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    黃連降糖片對(duì)2型糖尿病模型大鼠IL-6及TNF-α的影響*

    2018-03-02 07:25:01龐國(guó)明苗明三陳倩倩張瑞帥
    天津中醫(yī)藥 2018年2期
    關(guān)鍵詞:劑量血清糖尿病

    閆 鏞 ,龐國(guó)明 ,苗明三 ,陳倩倩 ,張瑞帥 ,朱 璞 ,武 楠

    (1.開(kāi)封市中醫(yī)院內(nèi)分泌科,開(kāi)封 475000;2.河南中醫(yī)藥大學(xué),鄭州 450046)

    2型糖尿病(T2DM)是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,一直是研究的重點(diǎn)內(nèi)容。近年來(lái)越來(lái)越多的研究證明炎癥因子在糖尿病的發(fā)病過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用,炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)是重要的糖尿病相關(guān)炎癥因子,多個(gè)研究提示TNF-α、IL-6參與了糖尿病的發(fā)生。本院自主研發(fā)的黃連降糖片,在以往的臨床研究中證實(shí)具有調(diào)節(jié)糖脂代謝,改善胰島素抵抗的作用[1-2],但其對(duì)2型糖尿病血清炎癥因子是否有影響還未經(jīng)研究證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察黃連降糖片對(duì)T2DM模型大鼠血清IL-6、TNF-α的影響,探討其降糖機(jī)制。

    1 材料

    1.1 動(dòng)物 健康SPF級(jí)SD雄性大鼠120只,體質(zhì)量(200±25)g。購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司,室溫 20~25℃,濕度 50%~65%,每日光照 12 h。

    1.2 藥品與試劑 黃連降糖片(黃連、生地、知母、麥門冬、牡丹皮、酒大黃等,每片包含生藥0.3 g)由開(kāi)封市中醫(yī)院制劑中心提供。鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司提供)。高脂高糖飼料:南京盛民科研動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。鏈脲佐菌素(STZ):美國(guó)Sigma公司。大鼠葡萄糖測(cè)試盒(由上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供),TNF-α、IL-6測(cè)試盒(由南京建成生物工程研究所提供)。羅氏卓越金銳血糖試紙。

    1.3 儀器 奧林巴斯AU400全自動(dòng)生化分析儀,BioTek Cytation3酶標(biāo)儀,羅氏卓越型血糖儀等。

    2 方法

    2.1 造模、分組與給藥 所購(gòu)大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,隨機(jī)分為造模組及空白組。造模組大鼠高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周,禁食12 h,腹腔注射新鮮配制的STZ溶液(45 mg/kg)以誘導(dǎo)T2DM。空白組注射同體積的檸檬酸緩沖液。給藥6 d后,剪尾取血,用血糖儀測(cè)空腹血糖(FBG)值,大于16.7 mmol/L為造模成功。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為:模型組、黃連降糖片9個(gè)不同劑量組(按照成人1次1片-9片,每日3次的服用劑量分組)、陽(yáng)性對(duì)照組(鹽酸二甲雙胍片)。按照人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比值(0.018)計(jì)算大鼠給藥量,最終確定黃連降糖片灌胃給藥量分別為生藥0.081、0.162、0.243、0.324、0.405、0.486、0.567、0.648、0.729 g/kg,陽(yáng)性對(duì)照組予鹽酸二甲雙胍片0.2 g/kg,模型組與空白組給以等劑量的蒸餾水。

    2.2 指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)期間,每周剪尾取血,用血糖儀測(cè)量FBG(禁食12 h,不禁水)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,大鼠禁食12 h后稱體質(zhì)量,以水合氯醛(30 mg/kg)腹腔注射麻醉,大鼠仰臥位固定,沿腹正中線打開(kāi)腹腔,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,3 500 r/min離心15 min,分離血清,置-40℃冰箱保存。采用生化儀測(cè)FBG,酶標(biāo)儀測(cè) TNF-α、IL-6水平。

    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用(x±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    3.1 黃連降糖片對(duì)T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6的影響 灌胃治療4周后,模型組TNF-α、IL-6明顯高于空白組(P<0.05),黃連降糖片不同劑量組,除1片組外,其余劑量組大鼠的TNF-α、IL-6水平均明顯低于模型組(P<0.05)。說(shuō)明糖尿病大鼠存在TNF-α、IL-6的升高,足量的黃連降糖片能降低2型糖尿病大鼠的血清TNF-α、IL-6含量。見(jiàn)表1。

    3.2 不同劑量黃連降糖片對(duì)T2DM大鼠FBG的影響 造模成功后,模型組FBG明顯高于正常組(P<0.05)。造模成功后,黃連降糖片不同劑量組與模型組FBG 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。灌胃1、2、3周后,黃連降糖片除1、2片組外,其余組FBG明顯低于模型組(P<0.05)。灌胃4周后黃連降糖片除1片組外,其余組FBG明顯低于模型組空腹血糖(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    4 討論

    糖尿病患者長(zhǎng)期痰濕不化、血瘀不行,導(dǎo)致炎癥的發(fā)生,隨著炎癥的加劇,一些病理產(chǎn)物如痰瘀等也逐漸增多。炎癥因子既是病理產(chǎn)物又是致病因素,毒邪內(nèi)盛是消渴病及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的基本病理機(jī)制。IL-6和TNF-α是與糖尿病相關(guān)的炎癥因子,其中IL-6可促進(jìn)超敏C-反應(yīng)蛋白等急性時(shí)相蛋白的合成,促進(jìn)炎癥和胰島素抵抗(IR)的發(fā)生,并且在控制體重指數(shù)及體脂含量后,IL-6水平仍然與IR呈正相關(guān),另外IL-6還可誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡,對(duì)β細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)[3]。TNF-α與糖尿病的相關(guān)性主要表現(xiàn)在:TNF-α可減少胰島素受體底物-1(IRS-1)的表達(dá),并抑制IRS-1與胰島素受體結(jié)合;可減少葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT4)的表達(dá),直接導(dǎo)致IR,可促進(jìn)脂解,使游離脂肪酸增加,肌細(xì)胞糖代謝降低,肝糖原合成增多,間接引起IR[4]。祁燕等[5]發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠血清中的 TNF-α、IL-6、C-反應(yīng)蛋白和纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)均明顯高于空白對(duì)照組。邢茂娟等[6]研究表明在肥胖的T2DM患者血漿TNF-α與糖化血紅蛋白呈正相關(guān),血漿IL-6與空腹血糖呈正相關(guān)。崔思遠(yuǎn)等[7]認(rèn)為高血糖可通過(guò)氧化應(yīng)激反應(yīng),促進(jìn)炎癥反應(yīng),增加炎癥因子的分泌,高血糖與炎癥反應(yīng)是相互作用的過(guò)程。

    表1 黃連降糖片不同劑量組對(duì)大鼠TNF-α、IL-6的影響(x±s)Tab.1 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on TNF-α and IL-6 level in rats(x±s)

    表2 黃連降糖片不同劑量組對(duì)大鼠FBG水平的影響(x±s)Tab.2 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on FBG level in rats(x±s)

    黃連降糖片以黃連為君藥,配伍酒大黃、知母、麥門冬、生地、牡丹皮等清熱滋陰、活血化瘀為主的中藥組成,方中的藥物除具有清熱解毒作用外,現(xiàn)代藥理研究還表明其具有抗病原微生物、抗炎、免疫抑制和調(diào)節(jié)血糖等作用。研究發(fā)現(xiàn),黃連素有降低糖尿病患者或糖尿病模型大鼠IL-6、TNF-α的作用[7-8],中藥黃連復(fù)方及加減配伍可通過(guò)抑制炎癥因子(IL-6、TNF-α)的表達(dá)而發(fā)揮降糖作用,如三黃湯[9]、黃連蒼薏四味方及其配伍[10]。本研究顯示,一定量黃連降糖片有顯著降糖作用,且能顯著降低TNF-α、IL-6水平,故證實(shí)黃連降糖片具有較好的抗炎作用,其降糖機(jī)制可能與抗炎作用有關(guān)。

    [1] 閆 鏞,李 霄,李亞歡,等.黃連降糖片干預(yù)糖調(diào)節(jié)受損患者糖脂代謝的臨床研究[J].中醫(yī)研究,2016,29(5):27-30.

    [2] 閆 鏞,王銀珊,李亞歡,等.黃連降糖片干預(yù)糖調(diào)節(jié)受損患者胰島素抵抗的臨床研究[J].四川中醫(yī),2016,34(5):94-96.

    [3] 張黎明,高 凌.炎癥細(xì)胞因子在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué),2016,45(8):1113-1116.

    [4] 王 穎,王興亞.抗炎藥物用于2型糖尿病預(yù)防與治療的研究進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展,2016,40(3):178-188.

    [5] 邢茂娟,袁志剛,張海文,等.Visfatin、LI-6、TNF-α與2型糖尿病的相關(guān)研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,24(29):4908-4911.

    [6] 崔思遠(yuǎn),李 芳.IL-6與2型糖尿病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志,2012,24(11):1051-1054.

    [7] 戴建峰,陳美娟,郭 睿,黃連素對(duì)2型糖尿病大鼠CRP、LI-6、TNF-α、脂聯(lián)素的影響[J].中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué),2014,22(5):34-36.

    [8] 孟曉軍,曾映娟,孔紅娟,等.黃連素對(duì)新診斷2型糖尿病患者內(nèi)皮功能、白介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國(guó)慢性病預(yù)防與控制,2011,19(5):504-508.

    [9] 葉麗芳,王 旭,尚文斌,等.三黃湯對(duì)肥胖2型糖尿病胰島素抵抗和炎癥因子的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(7):289-292.

    [10]翁 捷,頓文亮.黃連蒼薏四味方及其配伍對(duì)2型糖尿病大鼠血糖、血脂及血清炎性因子水平的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2017,26(1):18-20.

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