熒光標(biāo)記免疫層析技術(shù) 在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展

湯軼偉,張 宏,崔芷萌,焦雪晴,劉 歡,鐘克利,劉秀英,高子媛,徐志祥,丁浩宸,勵(lì)建榮,*

(1.渤海大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧錦州 121013;2.山東華盛天同標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司,山東濟(jì)南 250102;3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東泰安 271018;4.遼寧安井食品有限公司,遼寧臺(tái)安 114100)

食物是人類(lèi)賴(lài)以生存和繁衍的物質(zhì)基礎(chǔ),食品安全問(wèn)題關(guān)系到每個(gè)人的身體健康。隨著食品工業(yè)及全球貿(mào)易的發(fā)展,除了傳統(tǒng)的食品質(zhì)量安全問(wèn)題以外,由食品生產(chǎn)、加工新技術(shù)與新工藝帶來(lái)的新的危害日益突出,主要表現(xiàn)為食品污染及非法添加事件頻發(fā)、食源性疾病不斷上升、食品造假案件接連發(fā)生。食品安全快速檢測(cè)技術(shù)是食品安全保障的重要支撐，與食品安全儀器檢測(cè)技術(shù)相比,食品快速檢測(cè)技術(shù)具有檢測(cè)時(shí)間縮短,實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、樣品制備、操作過(guò)程簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。

免疫層析技術(shù)(Immunochromatographic Assay,ICA)是20世紀(jì)末發(fā)展起來(lái)的結(jié)合免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的一種分析方法,該方法具有特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等重要領(lǐng)域[1-2]。傳統(tǒng)免疫層析技術(shù)以膠體金為標(biāo)記物,通過(guò)條帶顯色對(duì)目標(biāo)物定性檢測(cè)或半定量分析。該方法雖然簡(jiǎn)單快速,但靈敏度較差,難以準(zhǔn)確定量[3-4]。熒光免疫層析技術(shù)作為一項(xiàng)新型免疫檢測(cè)技術(shù),既保留了傳統(tǒng)膠體金試紙條的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)優(yōu)點(diǎn),又加入了熒光檢測(cè)技術(shù)的高靈敏度特點(diǎn),成為提高免疫層析方法檢測(cè)性能的主要途徑之一。本論文對(duì)熒光免疫層析技術(shù)原理、熒光標(biāo)記物種類(lèi)及熒光免疫層析技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行綜述,并展望了未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)。

1 熒光免疫層析技術(shù)

熒光免疫層析技術(shù)是基于抗原抗體特異性免疫反應(yīng)的新型膜檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)以固定有檢測(cè)線(xiàn)(包被抗體或包被抗原)和質(zhì)控線(xiàn)(抗抗體)的條狀纖維層析材料為固定相,測(cè)試液為流動(dòng)相,熒光標(biāo)記抗體或抗原固定于連接墊,通過(guò)毛細(xì)管作用使待分析物在層析條上移動(dòng)。對(duì)于帶有多個(gè)抗原決定簇的大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等),通常采用“三明治”型雙抗夾心免疫層析方法,即待測(cè)物在流動(dòng)相作用下先與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合,當(dāng)?shù)竭_(dá)檢測(cè)線(xiàn)時(shí)再與包被抗體結(jié)合形成雙抗夾心的“三明治”型(圖1A)。對(duì)于只具有單一抗原表位的小分子抗原(農(nóng)、獸藥、違禁藥物等),待測(cè)小分子抗原與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合后,由于空間位阻作用難以再與檢測(cè)線(xiàn)上的包被抗體結(jié)合(圖1B)。所以,具有單一抗原表位的小分子待測(cè)物多采用競(jìng)爭(zhēng)免疫層析法檢測(cè)。

圖1 熒光試紙條示意圖[5]Fig.1 Schematic diagram of fluorescence strip[5]注:A:“三明治”免疫層析試紙條;B:競(jìng)爭(zhēng)免疫層析試紙條。

2 熒光標(biāo)記物種類(lèi)及熒光免疫層析技術(shù)應(yīng)用

熒光免疫層析分析方法具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、受自然熒光本底干擾低等優(yōu)點(diǎn),成為食品質(zhì)量安全快速檢測(cè)分析研究的熱點(diǎn)。目前,用于熒光免疫分析的標(biāo)記物主要包括熒光素、量子點(diǎn)、上轉(zhuǎn)換納米粒子等。

2.1 熒光素免疫熒光層析技術(shù)

熒光素是指具有熒光特性的有機(jī)染料。1942年,Coons等首次報(bào)道了異氰酸熒光素標(biāo)記抗體用于檢測(cè)鼠組織切片中肺炎球菌抗原分布的研究,由此出現(xiàn)了免疫熒光技術(shù)。后來(lái),為了改進(jìn)異氰酸熒光素的性能,Rigggs等合成了性質(zhì)穩(wěn)定、毒性較低的異硫氰酸熒光素。自Marshall等改良了熒光抗體標(biāo)記技術(shù)后,熒光免疫技術(shù)得到快速發(fā)展。目前,應(yīng)用于熒光免疫分析的熒光素主要有以下5種:異硫氰酸熒光素、四乙烯基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、與酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)和鑭系[6]。

宋春美等[7]采用異硫氰酸熒光素作為標(biāo)記材料標(biāo)記萊克多巴胺單克隆抗體,應(yīng)用免疫層析技術(shù)研制萊克多巴胺熒光檢測(cè)試紙條,并對(duì)其靈敏度、特異性、重復(fù)性進(jìn)行了測(cè)定。研究結(jié)果表明,該免疫層析試紙條的檢測(cè)限為1 μg/L,較同一抗體的膠體金試紙條的敏感性提高了10倍;與結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)結(jié)果顯示該方法具有良好的特異性;以不同批次的檢測(cè)試紙對(duì)牛奶等樣品中萊克多巴胺殘留進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果一致性較高,重現(xiàn)性良好。該檢測(cè)方法快速,能在10 min內(nèi)顯示結(jié)果。

熒光材料在免疫層析技術(shù)中的應(yīng)用顯著提高了該方法的檢測(cè)性能。然而,有機(jī)染料標(biāo)記物光照下易分解,易發(fā)生光漂白現(xiàn)象,具有濃度淬滅特征,影響了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性[8]。將熒光素包裹于聚苯乙烯微球是提高熒光素分析性能的有效方法,Majdinasab等[9]以聚苯乙烯/Eu3+納米粒子標(biāo)記赭曲霉毒素A(OVA)抗體作為熒光探針,以赭曲霉毒素/牛血清白蛋白偶聯(lián)物和兔抗鼠抗抗體分別噴涂于纖維素膜上作為檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)構(gòu)建了熒光免疫層析檢測(cè)方法,最優(yōu)條件下該方法對(duì)實(shí)際樣品的檢測(cè)限為1 μg/kg。Tang等[10]對(duì)比了聚苯乙烯包裹Eu3+配合物熒光微球與膠體金標(biāo)記物在免疫層析分析中的穩(wěn)定性,結(jié)果顯示：聚苯乙烯熒光微球具有較高的穩(wěn)定性和靈敏度,更適合用于免疫層析分析。

2.2 量子點(diǎn)免疫層析技術(shù)

量子點(diǎn)(Quantum Dots,QDs)是一種半導(dǎo)體熒光納米顆粒,直徑通常在1～20 nm之間,一般由II-VI或III-V族元素組成[11-12]。與有機(jī)染料熒光標(biāo)記材料相比,量子點(diǎn)具有斯托克斯位移大,激發(fā)光譜寬、發(fā)射光譜窄,熒光發(fā)射強(qiáng)度強(qiáng)而穩(wěn)定,量子產(chǎn)率高,耐光漂白[13],成為分析檢測(cè)領(lǐng)域研究的新熱點(diǎn)。

白亞龍[14]以紅色CdTe量子點(diǎn)為代表,通過(guò)免疫層析法探討了量子點(diǎn)與小鼠lgG抗體的最佳偶聯(lián)方式,結(jié)果顯示以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的混合物(質(zhì)量比3∶4)為偶聯(lián)劑制備的熒光探針性能優(yōu)于直接偶聯(lián)和以DEC和NHS單獨(dú)作為偶聯(lián)劑偶聯(lián)得到的熒光探針;采用硅烷偶聯(lián)試劑APTES氨基化的二氧化硅納米粒子(50～500 nm)為載體,通過(guò)偶聯(lián)試劑EDC與NHS將其與CdTe量子點(diǎn)偶聯(lián),制備得到了高強(qiáng)度的熒光微球;初步研究結(jié)果表明：熒光免疫層析方法的靈敏度比膠體金免疫層析體系高4～20倍。

Nardo等[15]將羧基化量子點(diǎn)通過(guò)活化酯方法與伏馬毒素(Fumonisins)抗體偶聯(lián)作為熒光標(biāo)記探針,建立了玉米中伏馬毒素B1熒光免疫層析試紙檢測(cè)方法,測(cè)定過(guò)程如圖2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法的檢測(cè)限為2.8 μg/L,實(shí)際樣品的檢測(cè)范圍為30～3500 μg/kg,檢測(cè)分析時(shí)間(包括樣品處理)為22 min。在相同檢測(cè)條件下,量子點(diǎn)熒光免疫層析試紙檢測(cè)方法的靈敏度高于膠體金試紙檢測(cè)方法，但是由于熒光信號(hào)需在試紙條干燥后才能穩(wěn)定,所以用時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)。

圖2 量子點(diǎn)免疫層析吸附測(cè)定過(guò)程示意圖[15] Fig.2 Schematic description of QD-based immunochromatographic strip test in dipstick format[15]

胡華軍等[16]采用巰基丁二酸修飾CdTe/ZnSe核殼量子點(diǎn),在N-羥基琥珀酰亞胺作用下與抗克倫特羅多克隆抗體偶聯(lián),通過(guò)凝膠電泳和斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了量子點(diǎn)與抗體的偶聯(lián)效果。將合成的量子點(diǎn)與抗體的偶聯(lián)物為熒光探針制備了用于檢測(cè)克倫特羅的免疫層析試紙條,其靈敏度為1 ng/mL,通過(guò)ELISA方法驗(yàn)證表明：該試紙條可用于實(shí)際樣品中克倫特羅殘留的快速測(cè)定。

周耀鋒等[17]采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺法將抗赭曲霉毒素A腹水與CdTe/ZnSe量子點(diǎn)偶聯(lián)作為熒光探針,以牛血清白蛋白-赭曲霉毒素偶聯(lián)物及驢抗鼠二抗噴涂于硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn),并建立了基于檢測(cè)線(xiàn)/質(zhì)控線(xiàn)熒光強(qiáng)度比值的免疫層析試紙條高靈敏度、快速定量檢測(cè)玉米中赭曲霉毒素的方法。研究結(jié)果表明,該量子點(diǎn)熒光試紙條定量檢測(cè)赭曲霉毒素的線(xiàn)性范圍為0.05～1.0 ng/mL,玉米提取液中赭曲霉毒素的檢出限為0.05 ng/mL,單個(gè)樣品的檢測(cè)時(shí)間為10 min。40個(gè)實(shí)際玉米樣品檢測(cè)結(jié)果表明,量子點(diǎn)熒光微球試紙條與ELISA檢測(cè)赭曲霉毒素的結(jié)果具有良好的相關(guān)性。

Sun等[18]通過(guò)碳二亞胺法將微囊藻毒素抗體與水溶性的CdTe量子點(diǎn)偶聯(lián)作為探針,建立了檢測(cè)微囊藻毒素的熒光免疫層析快速檢測(cè)方法。最優(yōu)條件下,該檢測(cè)方法的線(xiàn)性范圍為:25～5 μg/L(R2=0.9901),測(cè)定限為0.1 μg/L,重現(xiàn)性好,變異系數(shù)為10%,可實(shí)際檢測(cè)水環(huán)境中微囊藻毒素含量測(cè)定。

Yu等[19]以CdTe/CdS量子點(diǎn)與EscherichiacoliO157∶H7抗體偶聯(lián)噴涂于玻璃纖維結(jié)合墊,以EscherichiacoliO157∶H7抗體和羊抗兔抗抗體噴涂于硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)構(gòu)建熒光免疫層析試紙條及檢測(cè)方法。最優(yōu)條件下,該方法的檢測(cè)限位104CFU/mL,與其它Escherichiacoli株系無(wú)交叉反應(yīng)。該試紙條可在室溫避免條件下保存35 d,檢測(cè)方法快速(小于12 min)、靈敏,可定量檢測(cè)食品樣品中的細(xì)菌含量。

為了提高熒光免疫層析試紙條的檢測(cè)通量,提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性,Taranova等[20]將氯霉素抗體、鏈霉素抗體、氧氟沙星抗體分別與具有不同發(fā)射波長(zhǎng)的量子點(diǎn)偶聯(lián),并以此為熒光探針構(gòu)建了可同時(shí)檢測(cè)牛奶中三種抗生素的熒光免疫層析試紙條,建立了不同抗生素濃度與熒光強(qiáng)度之間的線(xiàn)性關(guān)系,實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果如圖3所示。研究結(jié)果表明,最優(yōu)條件下該試紙條對(duì)氧氟沙星的檢測(cè)限為0.3 ng/mL,氯霉素的檢測(cè)限為0.12 ng/mL,鏈霉素的檢測(cè)限為0.2 ng/mL,比使用同一對(duì)應(yīng)抗體建立ELISA方法的檢測(cè)限低80～200倍,對(duì)實(shí)際牛奶樣品的添加回收率為92%～101%。

圖3 檢測(cè)3種抗生素類(lèi)藥物量子 點(diǎn)熒光免疫層析試紙檢測(cè)結(jié)果[20]Fig.3 Immunochromatographic test for testing samples in the absence of analytes(control experiment)[20]注:a:不含有任何藥物,b:含有氧氟沙星(200 ng/mL),c:含有氯霉素(10 ng/mL),d:含有鏈霉素(500 ng/mL)。

Wang研究團(tuán)隊(duì)采用微乳液技術(shù)將量子點(diǎn)CdSe/ZnS包裹起來(lái)形成量子點(diǎn)微球,然后將該微球與玉米烯酮及黃曲霉毒素B1抗體偶聯(lián)作為競(jìng)爭(zhēng)性熒光探針。與上述免疫層析試紙不同,該熒光探針不噴涂于試紙條上,而是在應(yīng)用時(shí)將其與樣品提取液混合后滴于樣品墊,在層析作用下與硝酸纖維素膜上噴涂的包被抗原(檢測(cè)線(xiàn))及羊抗鼠抗抗體(質(zhì)控線(xiàn))競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。研究結(jié)果表明,制備的量子點(diǎn)微球比相對(duì)應(yīng)量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度可增強(qiáng)千倍以上,而且檢測(cè)靈敏度得到顯著提高[21-22]。綜合比較熒光微球與量子點(diǎn)熒光免疫層析檢測(cè)方法,熒光微球免疫層析檢測(cè)方法的檢測(cè)限更低,準(zhǔn)確度、精確度、重現(xiàn)性更好[23]。

石墨烯(Graphene)是一種由碳原子以sp2雜化方式形成的蜂窩狀準(zhǔn)二維材料。氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)是石墨烯的氧化物,在水中具有優(yōu)越的分散性,可通過(guò)熒光共振能力轉(zhuǎn)移方式使熒光物質(zhì)發(fā)生熒光淬滅。Morales-Narváez等[24]利用氧化石墨烯可淬滅熒光的特性用于熒光免疫層析檢測(cè)中，作為病原菌顯示劑,該研究將量子點(diǎn)CdSe@ZnS與抗體偶聯(lián)物(Ab-QDs)及量子點(diǎn)CdSe@ZnS分別噴涂于試紙的檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)。檢測(cè)時(shí)若測(cè)試液中含有目標(biāo)物,則目標(biāo)物與檢測(cè)線(xiàn)上的抗體結(jié)合,阻止氧化石墨烯淬滅檢測(cè)線(xiàn)上量子點(diǎn)發(fā)出的熒光;若測(cè)試液中沒(méi)有目標(biāo)物,則氧化石墨烯淬滅檢測(cè)線(xiàn)上量子點(diǎn)產(chǎn)生的熒光。該實(shí)驗(yàn)中質(zhì)控線(xiàn)上量子點(diǎn)產(chǎn)生的熒光不論測(cè)試液中是否含有目標(biāo)物都被氧化石墨烯淬滅。檢測(cè)示意圖如圖4所示。研究結(jié)果表明,該方法具有較高的特異性和靈敏度,對(duì)瓶裝水及牛奶樣品中大腸桿菌的檢測(cè)限為100 CFU/mL。

圖4 以氧化石墨烯為病原菌顯示劑的 熒光免疫層析病原菌檢測(cè)示意圖[24]Fig.4 Photoluminescent lateral flow test revealed by grapheme oxide(GO)for pathogen detection[24]

2.3 上轉(zhuǎn)換納米粒子免疫層析技術(shù)

上轉(zhuǎn)換發(fā)光是指反-斯托克斯發(fā)光,即用低能量的紅外或近紅外光激發(fā)，從而發(fā)射出高能量的紫外或可見(jiàn)光[25]。上轉(zhuǎn)換發(fā)光大都發(fā)生在摻雜稀土離子的化合物中,NaYF4是目前上轉(zhuǎn)換發(fā)光效率最高的基質(zhì)材料。與熒光染料、量子點(diǎn)相比,上轉(zhuǎn)換納米粒子毒性低、靈敏度高、穩(wěn)定性好,可避免由于樣品中具有熒光特性基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,是目前理想的熒光標(biāo)記物之一[26]。

Wang等[27]將抗克倫特羅抗體與醛基修飾的上轉(zhuǎn)換納米粒子偶聯(lián)作為熒光探針噴涂于連接墊,以克倫特羅-牛血清白蛋白偶聯(lián)物和抗抗體分別包被于硝酸纖維素膜上，作為檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)構(gòu)建上轉(zhuǎn)換熒光免疫層析試紙,圖5為不同克倫特羅濃度質(zhì)控線(xiàn)和檢測(cè)線(xiàn)上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度變化。研究結(jié)果表明,最優(yōu)條件下該熒光免疫層析試紙的目視檢測(cè)限和計(jì)算檢測(cè)限均為0.1 ng/mL,檢測(cè)時(shí)間為10 min,樣品的添加回收率為73.0%～92.2%。以上轉(zhuǎn)化納米粒子作為免疫層析技術(shù)中的熒光標(biāo)記物可簡(jiǎn)化實(shí)施現(xiàn)有的樣品前處理方法,這是因?yàn)闃悠坊|(zhì)或其它具有熒光性質(zhì)的干擾物在紅外或近紅外光激發(fā)下不產(chǎn)生發(fā)射光譜,對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較小。

圖5 不同克倫特羅濃度質(zhì)控線(xiàn) 和檢測(cè)線(xiàn)上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度變化[27]Fig.5 The upconversion fluorescence intensity of control line and test line in the presence of varying concentrations of clenbuterol[27]

王瑜等[28]將氨基修飾的NaYF4:Yb,Er上轉(zhuǎn)換納米粒子與己烯雌酚單克隆抗體偶聯(lián)為免疫層析熒光探針,分別以噴涂于硝酸纖維素膜上的己烯雌酚-牛血清白蛋白偶聯(lián)物和羊抗鼠抗抗體為檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn),建立了上轉(zhuǎn)換免疫層析熒光快速定量檢測(cè)己烯雌酚殘留方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該試紙條線(xiàn)性范圍為25～1000 ng/mL,檢出限為20.84 ng/mL,單個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間為15 min,批內(nèi)批間變異系數(shù)小于10%,牛奶樣品的添加回收率為90.1%～115.2%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%,為牛奶中己烯雌酚殘留快速定量檢測(cè)提供了新的測(cè)定方法。

王浩然等[29]基于上轉(zhuǎn)換免疫熒光單靶標(biāo)檢測(cè)試紙,成功研制出對(duì)乙型副傷寒沙門(mén)氏菌、霍亂弧菌O1和O139群、大腸桿菌O157、甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌等10種食源性致病菌具有現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)能力的十通道試紙盤(pán)檢測(cè)系統(tǒng),可滿(mǎn)足食品樣品增菌檢測(cè)和腹瀉樣本直接檢測(cè)的靈敏度要求。劉曉等[30]以上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料為標(biāo)記物,建立了可對(duì)奶制品中黃曲霉毒素M1進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的上轉(zhuǎn)換熒光免疫層析快速定量檢測(cè)方法。最優(yōu)條件下,該方法對(duì)奶粉和牛奶中黃曲霉毒素M1的檢測(cè)靈敏度分別達(dá)到0.1 ng/mL和0.3 ng/mL,每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)量的變異系數(shù)小于15%。該研究構(gòu)建的上轉(zhuǎn)換熒光免疫層析試紙條檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便快捷、樣品前處理簡(jiǎn)單、具有良好的檢測(cè)敏感性和特異性,對(duì)實(shí)際樣品的耐受性較好,可滿(mǎn)足食品安全中對(duì)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需求。

Liu等[31]以核殼型NaGdF4:Yb,Er@NaGdF4納米顆粒與頭孢氨芐抗體偶聯(lián)，作為熒光探針噴涂于結(jié)合墊,以頭孢氨芐-牛血清白蛋白偶聯(lián)物和羊抗鼠抗抗體分別噴涂于硝酸纖維素膜上，作為檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)。最優(yōu)條件下,建立的上轉(zhuǎn)換熒光免疫層析方法的目測(cè)檢測(cè)線(xiàn)為10 ng/mL,定量檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為0.5～100 ng/mL。

Zhao等[32]通過(guò)水熱反應(yīng)法合成了羧基修飾的β-NaYF4:Yb,Er納米顆粒,在EDC和NHS作用與抗體偶聯(lián)作為熒光探針。最優(yōu)條件下,建立的鰻弧菌MVM425上轉(zhuǎn)換熒光免疫層析檢測(cè)方法的線(xiàn)性范圍為103～109CFU/mL,相關(guān)系數(shù)為0.994,檢測(cè)限位102CFU/mL,比已報(bào)到的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法低100倍。

3 展望

免疫層析技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、無(wú)需特殊昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn),但傳統(tǒng)以膠體金標(biāo)記的免疫層析檢測(cè)方法靈敏度低、難以定量的問(wèn)題已限制了該方法的應(yīng)用。熒光免疫層析技術(shù)的發(fā)展在一定程度上解決了傳統(tǒng)膠體金標(biāo)記免疫層析出現(xiàn)的問(wèn)題,迅速成為食品安全快速定量檢測(cè)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。

熒光染料、量子點(diǎn)、上轉(zhuǎn)換納米粒子熒光標(biāo)記免疫層析技術(shù)的發(fā)展及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用，為我國(guó)的食品安全提供了新的技術(shù)支撐。為了熒光免疫層析技術(shù)在食品安全快速檢測(cè)領(lǐng)域更好的應(yīng)用,該技術(shù)可在以下方面拓展深入研究:核酸適配體是一種具有特異分子識(shí)別性能的新型分子識(shí)別元件,比生物抗體合成更容易,穩(wěn)定性更好,研究核酸適配體等新型分子識(shí)別元件在熒光免疫層析中應(yīng)用具有重要意義;多殘留廣譜熒光免疫層析技術(shù)仍需深入研究;研制小型、便攜式、性能優(yōu)良的熒光免疫層析試紙配套檢測(cè)儀器,提高熒光免疫層析定量檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和靈敏度,促進(jìn)儀器檢測(cè)方法的應(yīng)用簡(jiǎn)便性,降低檢測(cè)成本;研發(fā)提高抗體-熒光標(biāo)記物探針抗干擾試劑,降低假陽(yáng)性或假陰性現(xiàn)象的發(fā)生;建立簡(jiǎn)單、快速、高效的樣品前處理方法,為食品安全現(xiàn)場(chǎng)快速定量檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。

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