Ala-Gln及Diquat與Ala-Gln的交互效應(yīng)對肝臟GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量均有顯著影響(P<0.05)。

仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln使肝臟GPx4 mRNA表達(dá)量提高了95.8%(P<0.05)；仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln使肝臟GPx4 mRNA表達(dá)量提高了166.7%(P<0.05)。

Diquat誘導(dǎo)氧化應(yīng)激后，仔豬肝臟SOD1 mRNA表達(dá)量顯著提高(P<0.05)。仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln使肝臟中SOD1 mRNA表達(dá)量降低了59.4%(P>0.05)；仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln使肝臟中SOD1 mRNA表達(dá)量降低了40.0%(P<0.05)。

表6 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量的影響

3 討 論

3.1 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

仔豬斷奶后，食物從母乳到飼糧的轉(zhuǎn)變，使采食量驟降，不能滿足機(jī)體對Gln的需求。而Gln作為重要的抗氧化活性物質(zhì)，外源性添加Gln，可有效改善仔豬生長性能，保護(hù)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，緩解仔豬斷奶應(yīng)激[3,8-12]。作為Gln的替代產(chǎn)品，Ala-Gln與Gln有相似的功能。在應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體對Gln的需要量加大，內(nèi)源性Gln不能滿足機(jī)體的需求。且斷奶后仔豬不能通過母乳獲得Gln，斷奶仔豬飼糧中添加Gln或Ala-Gln顯得尤為重要[13]。動物體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)主要由GSH-Px、超氧化物歧化酶(SOD)、CAT和一些低分子化合物(維生素C、維生素E、GSH等)組成。其中血清抗氧化酶活性反映了動物機(jī)體內(nèi)的氧化還原狀態(tài)。飼糧中添加Gln也可有效防止機(jī)體由于前體物質(zhì)不足而造成的GSH合成障礙[14]。

前期的試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.3% Ala-Gln可顯著提高21～28日齡仔豬生長性能[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln能夠顯著提高血清Gln含量，使得機(jī)體內(nèi)Gln得到補(bǔ)充，有提高血清GSH含量及GSH-Px、CAT活性的趨勢。這與戴定威等[16]研究結(jié)果相似。試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，血清T-SOD活性顯著降低，這可能是因?yàn)闄C(jī)體處于氧化還原平衡狀態(tài)，并不需要太多抗氧化酶就足夠維持自身穩(wěn)態(tài)。同樣，張軍民等[17]研究發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組飼糧中添加1.2% Gln提高了35日齡仔豬血清GSH-Px活性，降低了血清SOD活性。而席鵬彬等[18]研究發(fā)現(xiàn)，通過向仔豬飼糧中添加Gln二肽，使斷奶后血清SOD活性顯著提高，這可能是由于添加物質(zhì)規(guī)格和水平不同所導(dǎo)致。通過注射Diquat模擬氧化應(yīng)激狀態(tài)能夠顯著降低仔豬血清中GSH-Px、T-SOD活性，并顯著降低血清T-AOC，且血清MDA含量顯著升高。這正驗(yàn)證了當(dāng)仔豬遭受持續(xù)的氧化應(yīng)激時(shí)，血清GSH-Px、T-SOD活性的下降是為了調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)氧化和還原平衡。研究表明，動物體內(nèi)抗氧化物酶活性的降低，是因?yàn)榻K產(chǎn)物過氧化氫(H2O2)的反饋調(diào)節(jié)作用或超氧陰離子(O2-)使抗氧化物酶滅活，徐靜等[7]研究也發(fā)現(xiàn)，通過仔豬腹腔注射Diquat模擬氧化應(yīng)激，顯著或極顯著降低了第7、14、21、28天血清GSH-Px、T-SOD活性，抑制羥自由基能力，顯著提高了血清MDA含量，在第7、14、21、28天血清CAT活性有降低趨勢，H2O2含量有增加趨勢。

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加0.3%的Ala-Gln可顯著提高血清Gln、GSH含量，并能顯著提高血清GSH-Px、SOD活性及T-AOC，血清MDA含量有降低趨勢。仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體為維持氧化和還原的動態(tài)平衡，需要提高抗氧化能力。而通過外源添加Ala-Gln能夠提高血清中Gln含量，GSH-Px大量合成，同時(shí)SOD也持續(xù)發(fā)揮作用，T-AOC得到顯著提高，緩解了氧化應(yīng)激的強(qiáng)度，從而使仔豬免受應(yīng)激傷害。

3.2 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬空腸、肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

小腸和肝臟作為動物體內(nèi)最活躍的兩大部位，能夠?yàn)闄C(jī)體提供源源不斷的營養(yǎng)素和免疫因子，同時(shí)在應(yīng)激狀態(tài)下也最容易受到損傷。小腸和肝臟組織中具有完善的抗氧化系統(tǒng)，抗氧化酶的表達(dá)和合成機(jī)制也非常完善。

仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln能夠顯著提高空腸GSH-Px活性，從而顯著提高了T-AOC，空腸MDA含量顯著下降，空腸T-SOD活性也有顯著提高，這可能是由于仔豬腸道接觸各種應(yīng)激源，因此需要更強(qiáng)的抗氧化力來維持組織穩(wěn)態(tài)。當(dāng)仔豬遭受氧化應(yīng)激時(shí)，仔豬的空腸GSH-Px、T-SOD和CAT活性顯著下降，T-AOC顯著下降，MDA含量顯著提高。而Ala-Gln添加組的仔豬空腸GSH-Px、T-SOD活性顯著提高，T-AOC顯著提高，MDA含量顯著降低。這表明Ala-Gln可以通過提高仔豬空腸抗氧化酶活性，增強(qiáng)抗氧化能力，減緩氧化應(yīng)激危害。同時(shí)，仔豬飼糧中添加Aln-Gln也能夠顯著提高肝臟GSH-Px活性和T-AOC，顯著降低MDA含量。氧化應(yīng)激狀態(tài)使仔豬肝臟GSH-Px、T-SOD活性顯著下降，T-AOC和MDA含量顯著上升，CAT活性顯著下降，仔豬肝臟受到應(yīng)激損傷。大量試驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激能夠降低仔豬肝臟SOD活性，提高M(jìn)DA含量[19-21]。當(dāng)飼糧中添加Ala-Gln時(shí)，能顯著提高氧化應(yīng)激狀態(tài)下仔豬肝臟GSH-Px、CAT和T-SOD活性。這可能是由于外源性添加Ala-Gln后血清Gln含量增加，GSH-Px合成水平增加，保護(hù)組織細(xì)胞不受氧化損傷，CAT和T-SOD能夠維持酶活性，正常發(fā)揮抗氧化作用。這也表明飼糧中添加Ala-Gln可以提高仔豬肝臟抗氧化能力。

3.3 Ala-Gln對氧化應(yīng)激斷奶仔豬肝臟GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量的影響

GSH-Px和SOD作為2種重要的抗氧化酶，在機(jī)體遭受持續(xù)氧化應(yīng)激時(shí)，能夠及時(shí)清除堆積自由基，維持氧化與還原動態(tài)平衡。GPx4是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶類GSH-Px家族中的重要成員，在不同組織中發(fā)揮重要的抗氧化功能[22]。GPx4是哺乳動物細(xì)胞中唯一能直接還原生物膜上的磷脂氫過氧化物，從而保護(hù)生物膜免受氧化應(yīng)激損傷[23]。有研究表明，在仔豬肝臟中GPx4 mRNA表達(dá)量顯著高于其他組織，SODmRNA表達(dá)量也相對較高[24]。

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激狀態(tài)斷奶仔豬肝臟為維持氧化與抗氧化的動態(tài)平衡，提高了GPx4、SOD1 mRNA表達(dá)量，使肝臟抗氧化酶活性提高。外源性添加Ala-Gln后，正常生理狀態(tài)下和應(yīng)激狀態(tài)下，GPx4 mRNA表達(dá)量都顯著提高，而SOD1 mRNA表達(dá)量反而顯著降低。這與Hiraishi等[25]研究結(jié)果一致，說明動物機(jī)體內(nèi)整個(gè)抗氧化防御體系存在酶學(xué)機(jī)制反應(yīng)，在正常、應(yīng)激和病理狀態(tài)下，動物機(jī)體的抗氧化能力維持相對恒定。同時(shí)Hiraishi等[25]研究表明，細(xì)胞在處于氧化應(yīng)激狀態(tài)下，SODmRNA的表達(dá)受超氧陰離子自由基的誘導(dǎo)。當(dāng)Gln含量增加，GSH-PxmRNA表達(dá)量升高，組織內(nèi)自由基得到及時(shí)清除，SOD的作用較少。通過熒光定量PCR結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，添加Ala-Gln可以減少氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基，通過提高GSH-PxmRNA表達(dá)量，提高機(jī)體抗氧化能力。

4 結(jié) 論

① 仔豬正常生理狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln可顯著提高血清Gln含量和T-AOC，顯著提高空腸和肝臟GSH-Px活性和T-AOC，顯著降低空腸和肝臟MDA含量。

② 仔豬氧化應(yīng)激狀態(tài)下，飼糧中添加Ala-Gln可顯著提高血清、空腸和肝臟的部分抗氧化指標(biāo)，降低MDA含量，顯著提高肝臟GPx4 mRNA表達(dá)量，顯著降低SOD1 mRNA表達(dá)量。

③ 飼糧中添加Ala-Gln可減緩氧化應(yīng)激對斷奶仔豬機(jī)體組織的損傷，且在氧化應(yīng)激狀態(tài)下效果更為顯著。

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