家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、消化指標(biāo)和非特異性免疫指標(biāo)的影響

路晶晶 郭 冉* 夏 輝 解 偉 王美雪 楊品賢 李 娜

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，秦皇島 066000；2.山東省高唐縣第一中學(xué)，聊城 252000)

近年來(lái)，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，凡納濱對(duì)蝦集約化養(yǎng)殖也在極力推進(jìn)，隨之作為優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)源的魚(yú)粉需求量急劇上升，價(jià)格與日俱增。無(wú)論從養(yǎng)殖成本還是對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展要求考慮，探索新的飼料蛋白質(zhì)源已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)[2-4]。動(dòng)物對(duì)飼料中各種氨基酸的吸收并不僅僅受到單一限制性氨基酸的影響。20世紀(jì)60年代，Newey等[6-8]通過(guò)研究表明甘氨酸二肽可以完整吸收，這為消化道可以吸收肽的理論提供了有力的證據(jù)。許培玉等研究發(fā)現(xiàn)，在南美白對(duì)蝦飼料中添加小肽制品后蛋白酶活性顯著提高，提高蛋白質(zhì)的利用率。國(guó)內(nèi)外大量研究表明，可以通過(guò)酶降解技術(shù)來(lái)制備肽含量豐富的飼用羽毛粉肽，其中姚清華等[10]用不同技術(shù)成功制取風(fēng)味和口感均較好的飼用羽毛粉肽。家禽副產(chǎn)物羽毛粉、血粉是很好的蛋白質(zhì)原料，但存在角蛋白、硬質(zhì)蛋白等消化吸收率極低的蛋白質(zhì)，影響了蛋白質(zhì)的吸收利用。以酶解大豆蛋白為載體，采用生物酶工程技術(shù)將家禽羽毛粉和血粉分解為多肽、小肽和單個(gè)氨基酸，制成功能性蛋白肽家禽副產(chǎn)物酶解肽(peptides hydrolyzed from poultry by-products，PHFP)，可提高消化吸收率[11]。此外，作為替代魚(yú)粉的飼料原料還要考慮一個(gè)重要的問(wèn)題——氨基酸平衡問(wèn)題。雖然家禽副產(chǎn)物酶解肽含有豐富的半胱氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸等必需氨基酸，但對(duì)于凡納濱對(duì)蝦的限制性氨基酸蛋氨酸的含量卻遠(yuǎn)低于魚(yú)粉。有研究表明，在水產(chǎn)動(dòng)物中用羽毛粉搭配氨基酸可以節(jié)省部分魚(yú)粉，來(lái)降低飼料成本[12]。因此，本試驗(yàn)采用家禽副產(chǎn)物酶解肽為原料搭配包膜蛋氨酸，以凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象，研究其在飼料中部分替代魚(yú)粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和非特異性免疫指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 飼料的制作

家禽副產(chǎn)物酶解肽由秦皇島益爾生物科技有限公司生產(chǎn)，小肽含量在12%以上，粗蛋白質(zhì)含量在60%以上，酸溶蛋白含量在30%以上，其主要營(yíng)養(yǎng)成分含量見(jiàn)表1，分子質(zhì)量分布見(jiàn)表2。由于家禽副產(chǎn)物酶解肽中的限制性氨基酸蛋氨酸含量較國(guó)產(chǎn)魚(yú)粉低，因此試驗(yàn)中在家禽副產(chǎn)物酶解肽基礎(chǔ)上添加包膜蛋氨酸，使其蛋氨酸含量達(dá)到國(guó)產(chǎn)魚(yú)粉蛋氨酸含量(1.7%)，制成預(yù)混家禽副產(chǎn)物酶解肽。以預(yù)混家禽副產(chǎn)物酶解肽分別替代基礎(chǔ)飼料中0(對(duì)照)、2%、4%、6%、8%的魚(yú)粉，共制成5種試驗(yàn)飼料，分別命名為T(mén)0、T1、T2、T3、T4。飼料原料經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過(guò)80目篩網(wǎng)，按飼料配方(表3)混合均勻，用雙螺桿壓條機(jī)擠壓成直徑為1.2 mm的顆粒飼料，經(jīng)60 ℃熟化40 min，30 ℃恒溫干燥3 h冷卻后封入自封袋，于-20 ℃冰箱中保存。

1.2 飼養(yǎng)管理

蝦苗采購(gòu)于黃驊市鑫海生物技術(shù)有限公司，為進(jìn)口凡納濱對(duì)蝦自交系F1代。蝦苗暫養(yǎng)2周以適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境后，選取900尾健康活潑的蝦苗[平均]體重為(0.31±0.10) g]，隨機(jī)分到15個(gè)水族箱(60 cm×40 cm×50 cm)，每箱放養(yǎng)60尾，隨機(jī)選3箱為1組，共5組，每組飼喂1種試驗(yàn)飼料，進(jìn)行為期8周的養(yǎng)殖試驗(yàn)。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間每日定時(shí)(08：00、14:00、20:00)按體重的7%～10%定量投喂，每日吸污2次，換水1/3～1/2，并記錄投喂量和死亡情況，每2周測(cè)定1次養(yǎng)殖水體的鹽度、pH及溶解氧和氨氮含量。試驗(yàn)過(guò)程中養(yǎng)殖水體的鹽度為(30.5±0.5)‰，溫度為(27±1) ℃，溶解氧含量為(7.6±0.7) mg/L，氨氮含量為(0.48±0.13) mg/L，pH穩(wěn)定在8.0～8.6。飼養(yǎng)6周后，每次投喂2 h后采用虹吸法收集糞便于培養(yǎng)皿中，挑取包膜完整的糞便于稱(chēng)量瓶中，70 ℃烘干后保存于-20 ℃冰箱中用于飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的測(cè)定。

表1 家禽副產(chǎn)物酶解肽的主要營(yíng)養(yǎng)成分含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 家禽副產(chǎn)物酶解肽的分子質(zhì)量分布

表3 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

其他包含Contained the following of the others：蝦粉 chrimp meal 11%，發(fā)酵花生粕fermented peanut meal 13%，豆粕 soybean meal 26%，維生素C磷酸酯 vitamin C phosphate 0.5%，Ca(H2PO4)22%，玉米油 corn oil 1%，大豆磷脂油 soybean lecithin oil 1%，膽堿 choline 0.5%，羧甲基纖維素 CMC 1%，誘食劑 attractant 0.1%，三氧化二鉻 Cr2O30.02%，復(fù)合維生素 multi-vitamins 2%，復(fù)合礦物鹽 multi-minerals 1%。其中，復(fù)合維生素的組成為Composition of multi-vitamins：氯化膽堿 choline chloride 5.55%，肌醇 inositol 2.22%，VC 1.11%，泛酸鈣 calcium pantothenate 0.83%，VB10.22%，VB20.56%，VB60.06%，VK 0.06%，葉酸 folic acid 0.02%，VB120.012%，生物素 biotin 0.006%，醋酸α-生育酚 alpha tocopherol acetate 0.44%，纖維素 cellulose 88.912%。復(fù)合礦物鹽的組成為Composition of multi-minerals：Ca(H2PO4)·2H2O 12.29%，乳酸鈣 calcium lactate 47.41%，NaH2PO4·2H2O 4.20%，NaCl 3.23%，K2SO416.38%，KCl 6.58%，F(xiàn)eSO4·7H2O 1.07%，檸檬酸鐵 ferric citrate 3.83%，MgSO4·7H2O 4.42%，ZnSO40.47%，MnSO4·H2O 0.033%，CuSO4·5H2O 0.022%，CoCl2·6H2O 0.043%，KIO40.022%。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h后每箱分別計(jì)數(shù)和稱(chēng)重，然后每箱隨機(jī)取6尾蝦，擦干體表水分后稱(chēng)重，用于全蝦營(yíng)養(yǎng)成分分析；每箱再隨機(jī)取10尾蝦，以2.5 mL一次性注射器于頭胸甲后緣圍心腔內(nèi)吸取0.5 mL血淋巴，再加入1.5 mL抗凝劑混合均勻后立即以100×g、4 ℃離心10 min，棄血細(xì)胞和沉淀留上清液即為血漿，4 ℃保存；取完血淋巴后，于冰盤(pán)上將對(duì)蝦解剖，取肝胰腺稱(chēng)重后液氮迅速冷凍，-80 ℃保存。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 肝胰腺組織勻漿的制備

取肝胰腺組織于冰冷的生理鹽水中漂洗(除去血液)，用濾紙拭干后稱(chēng)取0.5 g放入10 mL離心管中，加入勻漿介質(zhì)[含0].01 mol/L Tris-HCl、0.000 1 mol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、0.01 mol/L蔗糖、0.137 mol/L氯化鈉的溶液，pH=7.4]，采用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)勻漿5次(冰水浴下)，每次10 s，制備成10%的肝胰腺組織勻漿，用于消化及免疫指標(biāo)的測(cè)定。

1.4.2 測(cè)定方法

飼料和蝦糞便中的三氧化二鉻(Cr2O3)含量采用SCT 1089—2006《魚(yú)類(lèi)消化率測(cè)定方法》中的酸消化比色法測(cè)定，水分含量采用105 ℃烘干減重法測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定，粗灰分含量采用550 ℃馬弗爐灰化法測(cè)定。血漿葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)含量由秦皇島海港醫(yī)院檢驗(yàn)中心測(cè)定，淀粉酶(碘-淀粉比色法)、脂肪酶(比濁法)、胃蛋白酶(福林試劑比色法)、胰蛋白酶[N-]苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)法]、溶菌酶(LZM，自身對(duì)照法)、過(guò)氧化物酶(POD，酚比色法)活性和總抗氧化能力(T-AOC，F(xiàn)RAP法)的測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)。

凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能及飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率等指標(biāo)根據(jù)以下公式計(jì)算：

存活率(SR，%)=100×Nt/N0；增重率(WGR，%)=100×(Wt-W0)/W0；特定生長(zhǎng)率(SGR,%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t；蛋白質(zhì)效率(PER,%)=100×(Wt-W0)/(F×P)；飼料系數(shù)(FCR)=F/(Wt-W0)；肥滿度(CF,%)=100×Wt/L3；粗蛋白質(zhì)表觀消化率(ADCP,%)=100×[1-](A’/A)×(C/C’)]；粗脂肪表觀消化率(ADCF,%)=100×[1-](B’/B)×(C/C’)]。

式中：N0為初始蝦尾數(shù)；Nt為終末蝦尾數(shù)；W0為蝦初始體重(g)；Wt為蝦終末體重(g)；t為試驗(yàn)天數(shù)(d)；P為飼料中粗蛋白質(zhì)含量(%)；F為飼料攝食量(g)；L為蝦體長(zhǎng)(cm)；A為飼料中粗蛋白質(zhì)含量(%)；A’為糞便中粗蛋白質(zhì)含量(%)；B為飼料中粗脂肪含量(%)；B’為糞便中粗脂肪含量(%)；C為飼料中Cr2O3含量(%)；C’為糞便中Cr2O3含量(%)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，數(shù)據(jù)利用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法進(jìn)行組間的多重比較，差異顯著性水平為P<0.05。

2 結(jié) 果

2.1 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

由表4可知，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，凡納濱對(duì)蝦的終末體重、增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率均表現(xiàn)出逐漸降低趨勢(shì)，但T1、T2、T3組與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)，T4組顯著低于T0、T1組(P<0.05)；飼料系數(shù)則呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但T1、T2、T3組與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)，T4組顯著低于T0組(P<0.05)；各組凡納濱對(duì)蝦的存活率和肥滿度無(wú)顯著差異(P>0.05)，肥滿度隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，以T2組肥滿度的值最大。

表4 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦體成分的影響

由表5可知，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，凡納濱對(duì)蝦全蝦粗脂肪含量呈現(xiàn)逐漸降低趨勢(shì)，當(dāng)替代水平超過(guò)2%時(shí)(T2、T3、T4組)與T0組的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)；全蝦粗灰分呈現(xiàn)逐漸增加趨勢(shì)，當(dāng)替代水平超過(guò)2%時(shí)(T2、T3、T4組)與T0組的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)；全蝦水分、粗蛋白質(zhì)含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦體成分的影響

2.3 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿中GLU、TG含量的影響

由表6可知，各替代組(T1、T2、T3、T4組)血漿中GLU含量均顯著低于T0組(P<0.05)；血漿中TG含量除T3組與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)外，其余替代組均顯著低于T0組(P<0.05)。

表6 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿中GLU、TG含量的影響

2.4 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化指標(biāo)的影響

2.4.1 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表7可知，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，粗蛋白質(zhì)表觀消化率呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，粗脂肪表觀消化率則呈先增加后降低的趨勢(shì)，但組間差異均不顯著(P>0.05)。

2.4.2 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中消化酶活性的影響

由表8可知，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中胃蛋白酶和胰蛋白酶活性均逐漸降低。其中，T1、T2、T3組胃蛋白酶活性與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)，T4組則顯著低于T0組(P<0.05)；T2、T4組胰蛋白酶活性顯著低于T0組(P<0.05)，其他替代組與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)。各替代組肝胰腺中脂肪酶活性均高于T0組，以T1組最高，但各組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。各組肝胰腺中淀粉酶活性無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表7 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

表8 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中消化酶活性的影響

2.5 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺中LZM活性的影響

由表9可知，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，凡納濱對(duì)蝦血漿中LZM活性呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢(shì)，T1、T2、T3組血漿中LZM活性顯著高于T0組(P<0.05)，以T3組血漿中LZM活性最高，T4組血漿LZM活性與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)；肝胰腺中LZM活性隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加也呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，T1、T2、T3組分別比T0組高出19.3%、42.5%和5.0%，但差異未達(dá)顯著水平(P>0.05)，T4組較T0組有所低，但差異未達(dá)顯著水平(P>0.05)。

表9 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺中LZM活性的影響

2.6 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺中POD活性的影響

由表10可知，T1組血漿中POD活性與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)，但T2、T3、T4組則顯著低于T0組(P<0.05)；隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，肝胰腺中POD活性逐漸降低，但各組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表10 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺POD活力的影響

2.7 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺中T-AOC的影響

由表11可知，各替代組血漿和肝胰腺中T-AOC與T0組無(wú)顯著差異(P>0.05)。除T1組血漿T-AOC略低于對(duì)照組外，其他替代組血漿T-AOC均高于T0組。肝胰腺中T-AOC隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加表現(xiàn)為先增加后降低的趨勢(shì)，T-AOC最高組為T(mén)2組。

3 討 論

3.1 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、攝食、體成分的影響

Teshima等[13]、Zambonino等[14]、Erba等[15]均認(rèn)為小肽制品對(duì)蝦苗具有明顯的促進(jìn)生長(zhǎng)作用。姜柯君[16]發(fā)現(xiàn)適量小肽的添加可提高星斑川鰈幼魚(yú)的肌肉品質(zhì)，提高對(duì)蛋白質(zhì)的吸收利用。本試驗(yàn)將預(yù)混家禽副產(chǎn)物酶解肽以不同水平替代飼料中的魚(yú)粉，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，家禽副產(chǎn)物酶解肽替代2%、4%、6%的魚(yú)粉沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的促生長(zhǎng)作用，其增重率、特定生長(zhǎng)率無(wú)顯著變化，但各替代組全蝦粗蛋白質(zhì)含量均略高于對(duì)照組，替代水平超過(guò)2%后全蝦粗脂肪含量顯著低于對(duì)照組，全蝦粗灰分顯著高于對(duì)照組，即替代組對(duì)蝦全蝦的粗蛋白質(zhì)含量與粗脂肪含量的比值較對(duì)照組增高了，這對(duì)于作為高蛋白質(zhì)食品的凡納濱對(duì)蝦來(lái)講是個(gè)好現(xiàn)象。本試驗(yàn)中各替代組較對(duì)照組沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的促生長(zhǎng)作用可能與試驗(yàn)對(duì)象凡納濱對(duì)蝦獨(dú)特的攝食、消化特點(diǎn)以及單獨(dú)添加游離氨基酸有關(guān)。Newey等證實(shí)，含2～3個(gè)氨基酸的小肽可以通過(guò)載體直接被小腸細(xì)胞吸收，于多數(shù)動(dòng)物而言腸道是小肽吸收的主要場(chǎng)所。麥康森等[17]和劉襄河[18]的試驗(yàn)均證明凡納濱對(duì)蝦對(duì)蛋白質(zhì)原料的消化、酶解和吸收集中在中腸腺(即肝胰腺)，飼料中游離氨基酸在進(jìn)入腸道以前，絕大部分被中腸腺吸收。據(jù)此推測(cè)小肽和游離氨基酸的吸收可能存在空間差異，這可能是本次試驗(yàn)中家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦沒(méi)有產(chǎn)生顯著性促生長(zhǎng)作用的原因之一，鑒于對(duì)蝦獨(dú)特的攝食和消化特點(diǎn)，今后有必要進(jìn)行小肽在對(duì)蝦中腸腺、腸道吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的深入研究。另外，有研究提出晶體氨基酸可被機(jī)體直接吸收，不能與飼料中蛋白質(zhì)態(tài)氨基酸同步吸收[19]，因此試驗(yàn)飼料中預(yù)混家禽副產(chǎn)物酶解肽中選擇添加了包膜蛋氨酸而非晶體氨基酸，擬解決氨基酸吸收不同步的問(wèn)題，至于結(jié)果沒(méi)有明顯促生長(zhǎng)作用，除了氨基酸包膜材料的種類(lèi)對(duì)氨基酸的吸收存在一定的影響外，可能對(duì)蝦對(duì)于小肽和不同形式游離氨基酸的吸收在空間和時(shí)間上均存在一定差異。由家禽副產(chǎn)物酶解肽的分子質(zhì)量分布可知，本試驗(yàn)所用家禽副產(chǎn)物酶解肽的分子質(zhì)量小于1 000 u的小肽約占76%，而分子質(zhì)量小于1 000 u的小肽具有極強(qiáng)的活性和多樣性，多數(shù)可直接被機(jī)體吸收，因此推測(cè)本試驗(yàn)中的小肽可能不存在與晶體蛋氨酸吸收不同步的問(wèn)題，包膜蛋氨酸反而導(dǎo)致了吸收的不同步，或許加入晶體蛋氨酸后家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦的促生長(zhǎng)作用更顯著，后續(xù)會(huì)進(jìn)行在家禽副產(chǎn)物酶解肽中添加晶體蛋氨酸的試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證推論。至于家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平達(dá)到8%時(shí)增重率顯著降低除上述幾種原因外，也可能是由于替代水平的增加削弱了魚(yú)粉中某些促生長(zhǎng)因子的作用，具體原因有待進(jìn)一步研究?？傊仪莞碑a(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平小于6%時(shí)，增重率、特定生長(zhǎng)率等生長(zhǎng)指標(biāo)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異，結(jié)合資源節(jié)約和成本效益等因素考慮，家禽副產(chǎn)物酶解肽部分替代凡納濱對(duì)蝦飼料中的魚(yú)粉是可行的。

表11 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺中T-AOC的影響

3.2 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺消化酶活性及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收主要依靠消化器官中的酶，機(jī)體消化能力、生長(zhǎng)性能和免疫力均與消化酶的活性有關(guān)[20]。肝胰腺是蝦類(lèi)主要的消化酶分泌器官，因此肝胰腺中消化酶的活性是衡量蝦消化能力的重要指標(biāo)[21]，同時(shí)理論上認(rèn)為消化酶活性的提高會(huì)引起相應(yīng)蛋白質(zhì)、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的增加[22]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各替代組肝胰腺中脂肪酶活性均高于對(duì)照組，且以2%替代組最高；肝胰腺中胃蛋白酶和胰蛋白酶活性隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加均呈下降趨勢(shì)，當(dāng)替代水平為8%時(shí)，顯著低于對(duì)照組；肝胰腺中淀粉酶活性各組間無(wú)顯著性差異；并且各組的蛋白質(zhì)表觀消化率、脂肪表觀消化率的變化趨勢(shì)與相應(yīng)酶活性的變化趨勢(shì)大致吻合，符合理論觀點(diǎn)。本試驗(yàn)未能得出胡先勤等[23]認(rèn)為的小肽能提高魚(yú)體內(nèi)某些消化酶活性，使水產(chǎn)動(dòng)物的消化方式盡早由胞液消化轉(zhuǎn)變?yōu)槟は?，促進(jìn)消化功能發(fā)育提前，使機(jī)體能更加充分有效地利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)這一結(jié)論，原因仍是與甲殼動(dòng)物自身消化吸收方式有關(guān)。

3.3 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿生化指標(biāo)的影響

血液中的GLU含量反映了凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)糖代謝的情況，同時(shí)也可反映飼料中營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)含量是否合適，以及肝臟機(jī)能的情況[24]。在一定閾值內(nèi)血漿GLU含量越高，表明蝦的狀態(tài)越好，血漿GLU含量超過(guò)一定閾值后會(huì)造成機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)生理脅迫，損害機(jī)體健康[25]。血漿TG含量反映機(jī)體脂肪代謝的情況，其含量升高表明肝臟中脂肪堆積較多，易引發(fā)脂肪肝、肝肥大等病理癥狀[26]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，家禽副產(chǎn)物酶解肽替代凡納濱對(duì)蝦飼料中2%～8%的魚(yú)粉時(shí)可降低血漿中GLU和TG含量，說(shuō)明家禽副產(chǎn)物酶解肽替代部分魚(yú)粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦糖、脂代謝有一定的影響。血漿中GLU和TG的含量會(huì)隨著飼料組成的不同發(fā)生明顯變化，血漿中GLU含量的降低，一方面可能是因?yàn)榧仪莞碑a(chǎn)物酶解肽中小肽對(duì)糖分解代謝的促進(jìn)作用大于糖合成代謝，加速了機(jī)體內(nèi)糖的利用，降低了血漿中GLU含量；另一方面，甲殼動(dòng)物所特有的多功能神經(jīng)內(nèi)分泌激素——甲克類(lèi)高血糖素(crustacean hyperglycemic hormone，CHH)的主要功能是調(diào)節(jié)血漿GLU含量，家禽副產(chǎn)物酶解肽中的小肽有可能通過(guò)提高機(jī)體對(duì)CHH的敏感性來(lái)提高其效率，使血漿GLU含量降低。若脂類(lèi)在體內(nèi)運(yùn)輸發(fā)生障礙，則會(huì)導(dǎo)致血漿中TG的含量升高，各替代組血漿中TG的含量較對(duì)照組下降有可能是因?yàn)榧仪莞碑a(chǎn)物酶解肽中某些小肽可以促進(jìn)血漿中脂質(zhì)的代謝，加速TG的水解和清除，或者是機(jī)體抗氧化能力的增強(qiáng)或減弱對(duì)血漿中脂質(zhì)代謝過(guò)程產(chǎn)生了影響，具體還有待進(jìn)一步研究和論證。

3.4 家禽副產(chǎn)物酶解肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿和肝胰腺中非特異性免疫指標(biāo)的影響

LZM又稱(chēng)胞壁質(zhì)酶，是一種穩(wěn)定的堿性蛋白酶。Rojtinnakorn等[27]用表達(dá)序列標(biāo)簽法研究日本囊對(duì)蝦免疫基因表達(dá)情況時(shí)發(fā)現(xiàn)LZM是重要的抗菌蛋白之一。滕玉清等[28]發(fā)現(xiàn)飼料中添加5%的魚(yú)蛋白水解物替代魚(yú)粉可顯著提高中國(guó)對(duì)蝦肝胰腺中LZM的活性；柳茜等[29]發(fā)現(xiàn)在飼料中添加2%酵母蛋白水解物替代魚(yú)粉時(shí)可顯著提高大菱鲆幼魚(yú)血清中LZM的活性。本試驗(yàn)研究表明，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，肝胰腺中LZM的活性逐漸升高，但各組間無(wú)顯著差異；而血漿中LZM的活性則呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢(shì)，2%、4%和6%替代組顯著高于對(duì)照組，推測(cè)家禽副產(chǎn)物酶解肽通過(guò)增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦血漿中LZM的活性來(lái)提高自身抗菌、抗病毒能力。

POD是一類(lèi)可以催化過(guò)氧化氫、氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)的化合物，具有消除過(guò)氧化氫、酚類(lèi)和胺類(lèi)毒性的雙重作用，存在于過(guò)氧化物酶體中，是機(jī)體的抗氧化酶，對(duì)細(xì)胞起保護(hù)作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明2%替代組血漿中POD活性與對(duì)照組無(wú)顯著差異，但4%、6%及8%替代組血漿中POD的活性顯著低于對(duì)照組；肝胰腺中POD活性各組間無(wú)顯著差異。

測(cè)定T-AOC可以間接分析機(jī)體防御體系抗氧化的主要途徑，T-AOC是反映機(jī)體整體抗氧化水平高低的重要指標(biāo)[30]。石廣舉等[31]研究發(fā)現(xiàn)抗菌肽可以顯著提高對(duì)蝦血清中T-AOC。在本試驗(yàn)中，隨著家禽副產(chǎn)物酶解肽替代魚(yú)粉水平的增加，各替代組血清和肝胰腺中T-AOC均高于對(duì)照組(除2%替代組略低于對(duì)照組)，推測(cè)家禽副產(chǎn)物酶解肽可能有助于機(jī)體提高自身的抗氧化能力來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的防御能力。另外，機(jī)體抗氧化能力在脂質(zhì)代謝中也具有重要的作用，抗氧化能力的增強(qiáng)有助于緩解機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)，提高脂蛋白脂酶(LPL)活性，從而降低血漿中TG的含量[32-33]。因此，機(jī)體T-AOC的增強(qiáng)可能為本試驗(yàn)血漿TG含量的降低提供了一個(gè)可能的原因。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下：

① 家禽副產(chǎn)物酶解肽替代飼料中2%～6%的魚(yú)粉時(shí)，對(duì)凡納濱對(duì)蝦的存活率、增重率、特定生長(zhǎng)率等生長(zhǎng)指標(biāo)及飼料利用指標(biāo)無(wú)顯著影響。

② 家禽副產(chǎn)物酶解肽替代飼料中超過(guò)2%的魚(yú)粉時(shí)，會(huì)顯著降低凡納濱對(duì)蝦全蝦粗脂肪含量，顯著提高全蝦粗灰分含量，對(duì)其他體成分含量無(wú)顯著影響。

③ 家禽副產(chǎn)物酶解肽替代飼料中2%的魚(yú)粉時(shí)，凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中脂肪酶活性最高，并可顯著降低血漿中GLU和TG的含量，顯著提高血漿中LZM的活性。

④ 以生長(zhǎng)性能為基礎(chǔ)，綜合考慮消化、非特異性免疫等指標(biāo)，家禽副產(chǎn)物酶解肽替代凡納濱對(duì)蝦飼料中魚(yú)粉的適宜水平為2%。

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