芝麻菜種子萌發(fā)過程中芽苗生長和硫苷代謝

李昕悅,楊潤強(qiáng),王 沛,田 璐,顧振新

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇南京 210095)

芝麻菜(ErucasativaMill)是十字花科蕓薹屬一年生植物,原產(chǎn)于東亞與地中海，其具有生長周期短(40～60 d),氣味辛辣,類似芝麻種子的香氣等特點(diǎn),并且富含胡蘿卜素、維生素C、膳食纖維、類黃酮、硫代葡萄糖苷(Glucosinolate,GLs,簡稱硫苷)等功能成分[1]。歐洲國家常用其葉片做沙拉或清蒸蔬菜;由于其種子的高含油量,印度、巴基斯坦及一些非洲國家則將其作為一種重要的油料作物[2-3]。在日本,芝麻菜在過去數(shù)十年中被廣泛食用,且顯示出不斷增長的經(jīng)濟(jì)潛能。在我國,河北、山西、陜西、黑龍江、云南、四川等地均有種植[4],但仍然未被廣泛認(rèn)知或食用。

硫苷是植物體的一類含氮、硫的次級代謝產(chǎn)物,主要存在于十字花科植物中,流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),硫苷能降低患癌風(fēng)險(xiǎn),經(jīng)常食用十字花科蕓薹屬蔬菜,如西蘭花、花椰菜、甘藍(lán)、芝麻菜等,有助于預(yù)防多種癌癥的發(fā)生[5-6]。硫苷一般存在于液泡中,而黑介子酶(Myrosinase,MYR)則位于特定的蛋白體中,正常情況下,兩者分離,相對穩(wěn)定,當(dāng)植物組織和細(xì)胞遭到機(jī)械損傷、病原菌侵染、昆蟲取食或代謝誘導(dǎo)時(shí),硫苷與MYR接觸,逐步發(fā)生降解反應(yīng)形成異硫氰酸鹽(Isothiocyanates,ITCs)、硫氰酸鹽、腈類等一系列產(chǎn)物[7]。目前研究認(rèn)為其中ITCs在十字花科植物抗癌功效中起決定性的作用,蘿卜硫苷的降解產(chǎn)物蘿卜硫素(Sulforaphane,Sul)是迄今為止在蔬菜中發(fā)現(xiàn)的抗癌能力最強(qiáng)的天然活性物質(zhì),而芝麻菜中主要含有的是芝麻菜苷(Glucoerucin,GER),其降解產(chǎn)物芝麻菜素(Erucin,Eru)具有與蘿卜硫素相似的結(jié)構(gòu),兩者可以相互轉(zhuǎn)化,且芝麻菜素還具有獨(dú)特的直接抗氧化作用[8],具有極大的研究價(jià)值。

種子在發(fā)芽過程中生理生化變化顯著,并伴隨著多種物質(zhì)間的轉(zhuǎn)化、分解與合成。郭麗萍等[9]對西蘭花苗研究發(fā)現(xiàn),隨著發(fā)芽的進(jìn)行,蘿卜硫苷含量和蘿卜硫素的形成量不斷降低;周晨光[10]研究了蘿卜種子萌發(fā)過程中的生理變化,發(fā)現(xiàn)隨著幼苗的生長,硫苷總體上呈下降趨勢;張亮[11]的實(shí)驗(yàn)表明西蘭花種子發(fā)芽過程中蘿卜硫苷含量呈先升后降再上升,且與蘿卜硫素含量呈極顯著負(fù)相關(guān)。說明發(fā)芽過程中不同品種間物質(zhì)變化存在差異,而芝麻菜芽苗菜作為一種新型的即食性食物鮮少被研究。

本研究選擇“板葉”和“東升”兩個(gè)品種芝麻菜,研究其萌發(fā)過程中生長狀況及硫苷代謝的變化情況,旨在為芝麻菜芽苗菜及相關(guān)食品的開發(fā)提供一定的科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

芝麻菜種子 山東壽光惠農(nóng)種業(yè)公司;烯丙基硫苷(純度≥98%)、硫酸酯酶(酶活≥10.000 units/g solid)、異硫氰酸苯酯(純度≥99%) 美國Sigma公司;芝麻菜素 純度≥98%,美國LKT Labs公司;DEAE Sephadex A-25樹脂、咪唑 北京索萊寶科技有限公司;甲醇、乙腈(色譜級) 美國天地公司;葡萄糖試劑盒 貨號:F 006,南京建成生物工程公司;二氯甲烷、沒食子酸、福林酚、甲醇、乙醇、乙酸、醋酸鈉、鹽酸 醫(yī)藥集團(tuán)(上海)化學(xué)試劑公司。

PGX-150智能光照培養(yǎng)箱 寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠;DY02九陽智能發(fā)芽機(jī) 山東九陽股份有限公司;Agilent 1200型高效液相色譜儀 美國安捷倫公司;UV-2802型紫外-可見分光光度計(jì) 尤尼柯(上海)儀器有限公司;TDL-40B型離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;Orion818型pH計(jì) 美國Orion公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)芽及取樣方法 稱取2 g芝麻菜種子,于1.5%次氯酸鈉溶液中浸泡消毒15 min,然后用蒸餾水沖洗至pH中性,置于蒸餾水中,30 ℃浸泡3 h后,均勻撒入鋪有蛭石的發(fā)芽機(jī)中,于30 ℃下發(fā)芽,光照16 h/黑暗8 h,每隔12 h用100 mL蒸餾水噴施一次。分別在發(fā)芽2、4、6、8 d后取樣(去根),吸水紙吸干芽苗表面水分,液氮速凍后于-80 ℃保存待測。0 d樣品為僅浸泡3 h后的種子。

1.2.2 芽長、鮮重和含水率的測定 芽長:隨機(jī)選取30株芽苗,用游標(biāo)卡尺測定;鮮重:隨機(jī)選取30株芽苗為一組,準(zhǔn)確測定其重量,重復(fù)3次;干重:隨機(jī)選取50株芽苗或50粒種子為一組,于60 ℃恒溫箱中烘干至恒重后,準(zhǔn)確測定重量,重復(fù)3次。

1.2.3 可溶性糖含量的測定 根據(jù)王學(xué)奎[12]的方法稍作修改。取0.1 g種子或10株芽苗,各加入3.0 mL水研磨成勻漿,90 ℃恒溫水浴浸提20 min,于10000×g離心10 min,然后吸取0.5 mL上清于20 mL刻度試管中,加1.5 mL蒸餾水、0.5 mL蒽酮乙酸乙酯試劑和5 mL濃硫酸,充分振蕩,立即將試管放于沸水浴中準(zhǔn)確保溫1.0 min,取出后自然冷卻至室溫,在630 nm波長下測其吸光值。

式中:n為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得可溶性糖含量(μg);Vt為樣品提取液總體積,mL;Vs為測定時(shí)取用的樣品體積,mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式為Y=0.006X+0.001(Y為630 nm處吸光度,X為可溶性糖質(zhì)量,μg),相關(guān)系數(shù)r=0.9956。

1.2.4 游離氨基酸含量的測定 根據(jù)王學(xué)奎[12]的方法稍作修改。取0.1 g種子或10株芽苗,各加入3.0 mL 10%乙酸研磨成勻漿,10000×g離心15 min,取1.0 mL上清液于20 mL刻度試管中,依次加入1.0 mL去離子水、3.0 mL水合茚三酮試劑、0.1 mL 0.1%的抗壞血酸。充分混勻后蓋上合適大小的玻璃球,置于沸水中加熱15 min,取出后用冷水冷卻并不時(shí)搖動,使加熱時(shí)形成的紅色空氣被空氣逐漸氧化而褪去,進(jìn)而呈現(xiàn)藍(lán)紫色時(shí),用60%乙醇定容至20 mL,混勻后于570 nm處測吸光值。

式中:n為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的游離氨基含量(μg);Vt為樣品提取液總體積,mL,Vs為測定時(shí)取用的樣品體積,mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式為Y=0.0479X-0.0034(Y為570 nm處吸光度,X為游離氨基酸質(zhì)量,μg),相關(guān)系數(shù)r=0.9982。

1.2.5 硫苷含量的測定 根據(jù)Wei等[13]的方法稍作修改。取0.1 g種子或10株芽苗,各加入2.0 mL 70%的沸甲醇,80 ℃恒溫水浴浸提20 min,10000×g離心10 min后收集上清液,沉淀再用2.0 mL 70%沸甲醇提取20 min,合并兩次提取的上清液,即為硫苷粗提液。取2.0 mL上清液流經(jīng)DEAE SephadexTMA-25離子交換柱,待提取液充分排干后,加2.0 mL 0.02 mol/L的醋酸鈉溶液沖洗2次,隨后加500 μL硫酸酯酶,于30 ℃下反應(yīng)16 h。用2.0 mL去離子水洗脫,洗脫液用0.45 μm水相濾膜過濾后用于HPLC分析。

HPLC色譜條件:色譜柱為Eclipse XDB-C18column(4.6 mm×150 mm×5 μm),流動相為超純水和20%的乙腈(色譜級),洗脫程序:水洗脫1 min后,1～21～26 min內(nèi)乙腈線性梯度變化0%～100%～0%。檢測波長:226 nm;流速為1 mL/min;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。以烯丙基硫苷為內(nèi)標(biāo),結(jié)果以nmol/株表示。

1.2.6 異硫氰酸鹽含量測定 根據(jù)Chung等[14]的方法并稍作修改。取0.1 g種子或10株芽苗,各用4.0 mL去離子水研磨成勻漿,30 ℃下恒溫水浴2 h后于10000×g離心15 min。取250 μL上清液,與250 μL磷酸緩沖液(0.1 mol/L,pH8.5)、500 μL 1,2-苯二硫醇(10 mmol/L)混合均勻后,于65 ℃下反應(yīng)2 h,待冷卻后10000×g離心5 min。上清過0.45 μm有機(jī)相濾膜后用于HPLC分析。

HPLC色譜條件:色譜柱為Eclipse XDB-C18column(4.6 mm×150 mm×5 μm),流動相為超純水-甲醇(30∶70,V/V),檢測波長:365 nm;流速為1 mL/min;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。以異硫氰酸苯酯做標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中異硫氰酸鹽的含量,結(jié)果以nmol/株表示。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式為Y=6403.2X+234.73(Y為HPLC所測峰面積,X為異硫氰酸苯酯濃度μmol/mL),相關(guān)系數(shù)r=0.9993。

1.2.7 黒芥子酶活性的測定 根據(jù)Kim等[15]的方法稍作修改。取0.1 g種子和10株芽苗,各用3.0 mL磷酸緩沖液(0.1 mol/mL,pH6.5)冰浴研磨,4 ℃下10000×g離心15 min,上清液即為粗酶液。各取500 μL粗酶液分別與500 μL去離子水和500 μL 0.2 mg/mL烯丙基硫苷混合均勻,加去離子水的樣直接沸水滅酶5 min,加烯丙基硫苷的樣于37 ℃水浴反應(yīng)15 min后沸水滅酶5 min,用葡萄糖試劑盒測定葡萄糖的含量。以每分鐘被黒芥子酶轉(zhuǎn)化生成1 nmol葡萄糖為1個(gè)酶活力單位,酶活單位為U/株。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)設(shè)3次生物學(xué)重復(fù),各指標(biāo)測定設(shè)3次技術(shù)重復(fù),結(jié)果以x±SD表示。采用Sigmaplot 12.0作圖,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,均值間比較采用Duncan’s多重比較,在0.05水平上進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 芝麻菜芽苗芽長、株重及含水率的變化

“東升”的芽長(圖1)、鮮重(圖2)始終高于“板葉”。兩者鮮重在發(fā)芽前4 d迅速增加,發(fā)芽后4 d有所減緩。發(fā)芽前2 d內(nèi)“板葉”和“東升”的含水率均迅速升高,分別是發(fā)芽初始的1.57倍和1.64倍,4 d后變化趨于平緩,兩品種含水率均無顯著差異(p>0.05),發(fā)芽8 d后含水率分別為91.94%和91.88%(圖3)。

圖1 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中芽長變化Fig.1 Changes of sprout length of Banye and Dongsheng rocket during germination注:不同小寫字母表示不同發(fā)芽時(shí)間下 差異顯著(p<0.05),圖2～圖7同。

圖2 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中鮮重變化Fig.2 Changes of sprout fresh weight of Banye and Dongsheng rocket during germination

圖3 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中含水率變化Fig.3 Changes of the rate of water content of Banye and Dongsheng rocket during germination

種子吸漲后開始萌發(fā),胚芽突破種皮,隨著發(fā)芽時(shí)間的延長,胚得到充分發(fā)育,各種內(nèi)源酶被激活或合成,大分子有機(jī)物分解為小分子物質(zhì),為芽苗生長提供物質(zhì)和能量。同時(shí),細(xì)胞不斷分裂、分化,吸水量也迅速增加,具體表現(xiàn)為芽長、株重及含水率的逐漸增長,在其他芽苗類蔬菜中也有相似的變化[16-17]。

2.2 游離氨基酸及可溶性糖含量

如圖4所示,發(fā)芽過程中“板葉”和“東升”芝麻菜芽苗中游離氨基酸含量呈相似的變化趨勢,且“東升”始終高于“板葉”。兩者含量均在0 d時(shí)最低,分別為1.01 μg/株和1.19 μg/株,然后急劇升高,2 d時(shí)分別為0 d的4.22倍和5.24倍,隨后逐天下降,在第6～8 d時(shí)又逐漸上升并達(dá)到最高值,分別為7.68 μg/株和7.64 μg/株。游離氨基酸是在細(xì)胞中以游離狀態(tài)存在,是植物根部與土壤間氮素循環(huán)和植物體內(nèi)氮素儲存的主要形態(tài),能反應(yīng)植物氮素營養(yǎng)狀況[18]。本研究中,芝麻菜種子發(fā)芽初期(0～2 d),游離氨基酸含量顯著上升,可能是因?yàn)榉N子中貯藏的蛋白質(zhì)在發(fā)芽初期被分解成可溶的小分子蛋白質(zhì)或氨基酸,便于運(yùn)輸及合成新的蛋白質(zhì)[19]。后隨著發(fā)芽時(shí)間延長,光合作用被啟動,相關(guān)酶活增強(qiáng),游離氨基酸等小分子在相關(guān)酶的催化下,又再度合成新的蛋白或其他含氮物質(zhì)。

圖4 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中游離氨基酸變化Fig.4 Changes of free amino acid content of Banye and Dongsheng rocket during germination

由圖5可知,在發(fā)芽過程中,“板葉”和“東升”兩品種芝麻菜芽苗中可溶性糖的含量總體上先上升后下降,均在第6 d達(dá)到最高值,分別達(dá)到216.8 μg/株和203.5 μg/株,較0 d時(shí)增加1.80和1.25倍。發(fā)芽前4 d,“東升”芝麻菜芽苗中可溶性糖含量高于“板葉”,而發(fā)芽6 d后,“板葉”則高于“東升”。兩種芝麻菜中可溶性糖含量變化呈現(xiàn)單峰曲線,這與劉浩榮[20]等對油菜在不同生育期的可溶性糖變化有類似的趨勢?？赡茉?yàn)榉N子萌發(fā)過程中,生命活動所需的能量主要依靠自身貯藏的物質(zhì),體內(nèi)儲存的淀粉被分解為小分子糖類以供芽苗的生長。發(fā)芽后期,生命活動旺盛,新的組織、器官合成,呼吸作用和光合作用均增強(qiáng),各種小分子的糖類減少,用于新物質(zhì)的合成[21]。

表1 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中硫苷含量變化Table 1 Changes of GLs content of Banye and Dongsheng rocket during germination

圖5 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中可溶性糖含量變化Fig.5 Changes of soluble sμgar content of Banye and Dongsheng rocket during germination

注：GLs：硫代葡萄糖苷(硫苷)，Glucosinolates；GRA：4-甲基亞磺酰-丁基硫苷，Glucoraphanin；GER：4-甲硫基-丁基硫苷，Glucoerucin；DIM：聚-4-巰丁基硫苷，Dimer-4-mercaptobutyl；-：未檢測出；同列小寫字母不同表示同一品種在在不同發(fā)芽時(shí)間下有顯著性差異(p<0.05)。

2.3 硫苷代謝

2.3.1 硫苷含量 “板葉”和“東升”兩品種種子中均只檢測到GRA和GER兩種GLs,而在發(fā)芽后,主要檢測到GRA、GER和DIM三種GLs(表1),與Kim等[6]的研究結(jié)果相似。兩品種中GLs總含量均呈先升高后降低趨勢,在第2 d達(dá)到最高,且顯著高于其他發(fā)芽時(shí)間(p<0.05),分別為初始時(shí)的1.20倍和1.91倍,隨后逐天降低,發(fā)芽8 d后僅為53.74 nmol/株和55.87 nmol/株。發(fā)芽前2 d,“東升”品種中GLs總含量均遠(yuǎn)高于“板葉”,在0、2 d分別是其1.47倍和2.34倍,而從第4 d開始,兩者的GLs總含量在相同的發(fā)芽時(shí)間差異很小。

由表1可知，“板葉”中GRA含量在發(fā)芽過程中呈先下降后上升再下降的變化趨勢,其中,第2 d芽苗GRA含量較0 d降低了26.42%,4 d時(shí)GRA含量最高,達(dá)到37.68 nmol/株,是0 d時(shí)的3.63倍,第8 d含量最低,僅為14.65 nmol/株。GER含量則逐漸降低,第8 d僅為0 d時(shí)的5.91%。DIM則是發(fā)芽后才出現(xiàn),隨著芽苗的生長逐漸減少,8 d時(shí)其含量僅為2 d時(shí)的34.98%。

“東升”在發(fā)芽過程中,GRA、GER、DIM三種GLs變化趨勢相同,均呈先上升后降低趨勢。GRA在萌發(fā)第2 d較第0 d增加了5.68倍,第4、6 d較第2 d分別下降46.84%和88.85%,第8 d僅為15.03 nmol/株。GER也在第2 d含量最高,分別是0 d時(shí)的1.64倍和8 d時(shí)的65.75倍,不同發(fā)芽時(shí)間均有顯著性差異(p<0.05)。DIM在發(fā)芽后才檢測到,在第4 d達(dá)到峰值后逐漸下降,8 d時(shí)其含量為4 d時(shí)的50.55%。

種子中GER占總GLs的95%～97%,DIM則是發(fā)芽后才出現(xiàn)。隨著芽苗生長,DIM逐漸占據(jù)主導(dǎo)地位,說明在發(fā)芽過程中GER的下降速度最快。有研究表明,在甘藍(lán)[22]和蘿卜[10]種子發(fā)芽過程中GRA含量及總硫苷含量逐漸下降,而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GRA含量及總硫苷含量均呈現(xiàn)先上升后下降趨勢?？赡茉蚴怯?jì)量單位不同,本實(shí)驗(yàn)以株計(jì)量而其他學(xué)者以克計(jì)量,芽苗生長過程中水分增多,以克計(jì)算會受到水分的干擾。硫苷在種子發(fā)芽過程中存在著復(fù)雜的合成、分解及轉(zhuǎn)化過程[23],發(fā)芽初始階段硫苷的合成速率大于分解速率,使硫苷含量在一定程度上表現(xiàn)出上升的趨勢,并且不同種類的硫苷也會相互轉(zhuǎn)化;后隨著芽苗的生長,部分硫苷作為硫源被分解,用于芽苗的生長代謝[17],致使總硫苷不斷下降。

2.3.2 黑芥子酶活性及異硫氰酸鹽含量 “板葉”的MYR活性在0 d時(shí)最低,發(fā)芽4 d時(shí)達(dá)到3.70 U/株且顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)(p<0.05)(圖6),隨后逐漸降低,2、6和8 d時(shí)酶活性無顯著差異(p>0.05)。在“東升”中,發(fā)芽初期MYR活性迅速升高,2 d時(shí)達(dá)到5.70 U/株,是0 d時(shí)的10倍,隨著發(fā)芽時(shí)間延長酶活逐漸降低,但仍顯著高于0 d。發(fā)芽4、6 d無顯著差異,8 d時(shí)又有所升高,為3.24 U/株。Guo等[24]的研究顯示西蘭花芽苗在發(fā)芽過程中MYR活性逐漸增強(qiáng),而Willianms等[25]的研究則顯示發(fā)芽2 d其活性達(dá)到最高,3～7 d無顯著差異。Yuan等[26]發(fā)現(xiàn)蘿卜芽苗在發(fā)芽過程中酶活先增強(qiáng)后下降,在第5 d時(shí)最高。這些結(jié)果表明發(fā)芽可以提高黒芥子酶的酶活,種子吸水萌芽后,與硫苷合成代謝相關(guān)的酶被激活,初始階段MYR活力升高。而酶活表現(xiàn)出的變化差異可能與品種和酶活的表示方法有關(guān),前人用的是比活或每克樣品的活性,而本文用的是每株樣品的活性。

圖6 兩種芝麻菜種子發(fā)芽過程中MYR活性變化Fig.6 Changes of MYR activity of Banye and Dongsheng rocket during germination

在MYR作用下GLs發(fā)生水解產(chǎn)生ITCs,本研究發(fā)現(xiàn)在不同的發(fā)芽時(shí)間節(jié)點(diǎn),除6 d外,“東升”芝麻菜芽苗的ITCs形成量高于“板葉”(圖7)。在發(fā)芽初始階段,“板葉”中ITCs形成量升高較快,于第4 d達(dá)到最高,為0 d的3.68倍,與第6 d無顯著差異(p>0.05),8 d時(shí)含量減少但仍顯著高于0 d(p<0.05)。“東升”在0 d時(shí)ITCs形成量最低且不同時(shí)間間均有顯著差異,在第4 d時(shí)達(dá)到最高值89.76 nmol/株。其他學(xué)者在甘藍(lán)芽苗[22]的研究中發(fā)現(xiàn)發(fā)芽第1 d ITCs形成量達(dá)到最高。這可能與所選實(shí)驗(yàn)材料不同、所選時(shí)間節(jié)點(diǎn)不同及計(jì)量單位不同有關(guān)。初始階段,種子進(jìn)入萌芽狀態(tài),體內(nèi)相關(guān)代謝途徑被激活,且硫苷含量及MYR活性升高,所以形成更多的ITCs。隨著發(fā)芽的進(jìn)行,硫苷急劇減少,ITCs形成量減少。

3 結(jié)論

本研究通過比較兩個(gè)芝麻菜品種在發(fā)芽過程中的生理生化與硫苷代謝的變化,發(fā)現(xiàn)發(fā)芽可以有效提高種子的品質(zhì)。芽苗生長過程中儲存性糖類物質(zhì)先于蛋白質(zhì)被降解，硫苷不斷降解，黑芥子酶活性與異硫氰酸鹽的形成存在時(shí)空差異。綜合比較,“東升”的植株大小、含有的營養(yǎng)物質(zhì)、GLs及ITCs含量較“板葉”更高,更為優(yōu)秀。因芽苗中主要關(guān)注的功能性成分為ITCs,最佳發(fā)芽天數(shù)選為4 d。目前對芝麻菜相關(guān)的功能性食品的研究較少,芽苗菜作為一種廉價(jià)易得型食物具有良好的開發(fā)前景,可以進(jìn)一步研究其發(fā)芽條件從而獲得富含ITCs的優(yōu)質(zhì)芽苗菜,如控制溫度、噴施外源物質(zhì)、紫外照射等。

[1]Steinmetz K A,Potter J D. Vegetables,fruit,II. Mechanisms[J].Cancer Causes & Control,1991,2(6):427-442.

[2]Jirovetz L,Smith D,Buchbauer G. Aroma Compound Analysis ofErucasativa(Brassicaceae)SPME Headspace Leaf Samples Using GC,GC-MS,and Olfactometry[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2002,50(16):4643-4646.

[3]Yadava T P,Friedt D W,Gupta S K. Oil Content and Fatty Acid Composition of Taramira(ErucasativaL.)Genotypes[J]. Journal of Food Science & Technology,1998,35(6):557-558.

[4]李磊,楊霞,周昇昇. 植物化學(xué)物芝麻菜素的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2012,33(19):344-348.

[5]Verhoeven D T,Goldbohm R A,Van P G,et al. Epidemiological studies on brassica vegetables and cancer risk[J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,1996,5(9):733-748.

[6]Kim S J,Ishii G. Glucosinolate profiles in the seeds,leaves and roots of rocket salad(ErucasativaMill.)and anti-oxidative activities of intact plant powder and purified 4-methoxyglucobrassicin[J]. Soil Science and Plant Nutrition,2006,52(3):394-400.

[7]Brown P D,Morra M J. Control of soil-borne plant pests using glucosinolate-containing plants[J]. Advances in Agronomy,1997,61(C):167-231.

[8]Barillari J,Canistro D,Paolini M,et al. Direct antioxidant activity of purified glucoerucin,the dietary secondary metabolite contained in rocket(ErucasativaMill.)seeds and sprouts[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2005,53(7):2475-2482.

[9]郭麗萍,王志英,楊潤強(qiáng),等. 西蘭花種子發(fā)芽過程中生理活性物質(zhì)含量的變化[J]. 中國食品學(xué)報(bào),2016(3):160-167.

[10]周晨光,朱毅,羅云波. 蘿卜苗發(fā)芽過程中營養(yǎng)物質(zhì)的動態(tài)變化[J]. 食品科學(xué),2014,35(9):1-5.

[11]張亮. 西蘭花種子發(fā)芽過程中蘿卜硫素的形成變化及結(jié)構(gòu)鑒定[D]. 南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2011.

[12]王學(xué)奎. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)(第二版)[M]. 北京:高等教育出版社,2006:195-207.

[13]Wei J,Miao H,Wang Q. Effect of glucose on glucosinolates,antioxidants and metabolic enzymes in Brassica sprouts[J]. Scientia Horticulturae,2011,129(4):535-540.

[14]Chung F L,Jiao D,Getahun S M,et al. A urinary biomarker

for uptake of dietary isothiocyanates in humans[J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,1998,7(2):103-108.

[15]Kim H J,Chen F,Wang X,et al. Effect of methyl jasmonate on phenolics,isothiocyanate,and metabolic enzymes in radish sprout(RaphanussativusL.)[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2006,54(19):7263-7269.

[16]王志英,郭麗萍,楊潤強(qiáng),等. 甘藍(lán)種子發(fā)芽過程中主要的生理生化變化[J]. 食品科學(xué),2015,36(4):6-11.

[17]Gu Y,Guo Q,Zhang L,et al. Physiological and Biochemical Metabolism of Germinating Broccoli Seeds and Sprouts[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2012,60(1):209-213.

[18]申麗霞,王璞. 不同基因型玉米氮素吸收利用效率研究進(jìn)展[J]. 玉米科學(xué),2016,24(1):50-55.

[19]李瑞國,朱秀敏,楊慧. 不同萌發(fā)期綠豆芽蛋白質(zhì)含量的測定及營養(yǎng)價(jià)值分析[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2011(1):97-99.

[20]劉浩榮,宋海星,劉代平,等. 油菜莖葉可溶性糖與游離氨基酸含量的動態(tài)變化[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2007,16(1):123-126.

[21]張繼浪,駱承庠. 大豆在發(fā)芽過程中的化學(xué)成分和營養(yǎng)價(jià)值變化[J]. 中國乳品工業(yè),1994(2):68-74.

[22]Wang Z,Guo L,Qianqian L I,et al. Changes in Main Physiological and Biochemical Metabolism in Cabbage Sprouts during Germination[J]. Food Science,2015,36(3):6-11.

[23]Gu Z X,Guo Q H,Gu Y J. Factors Influencing Glucoraphanin and Sulforaphane Formation in Brassica Plants:A Review[J]. Journal of Integrative Agriculture,2012,11(11):1804-1816.

[24]Guo L P,Yang R Q,Wang Z Y,et al. Glucoraphanin,sulforaphane and myrosinase activity in germinating broccoli sprouts as affected by growth temperature and plant organs[J]. Journal of Functional Foods,2014,9(1):70-77.

[25]Williams D J,Critchley C,Pun S,et al. Epithiospecifier protein activity in broccoli:the link between terminal alkenyl glucosinolates and sulphoraphane nitrile[J]. Phytochemistry,2008,69(16):2765-2773.

[26]Yuan G,Wang X,Guo R,et al. Effect of salt stress on phenolic compounds,glucosinolates,myrosinase and antioxidant activity in radish sprouts[J]. Food Chemistry,2010,121(4):1014-1019.