黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、體組成、血漿生化指標(biāo)和組織結(jié)構(gòu)的影響

胡俊茹 王國(guó)霞 莫文艷 黃燕華* 李國(guó)立 黎 宙 孫育平 趙紅霞

(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，廣州 510640；2.廣州飛禧特生物科技有限公司，廣州 510640；3.廣東省畜禽育種與營(yíng)養(yǎng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510640；4.農(nóng)業(yè)部華南動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510640)

魚(yú)粉由于具有適口性好、容易被消化吸收等特點(diǎn)，是水產(chǎn)動(dòng)物配合飼料主要的蛋白質(zhì)來(lái)源，在飼料配方中所占比重較大。然而，由于氣候變化、環(huán)境惡化、過(guò)渡捕撈等因素影響，全球漁業(yè)資源枯竭，魚(yú)粉產(chǎn)量逐年下降，與此同時(shí)，全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)在過(guò)去10年中穩(wěn)步增長(zhǎng)，養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，魚(yú)粉需求量在逐年增加。魚(yú)粉的供需矛盾已成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖可持續(xù)發(fā)展的主要瓶頸之一，因此，降低水產(chǎn)養(yǎng)殖對(duì)魚(yú)粉的過(guò)度依賴，開(kāi)發(fā)適宜的蛋白質(zhì)替代資源成為亟待解決的問(wèn)題。

鱸魚(yú)(Lateolabraxjaponicus)，俗名七星鱸、花鱸，屬鱸形目，鰭科，花鱸屬，因其具有生長(zhǎng)迅速，對(duì)溫度、鹽度適應(yīng)性廣，肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等特點(diǎn)，已成為我國(guó)沿海地區(qū)一種重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大。鱸魚(yú)是肉食性魚(yú)類，魚(yú)粉依然是鱸魚(yú)配合飼料的主要蛋白質(zhì)來(lái)源，在基礎(chǔ)飼料中占40%左右。目前昆蟲(chóng)替代源在鱸魚(yú)飼料中的應(yīng)用研究未見(jiàn)報(bào)道，因此，本試驗(yàn)擬開(kāi)展黑水虻幼蟲(chóng)粉替代飼料中不同比例的魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、體組成、血漿生化指標(biāo)、組織結(jié)構(gòu)影響的研究，以期為黑水虻幼蟲(chóng)粉在鱸魚(yú)飼料中的應(yīng)用提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 黑水虻幼蟲(chóng)粉

試驗(yàn)用黑水虻幼蟲(chóng)由廣州飛禧特生物科技有限公司提供，采用天然氣干燥設(shè)備烘干制得。在實(shí)驗(yàn)室用萬(wàn)能粉碎機(jī)將黑水虻幼蟲(chóng)粉碎，制得黑水虻幼蟲(chóng)粉，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。烘干的黑水虻幼蟲(chóng)呈淡黃色，粉碎后制得的黑水虻幼蟲(chóng)粉有香味，無(wú)霉變結(jié)塊。經(jīng)分析測(cè)定，黑水虻幼蟲(chóng)粉的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、鈣、總磷含量分別為1.90%、34.00%、37.50%、14.80%、4.61%、1.14%，賴氨酸、蛋氨酸含量分別為1.76%、0.46%，以上測(cè)定結(jié)果均為風(fēng)干基礎(chǔ)。

1.2 試驗(yàn)飼料

首先以魚(yú)粉(水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、鈣、總磷含量分別為9.76%、67.50%、5.96%、16.06%、3.14%、2.46%，賴氨酸、蛋氨酸含量分別為5.19%、1.92%)、豆粕、花生粕為主要蛋白質(zhì)源，魚(yú)油、豆油、磷脂為脂肪源，高筋面粉為糖源配制基礎(chǔ)飼料(含28.00%的魚(yú)粉)，然后用黑水虻幼蟲(chóng)粉等蛋白質(zhì)替代基礎(chǔ)飼料中0(對(duì)照)、10%、20%、30%、40%和50%的魚(yú)粉，配制6種試驗(yàn)飼料，并分別記為G0、G10、G20、G30、G40、G50。6種試驗(yàn)飼料等氮(粗蛋白質(zhì)含量為39.9%)等能(總能為17.9 MJ/kg)，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1，必需氨基酸組成見(jiàn)表2。所有飼料原料均粉碎并過(guò)60目篩，采用逐級(jí)擴(kuò)大法將維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料等成分混勻，然后加入魚(yú)油、豆油、卵磷脂和水混勻，用SLX-80型雙螺旋桿擠壓機(jī)將其制成直徑為2.0 mm的顆粒飼料，50 ℃烘干，自然冷卻后裝入密封袋，于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目Items飼料DietsG0G10G20G30G40G50高筋面粉Strongflour25．8023．1621．7019．4617．8116．05二水合磷酸氫鈣CaHPO4·2H2O2．002．002．002．002．002．00豆油Soybeanoil5．004．002．301．30卵磷脂Lecithin2．002．002．002．001．600．50維生素C磷酸酯Ascorbyl?monophosphate0．500．500．500．500．500．50甜菜堿Betaine0．500．500．500．500．500．50維生素預(yù)混料Vitaminpremix1)0．500．500．500．500．500．50礦物質(zhì)預(yù)混料Mineralpremix2)0．500．500．500．500．500．50氯化膽堿Cholinechloride0．500．500．500．500．500．50海藻酸鈉Sodiumalginate0．500．500．500．500．500．50賴氨酸Lys0．040．080．120．160．21蛋氨酸Met0．700．750．810．860．910．97合計(jì)Total100．00100．00100．00100．00100．00100．00營(yíng)養(yǎng)水平Nutrientlevels3)水分Moisture7．457．246．977．848．037．53粗蛋白質(zhì)Crudeprotein39．8539．8839．8639．8839．8039．78粗脂肪Crudelipid9．7910．6610．8511．7311．9212．69粗灰分Ash9．559．9610．3910．8611．1911．72鈣Calcium1．501．761．842．142．392．57總磷Totalphosphorus1．251．221．251．221．231．23總能Grossenergy/(MJ/kg)17．8617．7717．6017．5717．3517．35

1)每千克維生素預(yù)混料含有One kilogram of vitamin premix contained the following:VA 32 300 000 IU，VD 1 600 000 IU，VE 16 g，VK34 g，VB14 g，VB28 g，VB64.8 g，VB120.016 g，煙酸 nicotinic acid 28 g，泛酸鈣 calcium pantothenate 16 g，葉酸 folic acid 1.285 g，生物素 biotin 0.064 g，肌醇 inositol 40 g。

2)每千克礦物質(zhì)預(yù)混料含有One kilogram of mineral premix contained the following:Ca 230 g，K 36 g，Mg 9 g，F(xiàn)e 10 g，Zn 8 g，Mn 1.9 g，Cu 1.5 g，Co 0.25 g，I 0.032 g，Se 0.05 g。

3)營(yíng)養(yǎng)水平為實(shí)測(cè)值。Nutrient levels were measured values.

表2 試驗(yàn)飼料必需氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.3 試驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用鱸魚(yú)幼魚(yú)購(gòu)于福建詔安縣英港育苗場(chǎng)，購(gòu)回后暫養(yǎng)于廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所水產(chǎn)研究室的室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，水體的初始鹽度為3‰～0.5‰，每天用基礎(chǔ)飼料飽食投喂2次(09:00、16:00)，馴養(yǎng)2周，逐漸淡化至淡水養(yǎng)殖。養(yǎng)殖系統(tǒng)由18個(gè)容量為350 L(直徑80 cm，高70 cm)的圓柱形玻璃纖維缸組成，養(yǎng)殖實(shí)際水容量為300 L。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，挑選出體格健壯、大小均勻、平均體重為5.2 g的鱸魚(yú)幼魚(yú)540尾，分配于18個(gè)養(yǎng)殖缸中，每缸放養(yǎng)30尾。將18個(gè)養(yǎng)殖缸隨機(jī)分為6個(gè)組(每組3個(gè)重復(fù))，記為G0、G10、G20、G30、G40和G50組，分別投喂對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)飼料。每天飽食投喂2次(09:00和16:00)。每天記錄投飼量、死亡情況以及水溫和水質(zhì)情況。全天(24 h)不間斷曝氣，光照為自然光源，水溫25.0～30.0 ℃，pH 7.5～8.0，氨氮濃度<0.1 mg/L，溶氧濃度>7 mg/L。試驗(yàn)期為56 d。

1.4 樣品采集與分析

試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，挑選體重與試驗(yàn)用鱸魚(yú)幼魚(yú)的初始體重相近的鱸魚(yú)幼魚(yú)20尾，分析全魚(yú)的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食12 h后每缸試驗(yàn)魚(yú)分別稱重并統(tǒng)計(jì)數(shù)目。每缸隨機(jī)取3尾魚(yú)于-20 ℃冰箱中保存，用于全魚(yú)常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。每缸另隨機(jī)取9尾魚(yú)，尾靜脈取血，混合后于4 ℃下4 000 r/min離心10 min制備血漿樣品，保存于-80 ℃冰箱中，用于血漿生化指標(biāo)分析。每缸再隨機(jī)取6尾魚(yú)，用于形體指標(biāo)測(cè)定。每缸取4尾魚(yú)，分離出前腸、肝臟置于Bouin氏試液中固定，室溫保存，用于腸道、肝臟組織切片制作。

飼料和全魚(yú)樣品中水分含量采用105 ℃常壓干燥法(GB/T 6435—1986)、粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)、粗脂肪含量采用乙醚抽提法(GB/T 6432—1994)、粗灰分含量采用550 ℃灼燒法(GB/T 6438—1992)、鈣含量采用乙二胺四乙酸(EDTA)滴定法(GB/T 6436—2002)、總磷含量采用鉬黃比色法(GB/T6437—2002)進(jìn)行測(cè)定。飼料中總能采用氧彈量熱儀(IKA-C2000)進(jìn)行測(cè)定。血漿葡萄糖(glucose，GLU)、白蛋白(albumin，ALB)、球蛋白(globulin，GLOB)、尿素氮(urea nitrogen，UN)、膽固醇(cholesterol，CHOL)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)和甘油三酯(triglyceride，TG)含量采用日立全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。原料、飼料及全魚(yú)各氨基酸含量采用高效液相色譜儀(Agilent 1260，美國(guó))測(cè)定。

1.5 指標(biāo)計(jì)算

增重率(weight gain rate，WGR，%)=100×(終末均重-初始均重)/初始均重；特定生長(zhǎng)率(specific growth rate，SGR，%/d)=100×(ln終末均重-ln初始均重)/飼養(yǎng)天數(shù)；攝食量(feed intake，F(xiàn)I，g/尾)=投飼總量/[(初始尾數(shù)+終末尾數(shù))/2]；飼料系數(shù)(feed coefficient，F(xiàn)C)=投飼總量/(終末體重+死亡體重-初始體重)；蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio，PER，%)=100×(終末體重+死亡體重-初始體重)/攝入蛋白質(zhì)量；存活率(survival rate，SR，%)=100×終末尾數(shù)/初始尾數(shù)；肥滿度(condition factor，CF，g/cm3)=100×體重/體長(zhǎng)3；臟體比(viscerosomtic index，VSI，%)=100×內(nèi)臟重/體重；肝體比(hepatosomatic index，HSI，%)=100×肝臟重/體重。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(n=3)表示。采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)，若滿足正態(tài)分布和方差齊性則采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者再用Duncan氏法進(jìn)行多重比較；若不滿足方差齊性則采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，黑水虻幼蟲(chóng)粉替代不同比例的魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)的終末均重、增重率、特定生長(zhǎng)率、攝食量、蛋白質(zhì)效率、飼料系數(shù)、存活率均未產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)。隨著黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例的增加，鱸魚(yú)幼魚(yú)的臟體比和肝體比升高，G50組顯著高于G0組(P<0.05)。

表3 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)體組成和必需氨基酸含量的影響

由表4可知，黑水虻幼蟲(chóng)粉替代不同比例的魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)粗蛋白質(zhì)、粗灰分、水分、鈣和總磷含量均未產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)，但全魚(yú)粗脂肪含量隨著黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例的升高而升高，G20～G50組顯著高于G0組(P<0.05)。各組間鱸魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)各必需氨基酸含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)體組成和必需氨基酸含量的影響

1)濕重基礎(chǔ) Wet weight basis。

2)干重基礎(chǔ) Dry weight basis。

2.3 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)血漿生化指標(biāo)的影響

由表5可知，除G20組鱸魚(yú)幼魚(yú)血漿球蛋白含量顯著高于G0組(P<0.05)外，其他血漿生化指標(biāo)各替代組(G10～G50組)與G0組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)血漿生化指標(biāo)的影響

2.4 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

如圖1所示，G0組鱸魚(yú)幼魚(yú)肝細(xì)胞形態(tài)正常，無(wú)明顯病變，但隨著黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例的增加，肝細(xì)胞出現(xiàn)廣泛胞漿疏松、溶解或空泡狀，部分或大部分胞核消失。

2.5 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

由表6可知，G0組腸道絨毛長(zhǎng)度高于各替代組，且與G10和G40組的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)；與G0組相比，各替代組腸道絨毛寬度、固有層厚度以及杯狀細(xì)胞數(shù)均未發(fā)生顯著變化(P>0.05)，但有降低的趨勢(shì)；除G20組外，各替代組腸道肌層厚度均顯著低于G0組(P<0.05)。

3 討 論

3.1 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，黑水虻幼蟲(chóng)粉替代基礎(chǔ)飼料中50%的魚(yú)粉(黑水虻幼蟲(chóng)粉在基礎(chǔ)飼料中的添加量為27.8%，占飼料蛋白質(zhì)的23.7%)未對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)的終末均重、增重率、特定生長(zhǎng)率、攝食量、蛋白質(zhì)效率、飼料系數(shù)和存活率產(chǎn)生顯著影響。但是當(dāng)替代比例超過(guò)40%時(shí)，增重率、特定生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)效率最低，飼料系數(shù)最高，若在生產(chǎn)中以不影響生長(zhǎng)性能為衡量指標(biāo)，養(yǎng)殖8周時(shí)鱸魚(yú)幼魚(yú)對(duì)黑水虻幼蟲(chóng)粉的耐受量可以達(dá)到22.22%，占飼料蛋白質(zhì)的19.0%。Magalh?es等[19]研究發(fā)現(xiàn)，黑水虻預(yù)蛹粉可替代歐洲鱸魚(yú)基礎(chǔ)飼料中45%的魚(yú)粉，在基礎(chǔ)飼料中的適宜添加量為19.5%，占飼料蛋白質(zhì)的22.5%，略高于本試驗(yàn)的結(jié)果。推測(cè)這可能與試驗(yàn)所用的2種蟲(chóng)粉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不同有關(guān)，Magalh?es等[19]使用的黑水虻預(yù)蛹粉粗蛋白質(zhì)含量為55.8%，而本試驗(yàn)所用黑水虻幼蟲(chóng)粉粗蛋白質(zhì)含量為34.0%，略低于黑水虻預(yù)蛹粉。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，除了黑水虻幼蟲(chóng)或預(yù)蛹粗蛋白質(zhì)含量影響對(duì)魚(yú)粉的替代量外，基礎(chǔ)飼料配方中的魚(yú)粉用量，黑水虻幼蟲(chóng)或預(yù)蛹中賴氨酸、蛋氨酸、色氨酸等必需氨基酸含量以及幼蟲(chóng)或預(yù)蛹的適口性、抗?fàn)I養(yǎng)因子[16]等也會(huì)影響替代量的高低[19]。盡管Kroeckel等[16]在大菱鲆中使用的黑水虻預(yù)蛹粉的氨基酸組成與魚(yú)粉相近，Magalh?es等[19]等在歐洲鱸魚(yú)利用黑水虻預(yù)蛹粉替代魚(yú)粉時(shí)并未引起必需氨基酸的不足，但當(dāng)替代比例超過(guò)適宜水平后，試驗(yàn)動(dòng)物的正常生長(zhǎng)均受到影響。

肝細(xì)胞廣泛胞漿疏松、溶解或空泡狀，部分胞核消失，細(xì)胞界限不清，如黑色箭頭所示；肝竇擴(kuò)張，如黃色箭頭所示。

As indicated by the black arrow, the hepatic cells were loose, dissolved or vacuolated, and some of the nuclei disappeared; as indicated by the yellow arrow, the cell lines were not clear, hepatic sinus dilation.

圖1黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響(蘇木精-伊紅染色)

Fig.1 Effects of fish meal replacement by black soldier fly larvae meal on liver histological structure of juvenileLateolabraxjaponicas(HE staining, 400×)

隨著黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例的增加，鱸魚(yú)幼魚(yú)的臟體比和肝體比升高，50%替代組顯著高于對(duì)照組，而Li等[18]使用脫脂黑水虻蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉時(shí)并未發(fā)現(xiàn)對(duì)幼建鯉的肝體比和臟體比產(chǎn)生顯著影響。Catacutan等[20]研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)類肝體比和飼料脂肪水平呈顯著正相關(guān)，因此，這可能與本試驗(yàn)使用的黑水虻幼蟲(chóng)粉未經(jīng)脫脂處理，隨著黑水虻幼蟲(chóng)粉添加量的增加，飼料粗脂肪含量增加有關(guān)。

3.2 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)體組成和必需氨基酸含量的影響

研究表明，虹鱒和大菱鲆的體脂肪含量隨著黑水虻預(yù)蛹粉添加量的增加而降低[9,16]，同樣，Li等[18]使用脫脂黑水虻蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉時(shí)也發(fā)現(xiàn)幼建鯉肝臟中的脂肪含量顯著降低。St-Hilaire等[9]認(rèn)為黑水虻預(yù)蛹粉替代魚(yú)粉時(shí)飼料魚(yú)油和粗脂肪含量的下降導(dǎo)致虹鱒體脂肪沉積的減少，Kroeckel等[16]認(rèn)為是由于采食量的降低引起了脂肪和能量的攝入不足，同時(shí)上述2個(gè)試驗(yàn)都發(fā)現(xiàn)飼料脂肪水平的變化引起飼料脂肪酸組成的差異，進(jìn)而影響了試驗(yàn)動(dòng)物肌肉脂肪酸的沉積[9,16]。Li等[18]則認(rèn)為是昆蟲(chóng)中的幾丁質(zhì)影響了幼建鯉肝臟脂肪酸的分解和合成。而在本試驗(yàn)中，隨著黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例的增加，飼料中粗脂肪含量升高，全魚(yú)粗脂肪含量增加，這可能是由于本試驗(yàn)使用的黑水虻幼蟲(chóng)粉未經(jīng)脫脂處理(粗脂肪含量高達(dá)37.5%)，當(dāng)黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例的增加時(shí)飼料粗脂肪含量隨之升高，從而導(dǎo)致魚(yú)體脂肪沉積增加。研究發(fā)現(xiàn)飼料中的粗脂肪含量超過(guò)鱸魚(yú)需要量(7.4%～9.9%)時(shí)，鱸魚(yú)全魚(yú)和肝臟脂肪含量隨著飼料粗脂肪含量的升高而升高[21]；同樣，高脂飼料使大口黑鱸全魚(yú)、肌肉、肝臟的脂肪蓄積明顯增加[22]。因此，飼料粗脂肪含量的增加是引起鱸魚(yú)體脂肪沉積增加的重要原因之一。黑水虻幼蟲(chóng)粉替代不同比例魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量未產(chǎn)生顯著影響，這與在虹鱒[9]、大菱鲆[16]和幼建鯉[18]中得到的研究結(jié)果一致。Magalh?es等[19]發(fā)現(xiàn)黑水虻預(yù)蛹粉能夠提高歐洲鱸魚(yú)對(duì)飼料中精氨酸和組氨酸的消化率，但其未對(duì)歐洲鱸魚(yú)肌肉氨基酸組成進(jìn)行研究。Hu等[23]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉比例超過(guò)10%時(shí)，降低了黃顙魚(yú)對(duì)飼料中精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸等必需氨基酸的表觀消化率，除蛋氨酸和苯丙氨酸外，黃顙魚(yú)肌肉中其他必需氨基酸含量差異不顯著。而Santos[24]在對(duì)虹鱒的研究中發(fā)現(xiàn)黑水虻替代魚(yú)粉影響了飼料氨基酸組成，虹鱒魚(yú)肌肉中賴氨酸、精氨酸、蛋氨酸含量出現(xiàn)顯著差異。但本試驗(yàn)中黑水虻幼蟲(chóng)粉替代不同比例的魚(yú)粉未對(duì)鱸魚(yú)全魚(yú)必需氨基酸組成產(chǎn)生顯著影響。

3.3 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)血漿生化指標(biāo)的影響

已有研究發(fā)現(xiàn)黑水虻替代魚(yú)粉降低了歐洲鱸魚(yú)[19]和幼建鯉[18]血漿膽固醇的含量，但本試驗(yàn)中各組血漿膽固醇含量無(wú)顯著差異。已有研究表明黑水虻預(yù)蛹中含有較高的幾丁質(zhì)多糖，幾丁質(zhì)多糖能夠抑制膽固醇的吸收，增加肝內(nèi)脂蛋白和甘油三酯的水解及膽汁酸的排泄[19,25-27]。雖然在某些魚(yú)類中發(fā)現(xiàn)了幾丁質(zhì)酶活性，但相對(duì)于大部分魚(yú)類來(lái)說(shuō)幾丁質(zhì)酶活性依然較低[16,28]，同時(shí)研究還推測(cè)黑水虻預(yù)蛹中膽固醇含量低于魚(yú)粉導(dǎo)致替代飼料中膽固醇含量的降低也可能是引起幼建鯉[18]血漿膽固醇的含量低的原因，飼料中膽固醇含量直接影響?zhàn)B殖動(dòng)物血液膽固醇含量[29-30]。文遠(yuǎn)紅等[31]也發(fā)現(xiàn)蠅蛆粉替代魚(yú)粉使黃顙魚(yú)血清膽固醇含量降低。本試驗(yàn)中各替代組血漿中甘油三酯含量與對(duì)照組無(wú)顯著差異，因此黑水虻幼蟲(chóng)中幾丁質(zhì)多糖或者是膽固醇含量是否如影響歐洲鱸魚(yú)[19]和幼建鯉[18]一樣會(huì)影響鱸魚(yú)膽固醇和甘油三酯的代謝還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。當(dāng)血漿白蛋白和球蛋白含量升高時(shí)，會(huì)增加機(jī)體免疫紊亂、肝功能障礙和腎功能受損相關(guān)疾病的發(fā)生率[24,32]。Li等[18]發(fā)現(xiàn)幼建鯉血漿白蛋白和球蛋白含量不受黑水虻預(yù)蛹替代量的影響，黑水虻預(yù)蛹的使用可能不影響幼建鯉的免疫系統(tǒng)。本試驗(yàn)中，除20%替代組血漿白蛋白含量高于對(duì)照組外，其他替代組與對(duì)照組相比差異不顯著。

3.4 黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)肝臟和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

本試驗(yàn)中，增加黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉的比例對(duì)鱸魚(yú)肝臟細(xì)胞產(chǎn)生了一定的損傷。Li等[18]發(fā)現(xiàn)脫脂黑水虻蟲(chóng)粉使幼建鯉脂肪肝細(xì)胞數(shù)量減少，Belforti等[33]也發(fā)現(xiàn)隨著黃粉蟲(chóng)粉含量的增加，虹鱒組織切片中脂肪含量下降，推測(cè)可能與昆蟲(chóng)含有較高的幾丁質(zhì)有關(guān)，幾丁質(zhì)影響了脂肪酸的合成[26-27]。但文遠(yuǎn)紅等[31]發(fā)現(xiàn)，隨著蠅蛆粉替代魚(yú)粉比例的增加，黃顙魚(yú)肝胰臟脂肪變性加重，認(rèn)為是飼料中n-3系列多不飽和脂肪酸含量和n-3/n-6值的變化引起了肝臟組織結(jié)構(gòu)的異常，隨著蠅蛆粉替代魚(yú)粉比例的增加，飼料中n-3系列多不飽和脂肪酸含量逐漸降低，n-3/n-6值逐漸降低。雖然本試驗(yàn)未對(duì)試驗(yàn)飼料的脂肪酸組成進(jìn)行分析，但對(duì)黑水虻幼蟲(chóng)脂肪酸組成分析發(fā)現(xiàn)，黑水虻幼蟲(chóng)飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸含量較高[34]。Schiavone等[35]發(fā)現(xiàn)黑水虻通常會(huì)對(duì)肉類產(chǎn)品的脂肪酸組成產(chǎn)生負(fù)面影響，結(jié)果導(dǎo)致多不飽和脂肪含量降低或單不飽和脂肪含量增加。因此，飼料多不飽和脂肪酸組成的變化可能是引起鱸魚(yú)肝臟細(xì)胞損傷的原因之一。

腸道是魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所，正常的腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)是保證魚(yú)類正常生長(zhǎng)的基礎(chǔ)。Li等[18]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)脫脂黑水虻蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉的量超過(guò)75%時(shí)，幼建鯉腸道的完整性遭到破壞；文遠(yuǎn)紅等[31]利用蠅蛆粉替代魚(yú)粉，當(dāng)替代量超過(guò)80%時(shí)，黃顙魚(yú)腸道的完整性和形態(tài)結(jié)構(gòu)造出現(xiàn)明顯損傷。本試驗(yàn)中，增加黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉的比例對(duì)絨毛長(zhǎng)度和肌層厚度產(chǎn)生了負(fù)面影響，說(shuō)明增加黑水虻幼蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉的比例會(huì)對(duì)腸道造成損傷，昆蟲(chóng)體內(nèi)存在的某些抗?fàn)I養(yǎng)因子如幾丁質(zhì)等是影響腸道健康的主要因素。

4 結(jié) 論

經(jīng)過(guò)8周養(yǎng)殖，黑水虻幼蟲(chóng)粉替代基礎(chǔ)飼料中50%的魚(yú)粉(在基礎(chǔ)飼料中黑水虻幼蟲(chóng)粉的添加量為27.8%，占飼料蛋白質(zhì)的23.7%)對(duì)鱸魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，但高替代比例會(huì)使魚(yú)體脂肪沉積增加，肝臟組織出現(xiàn)病變，腸道結(jié)構(gòu)發(fā)育受損。

[1] OONINCX D G A B,DE BOER I J M.Environmental impact of the production of mealworms as a protein source for humans-a life cycle assessment[J].PLoS One,2012,7(12):e51145.

[2] VAN HUIS A.Potential of insects as food and feed in assuring food security[J].Annual Review of Entomology,2013,58(1):563-583.

[3] MAY B M.The occurrence in New Zealand and the life-history of the soldier flyHermetiaillucens(L.) (Diptera:Stratiomyidae)[J].New Zealand Journal of Science,1961,4:55-65.

[4] SHEPPARD C.House fly and lesser fly control utilizing the black soldier fly in manure management systems for caged laying hens[J].Environmental Entomology,1983,12(5):1439-1442.

[5] NEWTON L,SHEPPARD C,WATSON D S,et al.Using the black soldier fly,Hermetiaillucens,as a value-added tool for the management of swine manure[R].Animal and Poultry Raleigh,NC:Waste Management Center,North Carolina State University,2005.

[6] LALANDER C,DIENER S,MAGRI M E,et al.Faecal sludge management with the larvae of the black soldier fly (Hermetiaillucens)-from a hygiene aspect[J].Science of the Total Environment,2013,458-460:312-318.

[7] SHEPPARD D C.Using soldier flies as a manure management tool for volume reduction,housefly control and feedstuff production[J].Journal of French Language Studies,1995,24(4):f1-f4.

[8] NEWTON G L,SHEPPARD D C,WATSON D W,et al.The black soldier fly,Hermetiaillucens,as a manure management/resource recovery tool[C]//Proceedings of the Symposium on the State of the Science of Animal Manure and Waste Management.San Antonio,Texas,USA,2005.

[9] ST-HILAIRE S,SHEPPARD C,TOMBERLIN J K,et al.Fly prepupae as a feedstuff for rainbow troutOncorhynchusmykiss[J].Journal of the World Aquaculture Society,2007,38(1):59-67.

[10] BONDARI K,SHEPPARD D C.Soldier fly larvae as feed in commercial fish production[J].Aquaculture,1981,24:103-109.

[11] RANA K M S,SALAM M A,HASHEML S,et al.Development of black soldier fly larvae production technique as an alternate fish feed[J].International Journal of Research in Fisheries and Aquaculture,2015,5(1):41-47.

[12] HEM S,TOURE S,SAGBLA C,et al.Bioconversion of palm kernel meal for aquaculture:experiences from the forest region (Republic of Guinea)[J].African Journal of Biotechnology,2008,7(8):1192-1198.

[13] ADENIYI,VICTORIA O,FOLORUNSHO,et al.Performance ofClariasgariepinus(Burchell,1822) fed dietary levels of black soldier fly,Hermetiaillucens(Linnaeus,1758) prepupae meal as a protein[J].International Journal of Research in Fisheries and Aquaculture,2015,5(3):89-93.

[14] SEALEY W M,GAYLORD T G,BARROWS F T,et al.Sensory analysis of rainbow trout,Oncorhynchusmykiss,fed enriched black soldier fly prepupae,Hermetiaillucens[J].Journal of the World Aquaculture Society,2011,42(1):34-45.

[15] STAMER A,WESSLESS S,NEIDIGK R,et al.Black soldier fly (Hermetiaillucens) larvae meal as an example for a new feed ingredients class in aquaculture diets[C]//Proceeding of the 4th Isofar Scientific Conference:Building Organic Bridges at the Organic World Congress.Islanbul,Turkey,2014.

[16] KROECKEL S,HARJES A G E,ROTH I,et al.When a turbot catches a fly:evaluation of a pre-pupae meal of the black soldier fly (Hermetiaillucens) as fish meal substitute—growth performance and chitin degradation in juvenile turbot (Psettamaxima)[J].Aquaculture,2012,364/365:345-352.

[17] CUMMINS V C,Jr,RAWLES S D,THOMPSON K R,et al.Evaluation of black soldier fly (Hermetiaillucens) larvae meal as partial or total replacement of marine fish meal in practical diets for Pacific white shrimp (Litopenaeusvannamei)[J].Aquaculture,2017,473:337-344.

[18] LI S L,JI H,ZHANG B X,et al.Defatted black soldier fly (Hermetiaillucens) larvae meal in diets for juvenile Jian carp (Cyprinuscarpiovar. Jian):growth performance,antioxidant enzyme activities,digestive enzyme activities,intestine and hepatopancreas histological structure[J].Aquaculture,2017,477:62-70.

[20] CATACUTAN M R,COLOSO R M.Growth of juvenile Asian seabass,Latescalcarifer,fed varying carbohydrate and lipid levels[J].Aquaculture,1997,149(1/2):137-144.

[21] XU H G,DOU B SH,ZHENG K K,et al.Lipid Requirements in growing Japanese seabass (Lateolabraxjaponicus) of two different sizes[J].The Israeli Journal of Aquaculture-Bamidgeh,2015,67:1151.

[22] 陳乃松,肖溫溫,梁勤朗,等.飼料中脂肪與蛋白質(zhì)比對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)、體組成和非特異性免疫的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2012,36(8):1270-1280.

[23] HU J R,WANG G X,HUANG Y H,et al.Effects of the substitution of fish meal with black soldier fly (Hermetiaillucens) larvae meal in yellow catfish (Pelteobagrusfulvidraco) diets[J].The Israeli Journal of Aquaculture-Bamidgeh,2017,69:1382.

[24] SANTOS A F B D.Evaluation of the potential of prepupae meal of black soldier fly (Hermetiaillucens) as potential ingredient for Rainbow trout (Oncorhynchusmykiss):effect on flesh quality[D].Firenze：Faculdade de Ciências da Universidade do Porto,Università degli Studi di Firenze,2016.

[25] KHOUSHAB F,YAMABHAI M.Chitin research revisited[J].Marine Drugs,2010,8(7):1988-2012.

[26] ZHANG J L,LIU J N,LI L,et al.Dietary chitosan improves hypercholesterolemia in rats fed high-fat diets[J].Nutrition Research,2008,28(6):383-390.

[27] LI Q P,GOONERATNE S R,WANG R L,et al.Effect of different molecular weight of chitosans on performance and lipid metabolism in chicken[J].Animal Feed Science and Technology,2016,211:174-180.

[28] ABRO R,SUNDELL K,SANDBLOM E,et al.Evaluation of chitinolytic activities and membrane integrity in gut tissues of Arctic charr (Salvelinusalpinus) fed fish meal and zygomycete biomass[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part B:Biochemistry and Molecular Biology,2014,175:1-8.

[29] KAUSHIK S J,CRAVEDE J P,LALLES J P,et al.Partial or total replacement of fish meal by soybean protein on growth,protein utilization,potential estrogenic or antigenic effects,cholesterolemia and flesh quality in rainbow trout,Oncorhynchusmykiss[J].Aquaculture,1995,133(3/4):257-274.

[30] GOULDING N J,GIBNEY M J,TAYLOR T G,et al.Reversible hypercholesterolaemia produced by cholesterol-free fish meal protein diets[J].Atherosclerosis,1983,49(2):127-137.

[31] 文遠(yuǎn)紅,黃燕華,王國(guó)霞,等.蠅蛆粉替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)抗氧化指標(biāo)、消化酶活性及前腸、肝胰臟組織結(jié)構(gòu)的影響[J].飼料工業(yè),2015,36(4):29-35.

[32] JOHN P J.Alteration of certain blood parameters of freshwater teleostMystusvittatusafter chronic exposure to Metasystox and Sevin[J].Fish Physiology and Biochemistry,2007,33(1):15-20.

[33] BELFORTI M,GAI F,LUSSIANA C,et al.Tenebriomolitormeal in rainbow trout (Oncorhynchusmykiss) diets:effects on animal performance,nutrient digestibility and chemical composition of fillets[J].Italian Journal of Animal Science,2015,14(4):670-676.

[34] 胡俊茹,何飛,莫文艷,等.采食不同有機(jī)廢棄物黑水虻幼蟲(chóng)飼料價(jià)值分析[J].中國(guó)飼料,2017(15):24-27.

[35] SCHIAVONE A,CULLERE M,DE MARCO M,et al.Partial or total replacement of soybean oil by black soldier fly larvae (HermetiaillucensL.) fat in broiler diets:effect on growth performances,feed-choice,blood traits,carcass characteristics and meat quality[J].Italian Journal of Animal Science,2017,16(1):93-100.