南燭葉總黃酮微乳凝膠的制備

王章姐，劉自平，許 燕，王 娟

（安徽新華學院 藥學院，安徽 合肥 230088）

南燭（Vaccinium bracteatum Thunb）又名烏飯樹，是杜鵑花科越橘屬植物，南燭葉是烏飯樹的葉子，南燭葉中含有含卅一烷、無羈萜、表無羈萜醇、槲皮素、異葒草素、對-羥基桂皮酸、等多種化學成分，據(jù)《本草新編》記載，南燭葉具有益精氣，強筋骨，明目，止泄之功效.魯植雄等[1]研究發(fā)現(xiàn)南燭葉中總黃酮類總含量約11.64%，其中槲皮素含量達3.52%，可以用于抗衰老、抗氧化、美白、補水化妝品的原料，具有巨大的應用前景.微乳（micro emulsion，ME）水、油、乳化劑、助乳化劑按恰當?shù)谋壤靹蛐纬傻木?、澄清、熱力學穩(wěn)定的乳液[2-4]，作為載藥體應無毒、無刺激、對人體無損害，且有良好的生物相容性等.研究表明[5]，微乳具有增加藥物溶解度、促進吸收、提高藥物穩(wěn)定性、延長藥物作用時間、維持恒定血藥濃度等特點.凝膠具有較好的生物粘附性，將載藥微乳與凝膠基質(zhì)結(jié)合，制備成新劑型微乳凝膠[6]，可增加藥物的生物利用度及藥物的穩(wěn)定性，延長藥物的作用時間，進一步使血藥濃度更加穩(wěn)定，同時克服微乳因長久水分的流失表面活性劑濃度增高，刺激性強等缺點，滿足緩控釋方便給藥的要求[7].微乳凝膠（micro emulsion-based gels，MEGS）是將微乳與凝膠基質(zhì)結(jié)合，形成透明、均一、穩(wěn)定的體系[8].有著較好的生物相容性及穩(wěn)定性，易清洗不污染衣物，可作為易揮發(fā)、難溶于水藥物的新載體.本研究將南燭葉總黃酮制成微乳凝膠，為更好制備臨床新劑型奠定基礎.

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

南竹葉總黃酮（實驗室自提）；蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100080-201418）；聚山梨酯80（天津市光復精細化工研究所）；油酸乙酯（上海源葉生物科技有限公司）；聚乙二醇400（PEG 400，上海源葉生物科技有限公司）；丙三醇(天津市百世化工有限公司)；卡波姆940、三乙醇胺（國藥集團制藥有限公司）.大豆油為超市購買；乙醇等其余試劑均為分析純.

1.2 儀器

DF-101S型智能集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南省予華儀器有限公司）；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；Autoscience AS3120超聲波清洗機（奧特賽恩斯儀器有限公司）；UV-2550紫外-可見分光光度儀（日本島津公司）；BT125D電子分析天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）：DZF1.0型真空干燥箱（上海長源儀器設備廠）；CP2115D電子天平（Satorius公司）；DF-101Z型熱式加熱攪拌器（常州普儀器制備有限公司）.

1.3 方法

1.3.1 南竹葉總黃酮溶解度的測定 取3支西林瓶，洗凈干燥，備用，分別稱取約2g不同油相、乳化劑和助乳化劑置于瓶中，加入過量的南燭葉總黃酮，攪拌后超聲30min，以促進各相溶解，在37℃水浴中平衡48h，4000r/min離心25min，用0.45μm的微孔濾膜濾過上清液，取續(xù)濾液用甲醇稀釋至適宜倍數(shù)，作為供試品溶液.分別精密吸取供試品20 μL，以上述HPLC法測定，記錄峰面積，計算相應成分在不同介質(zhì)中的溶解度.

1.3.2 南竹葉總黃酮微乳凝膠的制備 取南燭葉總黃酮、乳化劑、助乳化劑，精密稱定，依次加入帶塞錐形瓶中，于37℃水浴中溶解，混勻.再精密稱定油相，加入上述錐形瓶中，混勻，在恒溫磁力攪拌器下在該混合物中滴加蒸餾水，并不停攪拌使其乳化，得到南燭葉總黃酮微乳.再加入卡波姆-940，放置過夜使其自然膨脹，繼續(xù)加入丙三醇，滴加三乙醇胺溶液調(diào)節(jié)pH值，得南燭葉總黃酮微乳凝膠.

1.3.3 南燭葉總黃酮微乳飽和載藥量的測定 取制備好的空白微乳，加入過量的南燭葉總黃酮，于60℃水浴中攪拌，以促進南燭葉總黃酮的溶解，再在37℃水浴中平衡48h，4000r/min離心25min，用0.45μm的微孔濾膜濾過上清液，取續(xù)濾液用甲醇稀釋至適宜倍數(shù)，采用HPLC測定南燭葉總黃酮含量，計算飽和載藥量.

1.3.4 偽三元相圖初步篩選 將已確定的乳化劑與助乳化劑按不同質(zhì)量比Km值 (3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3) 混勻后，再與油相按 1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1 的比例混合，滴加水相中至形成澄清透明溶液或帶有藍色乳光溶液，采用origin 9.0程序繪制偽三元相圖，以相圖中微乳存在區(qū)域的大小來篩選助乳化劑和乳化劑.

1.3.5 正交試驗設計優(yōu)化處方 以卡波姆940含量（因素a）、丙三醇含量（因素b）和pH值（因素c）為考察因素，以涂抹性、油膩性、粘稠度與外觀性狀為評價指標，見表1、2，每個指標各占2.5分，分析綜合評分.

表1 各指標評分標準

表2 因素水平表

2 結(jié)果與分析

2.1 南竹葉總黃酮在不同介質(zhì)中溶解度的測定

由表2可知南竹葉總黃酮在不同油相中油酸乙酯中的溶解度明顯大于大豆油，故選擇油相為油酸乙酯.不同乳化劑中南竹葉總黃酮在聚山梨酯80的溶解度最大，在不同助乳化劑中的溶解度PEG 400明顯大于丙三醇，故乳化劑初步確定為聚山梨酯80，助乳化劑初步確定為PEG 400.

表3 南竹葉總黃酮在不同介質(zhì)中的溶解度

2.2 偽三元相圖初步篩選處方

對已確定的微乳各相組分，乳化劑、助乳化劑按質(zhì)量比（Km）1:3、1:2、1:1、2:1、3:1；上述比例混合均勻在與油相油酸乙酯按質(zhì)量比9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9 混勻，固定乳化劑、助乳化劑和油相的總質(zhì)量為1.0g.在37℃水浴磁力攪拌器下逐滴加水至澄清透明溶液或帶有少許藍色乳光的溶液的臨界點各項比例，以聚山梨酯80、PEG400混合乳化劑為1個頂點，水相和油相為剩下2個頂點，用Origi8.0軟件繪制偽三元相圖進一步確定體系中微乳形成的區(qū)域，如圖1篩選出空白微乳處方.由偽三元相圖結(jié)果可知，當質(zhì)量比Km值大于2:1時，隨著Km值的增大微乳區(qū)縮小，Km小于2時隨著Km的增大微乳區(qū)增大，Km等于2時，微乳區(qū)域最大，故選擇聚山梨酯80與PEG400的質(zhì)量比Km值為2.

圖1 不同Km值的偽三元相圖

2.3 正交試驗設計優(yōu)化凝膠處方

采用L9(34)因素水平表進行正交設計實驗，以空白凝膠基質(zhì)涂抹性、油膩性、粘稠度與外觀性狀為參考指標，見表.每個指標各占2.5分，分析綜合評分，篩選空白凝膠的最佳處方.

表4 凝膠處方篩選正交設計表L9(34)

表5 凝膠處方篩選方差分析

根據(jù)表4、表5，確定空白凝膠基質(zhì)的最佳處方為卡波姆940用量0.5%，丙三醇用量5%，三乙醇胺溶液調(diào)節(jié)pH至6.0.

3 結(jié)語

在微乳處方篩選中，通過測定南竹葉總黃酮溶解度，可以看出在油酸乙酯中南燭葉總黃酮溶解度仍然最大；南燭葉在不同乳化劑中聚山梨酯80的溶解度較好；而在助乳化劑PEG 400中溶解度最大.

通過偽三元相圖考察乳化劑、助表乳化劑在不同比例下對形成微乳區(qū)域大小影響，通過實驗結(jié)果，在一定的范圍內(nèi)，乳化劑的用量增加，所形成的微乳區(qū)域也越大，但超出一定范圍時乳化劑用量增加，微乳區(qū)域反而減小.本研究通過考察藥物溶解度的大小并結(jié)合偽三元相圖對微乳處方進行篩選和優(yōu)化，最終確定最佳的微乳最佳處方.

本實驗通過正交試驗設計篩選空白凝膠基質(zhì)，得到最優(yōu)處方：卡波姆940用量為0.5%，丙三醇用量為5%，三乙醇胺溶液調(diào)節(jié)pH至6.0.

〔1〕魯植雄，江水泉.超臨界CO2萃取南燭葉有效成分的色譜分析 [J].南京農(nóng)業(yè)大學學報，1998,22（1）：101-103.

〔2〕Sable V Vera S.Formulation and evaluation of micro emulsion-based hydrogen for topical delivery[J].Int J PharmInvest,2012,2(3)：140-149.

〔3〕黨翔吉,魏立明,韓珊珊,等.復方梔子凝膠的處方工藝研究[J].中草藥,2013,44(22)：2982-2987.

〔4〕祝雨薇,蔣曙光,周建平.尹曲康唑溫敏乳凝膠的研制[J].中國新藥雜志,2013,22(16)：1942-1947.

〔5〕姚娜,黃慶德.中藥微乳凝膠劑的研究進展[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2013,37(2)：217-219.

〔6〕Xian Sha,Xiao Wang.Transdermalmicro emulsion drug deliversystem forimpairing male reproductive toxicity and enhancing efficacy of Tripterygium Welford Hook [J].Fitoterapia,2012,83(4)：690-698.

〔7〕謝明華.利多卡因微乳凝膠外用制劑的制備及藥效學評價[J].中國現(xiàn)代應用藥學,2015,4(6)：68-70.

〔8〕趙振宇,孫浩.微乳凝膠新制劑的研究進展[J].中國醫(yī)藥學雜志,2014,34(5)：411-413.