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    乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)維生素B1和B6的研究

    2018-03-06 08:38:48常若毅呂嘉櫪余芳
    中國調(diào)味品 2018年2期
    關(guān)鍵詞:油麥萵筍芹菜

    常若毅,呂嘉櫪,余芳

    (陜西科技大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院,西安 710021)

    維生素是動(dòng)物體和人類生命活動(dòng)所必需的一類物質(zhì),當(dāng)機(jī)體從外界攝取的維生素不能滿足其生命活動(dòng)的需要時(shí),就會(huì)引起新陳代謝功能的紊亂,導(dǎo)致生病甚至死亡[1]。維生素B1和維生素B6作為食品添加劑,同時(shí)又是營養(yǎng)強(qiáng)化劑,在調(diào)味品行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用[2]。

    國內(nèi)在乳酸菌產(chǎn)B族維生素方面的研究有報(bào)道,其中鄧麗、李龍柱、肖平等[3-5]研究表明定植于腸道中的益生菌能產(chǎn)生VB1,VB2,VB6等各種維生素;張開屏、李俊芳等[6,7]篩選鑒定了保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌等乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)VB6和VB12,其中VB6可達(dá)32.62 g/100 L。國外Le Blanc等[8]研究發(fā)現(xiàn)乳酸乳球菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸性乳酸等為發(fā)酵劑時(shí),增加了葉酸和視黃醇的產(chǎn)量;Hou等[9]研究表明雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌ST5、瑞士乳酸桿菌R0052為發(fā)酵劑時(shí),提高了維生素B1的含量; Champagne等[10]研究發(fā)現(xiàn)

    乳酸菌發(fā)酵豆奶,維生素B1或B6含量沒有明顯變化。

    本文研究的是乳酸菌代謝產(chǎn)維生素。試驗(yàn)選用10株乳酸菌分別在MRS肉湯培養(yǎng)基、鮮牛乳培養(yǎng)基和蔬菜汁培養(yǎng)基中培養(yǎng),研究它們在發(fā)酵過程中B1和B6的產(chǎn)量。對B族維生素進(jìn)行粗提等一系列操作,進(jìn)一步為復(fù)合維生素的食品添加劑和營養(yǎng)強(qiáng)化劑的研制提供理論和技術(shù)依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

    1.1 供試菌種

    保加利亞乳桿菌(Lactobacillusbulgaricus,LB)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus,LA)、植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum,LP)、乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis,BL)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus,LCR)、副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei,LCP)、糞鏈球菌 (Streptococcusfaecalis,SF)、嗜熱鏈球菌 (Streptococcusthermophilus,ST)、干酪乳桿菌 (Lactobacilluscasei,LC)、羅伊氏乳桿菌 (Lactobacillusreuteri,LR),由陜西科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院微生物研究室提供。

    1.2 試驗(yàn)原料

    油麥菜、萵筍、芹菜、荸薺、菊芋,市售;鮮牛乳,市售,鮮牛乳符合國家標(biāo)準(zhǔn)[11]。

    1.3 試劑藥品

    甲醇(色譜純)、VB1標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純)、VB6標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純)、磷酸二氫鉀(分析純)、鹽酸(分析純)、氫氧化鈉(分析純)。

    1.4 培養(yǎng)基配制

    1.4.1 MRS液體培養(yǎng)基

    牛肉膏 10 g,磷酸氫二鉀 2 g,蛋白胨 10 g,乙酸鈉 5 g,葡萄糖 20 g,檸檬酸二銨 2 g,酵母浸粉 5 g,七水硫酸鎂 0.58 g,硫酸錳 0.25 g,吐溫-80 1 mL,蒸餾水 1000 mL。

    1.4.2 鮮牛乳培養(yǎng)基

    將鮮牛乳分裝入?yún)捬豕苤?,每管裝15 mL左右,置于高壓滅菌鍋中滅菌,115 ℃滅菌15 min,冷卻至室溫。

    1.4.3 蔬菜培養(yǎng)基

    分別選取5種蔬菜,除去雜物,徹底清洗干凈,使蔬菜和水的比例是2∶1,用打漿機(jī)榨汁,過100目篩,115 ℃滅菌15 min,備用。

    1.5 儀器設(shè)備

    1525-2487型高效液相色譜儀 美國Waters公司;DM750型LEICA數(shù)碼顯微鏡 北京瑞科中儀科技有限公司;QSX-280B型手提式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠;PHS-3C型pH計(jì) 北京賽多利斯天平有限公司;HC-3018R型高速冷凍離心機(jī) 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;SW-CJ-1D型單人凈化工作臺 蘇州凈化設(shè)備有限公司;DH-360型電熱恒溫培養(yǎng)箱 北京科偉永興儀器有限公司。

    1.6 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及方法

    1.6.1 菌種活化

    將MRS液體培養(yǎng)基分裝入?yún)捬豕苤?,每管裝15 mL左右,置于高壓滅菌鍋中滅菌121 ℃,15 min,冷卻至室溫。然后接入菌種,置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。將火化后的菌種放于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.6.2 10株乳酸菌在MRS培養(yǎng)基中產(chǎn)VB1和VB6的研究

    10株乳酸菌按1%的接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中,在37 ℃條件下靜置培養(yǎng)48 h時(shí),離心,取上清液,測定VB1和VB6含量。

    1.6.3 10株乳酸菌發(fā)酵鮮乳產(chǎn)VB1和VB6的研究

    10株乳酸按1%的接種量接種到鮮牛乳培養(yǎng)基中,在37 ℃下靜置培養(yǎng)至凝乳,離心,取上清液,測定VB1和VB6含量。

    1.6.4 10株乳酸菌發(fā)酵不同蔬菜產(chǎn)VB1和VB6的研究

    10株乳酸菌按1%的接種量接種到不同的蔬菜中,在37 ℃下靜置培養(yǎng)48 h,離心,取上清液,進(jìn)行測定VB1和VB6含量。

    1.7 VB1和VB6測定方法

    VB1和VB6的測定采用高效液相色譜法[12]。

    1.7.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

    準(zhǔn)確稱取VB1和VB6標(biāo)準(zhǔn)品各0.010 g于10 mL容量瓶中,用0.1 mol/L鹽酸溶解并定容至刻度,配成質(zhì)量濃度均為1 g/L的VB1和VB6標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

    1.7.2 色譜條件

    色譜柱:C18(配有紫外檢測器),流動(dòng)相:0.05 mol/L KH2PO4(pH 6.0)-甲醇(體積比85∶15),流速:1.0 mL/min,柱溫:30 ℃,波長:265 nm,進(jìn)樣量:20 μL。

    1.7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    分別配制質(zhì)量濃度為10~50 mg/L的2種維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液,在b所述的條件下進(jìn)樣測定,得到2種維生素的峰面積A與質(zhì)量濃度C(mg/L)的線性關(guān)系。

    1.7.4 樣品處理

    取5 mL發(fā)酵液,并加入40 mL的0.1 mol/L鹽酸超聲混合均勻。再用0.1 mol/L鹽酸定容至50 mL,超聲混勻后,靜置,離心后取上清液,獲得VB1和VB6的提取液,提取液過0.45 μm水系濾膜后上機(jī)測定。

    1.7.5 標(biāo)準(zhǔn)品圖譜

    VB1和VB6標(biāo)準(zhǔn)品在上述色譜條件下進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。

    圖1 50 mg/L VB1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖

    圖2 50 mg/L VB6標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖

    由圖1和圖2可知,在上述色譜條件下VB1的保留時(shí)間為2.804 min。VB6的保留時(shí)間為5.088 min。取VB1和VB6的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,分別配制10~50 mg/L質(zhì)量濃度梯度的2種B族維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液,在色譜條件下分別測定,選取以B族維生素濃度C(mg/L)為橫坐標(biāo)、以峰面積A為縱坐標(biāo)線性回歸,獲得回歸方程,見表1。

    表1 VB1和VB6 的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍

    1.7.6 VB1和VB6混標(biāo)譜圖

    圖3 VB1和VB6混合標(biāo)準(zhǔn)液高效液相色譜圖

    2 結(jié)果與討論

    2.1 10株乳酸菌發(fā)酵MRS培養(yǎng)基VB1和VB6含量

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到MRS培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖4。

    圖4 10株乳酸菌發(fā)酵MRS培養(yǎng)基 VB1和VB6的含量

    由圖4可知,10株乳酸菌發(fā)酵MRS培養(yǎng)基均產(chǎn)生VB1和VB6。其中,10株乳酸菌發(fā)酵液中VB1濃度在1.02~2.37 mg/L之間,VB6濃度在0.35~5.32 mg/L之間。ST發(fā)酵產(chǎn)VB1最大,為2.37 mg/L;LA發(fā)酵產(chǎn)VB6最大,為5.32 mg/L。

    2.2 10株乳酸菌發(fā)酵乳VB1和VB6含量

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到鮮乳培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖5。

    圖5 10株乳酸菌發(fā)酵乳VB1和VB6的含量

    由圖5可知,10株乳酸菌發(fā)酵乳中均產(chǎn)生VB1和VB6。其中,發(fā)酵乳中VB1濃度在0.32~1.38 mg/L之間,VB6濃度在0.56~2.85 mg/L之間。LC發(fā)酵乳中VB1含量最高,為1.38 mg/L;LB發(fā)酵乳中VB6含量最高,為2.85 mg/L;10株菌在牛乳中發(fā)酵VB1產(chǎn)量小于在MRS培養(yǎng)基中發(fā)酵,LB,BL,ST,SF在牛乳中發(fā)酵VB6產(chǎn)量高于在MRS培養(yǎng)基中發(fā)酵。

    2.3 10株乳酸菌發(fā)酵蔬菜VB1和VB6含量

    2.3.1 10株乳酸菌發(fā)酵萵筍VB1和VB6的測定

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到萵筍培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖6。

    圖6 10株乳酸菌發(fā)酵萵筍VB1和VB6的含量

    由圖6可知,10株乳酸菌發(fā)酵萵筍中均產(chǎn)生VB1和VB6。發(fā)酵萵筍中VB1含量在9.13~10.34 mg/L之間,VB6含量在16.56~19.78 mg/L之間。LA發(fā)酵萵筍時(shí),VB1含量最高;ST發(fā)酵萵筍時(shí),VB6含量最高。10株乳酸菌發(fā)酵萵筍產(chǎn)VB1的量基本一致。乳酸菌發(fā)酵蔬菜汁比發(fā)酵鮮牛乳和MRS培養(yǎng)基中維生素產(chǎn)量高出很多。

    2.3.2 10株乳酸菌發(fā)酵芹菜VB1和VB6的測定

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到芹菜培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖7。

    圖7 10株乳酸菌發(fā)酵芹菜VB1和VB6的含量

    由圖7可知,10株乳酸菌發(fā)酵芹菜中均產(chǎn)生VB1和VB6。10株乳酸菌發(fā)酵芹菜時(shí),VB1含量在8.43~9.75 mg/L,VB6含量在13.78~17.39 mg/L。LCR發(fā)酵芹菜汁VB1含量最大;LA發(fā)酵芹菜汁VB6含量最大。10株乳酸菌發(fā)酵芹菜產(chǎn)VB1的量基本一致。乳酸菌發(fā)酵芹菜VB1,VB6含量都低于發(fā)酵萵筍VB1,VB6含量。

    2.3.3 10株乳酸菌發(fā)酵油麥菜VB1和VB6的測定

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到油麥菜培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖8。

    圖8 10株乳酸菌發(fā)酵油麥菜VB1和VB6的含量

    由圖8可知,10株乳酸菌發(fā)酵油麥菜中均產(chǎn)生VB1和VB6。10株乳酸菌發(fā)酵油麥菜時(shí),VB1含量在9.04~10.89 mg/L之間,VB6含量在16.72~20.31 mg/L之間。LA發(fā)酵油麥菜上清液中VB1,VB6含量都最大。10株菌發(fā)酵油麥菜VB6產(chǎn)量大于發(fā)酵芹菜的產(chǎn)量。除了菌種LCR,其余菌株發(fā)酵油麥菜產(chǎn)VB1的量均高于在芹菜中發(fā)酵的產(chǎn)量。

    2.3.4 10株乳酸菌發(fā)酵荸薺VB1和VB6的測定

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到荸薺培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖9。

    圖9 10株乳酸菌發(fā)酵荸薺VB1和VB6的含量

    由圖9可知,10株乳酸菌發(fā)酵荸薺中均產(chǎn)生VB1和VB6。VB1含量在8.56~10.11 mg/L之間,VB6含量在13.28~17.44 mg/L之間。LC發(fā)酵荸薺時(shí)VB1含量最高;LA發(fā)酵荸薺時(shí)VB6含量最高。

    2.3.5 10株乳酸菌發(fā)酵菊芋VB1和VB6的測定

    以10株乳酸菌為發(fā)酵菌種,接種到菊芋培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h后分別測定 VB1和VB6的含量,結(jié)果見圖10。

    圖10 10株乳酸菌發(fā)酵菊芋VB1和VB6的含量

    由圖10可知,10株乳酸菌發(fā)酵菊芋均產(chǎn)生VB1和VB6。VB1含量在8.56~9.98 mg/L之間,VB6含量在13.43~17.87 mg/L之間。LA菌株發(fā)酵菊芋時(shí),VB1和VB6都最高。LB,LC,ST,SF,LCR,LR在菊芋中發(fā)酵VB1的產(chǎn)量低于在荸薺中發(fā)酵的產(chǎn)量,ST,LCR,LR在菊芋中發(fā)酵VB6的產(chǎn)量低于在荸薺中發(fā)酵的產(chǎn)量,其余菌株VB6的產(chǎn)量高于在荸薺中發(fā)酵的產(chǎn)量。

    3 結(jié)論

    10株乳酸菌發(fā)酵MRS培養(yǎng)基、鮮牛乳和5種蔬菜均產(chǎn)生VB1和VB6。10株乳酸菌在MRS培養(yǎng)基中的維生素B1含量在1.02~2.37 mg/L,維生素B6含量在0.35~5.32 mg/L;在發(fā)酵乳中的維生素B1的含量在0.32~1.38 mg/L,維生素B6含量在0.56~2.85 mg/L;在不同的發(fā)酵蔬菜汁中維生素B1的含量在8.43~10.89 mg/L,維生素B6的含量在13.28~20.31 mg/L。乳酸菌發(fā)酵蔬菜VB1和VB6的產(chǎn)量大于發(fā)酵MRS培養(yǎng)基和發(fā)酵乳的維生素產(chǎn)量。

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