基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的“金銀花-板藍(lán)根”藥對作用機(jī)制研究Δ

吳嘉瑞，藺夢娟，劉鑫馗

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102)

“金銀花-板藍(lán)根”藥對為清開靈注射液中的重要藥物組合。金銀花為甘寒之品，能清熱解毒、疏散風(fēng)熱，善清肺、心、胃之熱毒，有透熱達(dá)表、透營轉(zhuǎn)氣之功；板藍(lán)根苦寒，入心、胃經(jīng)，善清熱解毒、涼血利咽[1-2]。以往對中藥的作用機(jī)制研究多采用動物實驗、細(xì)胞實驗等方法對其某一作用機(jī)制進(jìn)行研究，難以獲得中藥作用機(jī)制網(wǎng)絡(luò)的整體面貌。近年來，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)融合系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)、生物信息學(xué)和計算機(jī)科學(xué)等多學(xué)科的技術(shù)和內(nèi)容，進(jìn)行“疾病表型-基因-靶點-藥物”等多層次網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，探索藥物與疾病間的關(guān)聯(lián)性，指導(dǎo)新藥研發(fā)，闡明藥物作用機(jī)理，其整體性、系統(tǒng)性及復(fù)雜性的研究視角和研究方法，與中醫(yī)藥的特點不謀而合[3]。因此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，通過構(gòu)建“金銀花-板藍(lán)根”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”多層次生物網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合基因功能注釋和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析，開展清開靈注射液的作用機(jī)制研究。

1 資料與方法

1.1 藥物分子信息的收集和活性分子的篩選

通過檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP)(http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php)數(shù)據(jù)庫獲得金銀花和板藍(lán)根的分子信息，包括分子名稱、InChI Key、相對分子質(zhì)量(molecular weight，WM)、辛醇-水分配系數(shù)(ALogP)、氫鍵配位電子供體數(shù)目(Hdon)、氫鍵配位電子受體數(shù)目(Hacc)、可旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)目(RBN)、分子極性表面積(TPSA)、類藥性(drug-likeness，DL)、血-腦脊液屏障(blood brain barrier，BBB)、半衰期(half life，HL，t1/2)和分子結(jié)構(gòu)。其中，考慮到含糖基的化合物在體內(nèi)可能通過糖苷酶水解作用被去糖基，TCMSP數(shù)據(jù)庫中也收錄了這些化合物的糖苷配基，并將其命名為“化合物_qt”，因此，所獲得兩者的藥物分子中可能也包括這些化合物的糖苷配基[4]。中藥成分復(fù)雜，經(jīng)過制劑工藝和體內(nèi)過程，并非所有成分均能進(jìn)入體內(nèi)發(fā)揮藥效；考慮中藥注射劑的劑型特點，結(jié)合對藥物體內(nèi)過程相關(guān)性質(zhì)的預(yù)測，篩選可能功效物質(zhì)和活性分子。在TCMSP平臺中，設(shè)置參數(shù)ALogP<5和DL≥0.18作為篩選條件。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[3]，在板藍(lán)根中補(bǔ)充腺苷這一成分，通過檢索中藥綜合數(shù)據(jù)庫(traditional Chinese medicine integrated database，TCMID)(http://www.megabionet.org/tcmid/search/)并鏈接到PubChem Compound數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pccompound)獲得相應(yīng)分子信息，包括分子名稱、InChI Key、WM、辛醇-水分配系數(shù)(XLogP3)、Hdon、Hacc、RBN、TPSA和分子結(jié)構(gòu)。

1.2 分子互作靶標(biāo)和疾病信息的收集及靶標(biāo)相應(yīng)基因的獲取

檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫獲得金銀花、板藍(lán)根所預(yù)測活性分子的靶標(biāo)；根據(jù)所獲靶標(biāo)，進(jìn)一步檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫獲得靶標(biāo)相關(guān)的疾病。另外，板藍(lán)根中腺苷對應(yīng)的靶標(biāo)和疾病通過TCMID數(shù)據(jù)庫獲得。靶標(biāo)相應(yīng)基因通過Uniprot(http://www.uniprot.org/)獲取，檢索Uniprot中的UniprotKB數(shù)據(jù)庫，檢索式為“organism：‘homo sapiens’ AND reviewed：yes”。將檢索結(jié)果以Excel格式導(dǎo)出，即獲得UniprotKB/Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫中人類的相關(guān)靶蛋白及其對應(yīng)基因的記錄。利用Excel軟件的“VLOOKUP”函數(shù)匹配所獲得靶標(biāo)對應(yīng)的基因信息。非蛋白質(zhì)的靶標(biāo)或其他致病菌中的靶標(biāo)，通過檢索NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)或者利用多種搜索引擎檢索獲得。

1.3 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與網(wǎng)絡(luò)分析

將“金銀花-板藍(lán)根”的藥物、成分、作用靶標(biāo)和相關(guān)疾病導(dǎo)入Cytoscape 3.4.0軟件(http://www.cytoscape.org/)構(gòu)建其“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，然后利用Cytoscape 3.4.0軟件的NetworkAnalyzer工具計算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括度值(Degree)、介數(shù)(betweenness centrality，BC)等[4-6]。在生物網(wǎng)絡(luò)中，Degree指一個節(jié)點與其他節(jié)點相連的邊的數(shù)目[7]；BC指網(wǎng)絡(luò)所用的最短路徑中經(jīng)過當(dāng)前節(jié)點的數(shù)目，反映節(jié)點在特定網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中所處位置的樞紐程度[8]。利用節(jié)點Degree及BC排序確定網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點是目前網(wǎng)絡(luò)分析的主要策略之一[7]。因此，本研究采用該網(wǎng)絡(luò)分析方法，確定關(guān)鍵節(jié)點，探討“金銀花-板藍(lán)根”的主要作用靶標(biāo)、主治疾病及其作用機(jī)制。

1.4 基因本體(gene ontology，GO)分類富集分析

GO是主要為了統(tǒng)一表征所有物種的基因及基因產(chǎn)物的性質(zhì)而發(fā)起的生物信息學(xué)計劃[9]。GO數(shù)據(jù)庫(www.geneontology.org)旨在建立一套適用于所用物種的、對基因和蛋白質(zhì)功能進(jìn)行限定和描述的、并能隨著研究不斷深入而更新的語義詞匯標(biāo)準(zhǔn)。GO有3個分類：(1)分子功能(molecular function，MF)，描述基因產(chǎn)物在分子生物學(xué)上的活性，如催化活性或結(jié)合活性；(2)生物學(xué)過程(biological process，BP)，指由分子功能有序組成的，具有多個步驟的一個過程；(3)細(xì)胞組分(cell component，CC)，指基因產(chǎn)物位于何種細(xì)胞器或基因產(chǎn)物組中(如糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核或核糖體及蛋白酶體等)，表明基因產(chǎn)物在什么地方起作用。GO的結(jié)構(gòu)是個有向無環(huán)圖，每個語義多在自己的類別中與其他語義相關(guān)聯(lián)，有時會與其他類別的語義相關(guān)聯(lián)；語義之間的關(guān)系為“is a”或“part of”。利用Cytoscape 3.4.0軟件Apps中的BiNGO 3.0.3對“金銀花-板藍(lán)根”藥對對應(yīng)的基因分別進(jìn)行GO分類富集分析[10-11]。BiNGO Settings面板的參數(shù)設(shè)置如下：簇名分別命名為“DZ-MF”“DZ-BP”和“DZ-CC”；選擇“paste genes from text”，將基因名稱復(fù)制粘貼到輸入框中，每個基因單獨(dú)占一行；輸出內(nèi)容和方式依次選擇“overrepresentation”“visualization”和“overrepresented categories after correction”，參照集合選擇“use whole annotation as reference set”，物種選擇“Homo Sapiens”，以Cytoscape層次網(wǎng)絡(luò)圖形式輸出該基因集合相較于人類基因組比例更高的GO分類注釋；選擇“Hypergeometric test”的統(tǒng)計方法和“Benjamini & Hochberg False Discovery Rate(FDR)correction”的P校正法，設(shè)置顯著性水平為P<0.01；分別選擇“GO_Molecular_Function”“GO_Cellular_Component”和“GO_Biological_Process”進(jìn)行GO-MF、GO-CC和GO-BP的富集分析。

1.5 KEGG通路富集分析

利用DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(the Database for Annotation，Visualization and Integrated Discovery，https://david.ncifcrf.gov/)進(jìn)行通路富集分析[12]。在DAVID的基因列表通用管理面板中復(fù)制粘貼基因列表，選擇基因名稱對應(yīng)的基因標(biāo)示符“OFFICIAL_GENE_SYMBOL”，提交基因列表；為所提交的基因列表選擇對應(yīng)的物種“Homo Sapiens”，背景也選擇“Homo Sapiens”，即以人類全基因組為背景基因和參照集合。選擇分析工具“Functional Annotation Tool”，采用默認(rèn)的閾值EASE=0.1 and Count=2(EASE Score的閾值指最大P，Count的閾值指與某一通路相關(guān)的基因數(shù)目的最小值，統(tǒng)計檢驗基于modified Fisher Exact法)，可獲得通路富集結(jié)果，點擊鏈接可以查看KEGG數(shù)據(jù)庫(http://www.genome.jp/kegg/pathway.html)中對應(yīng)的通路圖及其詳情。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)成分分子信息分析

“金銀花-板藍(lán)根”藥對共篩選出92個藥物分子，主要包括黃酮類、綠原酸類化合物、吲哚/喹唑酮/喹啉/異喹啉生物堿類、環(huán)烯醚萜苷類、芥子苷類和木脂素類等。其中，64個(占69.6%)分子符合“Lipinski’s rule of five”；21個分子的BBB>-0.3且TPSA<90?2，分別為C0006(Ineketone)、C0010(靛藍(lán))、C0011[2-(2,4-dimethoxyphenyl)-3-hydroxy-7-methoxy-chromone]、C0012[(2Z)-2-(2-oxoindolin-3-ylidene)indolin-3-one]、C0017(刺槐素)、C0021[6-(3-oxoindolin-2-ylidene)indolo[2,1-b]quinazolin-12-one]、C0024[5-hydroxy-7-methoxy-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)chromone]、C0025(DFV)、C0028(Sinoacutine)、C0030(松脂醇)、C0031[2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxy-chromone]、C0038[(E)-3-(3,5-dimethoxy-4-hydroxy-benzylidene)-2-indolinone]、C0042{(E)-2-[(3-indole)cyanomethylene-]-3-indolinone}、C0060(甜橙黃酮)、C0061(Crysophanol)、C0064(Flavone der.)、C0065{3-[(3,5-dimethoxy-4-oxo-1-cyclohexa-2,5-dienylidene)methyl]-2,4-dihydro-1H-pyrrolo[2,1-b]quinazolin-9-one}、C0069(secologanic dibutylacetal_qt)、C0084(quindoline)、C0097[(E)-3-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyb-enzylidene)]和C0101(色胺酮)，提示這21個分子可能具有一定的BBB穿透性。利用SPSS 20.0軟件對“金銀花-板藍(lán)根”藥對91個藥物分子(不包括腺苷，即C0072)的分子信息進(jìn)行統(tǒng)計描述，結(jié)果顯示，91個藥物分子的均值符合“Lipinski’s rule of five”，且DL≥0.18，見表1；同時，腺苷(C0072)也符合“Lipinski’s rule of five”，說明92個藥物分子總體具有較好的DL。

表1 “金銀花-板藍(lán)根”藥對91個藥物分子(腺苷除外)的 分子信息統(tǒng)計結(jié)果 Tab 1 Statistical results of information of the 91 drug molecules(except for adenosine)of “l(fā)onicerae japonica-radix isatidis” herb couple

2.2 “藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)分析

“金銀花-板藍(lán)根”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)見圖1，該網(wǎng)絡(luò)圖含有1 368個節(jié)點(2個藥物，92個成分，665個靶標(biāo)，609種疾病)和2 469條邊線，節(jié)點大小、節(jié)點名稱字號大小與Degree呈正相關(guān)，連線粗細(xì)與EdgeBetweenness呈正相關(guān)。采用Degree和BC排序確定關(guān)鍵節(jié)點，網(wǎng)絡(luò)中Degree≥20的成分、靶標(biāo)和Degree≥5疾病節(jié)點見表2。由圖1、表2可見，在“金銀花-板藍(lán)根”藥對網(wǎng)絡(luò)中：(1)Degree≥20的化合物分子共16個(占17.4%)，其中腺苷、槲皮素和芹菜素的Degree分別為439、151和82，遠(yuǎn)高于其他化合物節(jié)點，可能為網(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵節(jié)點。(2)Degree≥20的關(guān)鍵靶標(biāo)24個(占3.6%)，包括前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(prostaglandin G/H synthase 2，COX-2)、熱休克蛋白90α(heat shock protein HSP 90-alpha，HSP86)、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(prostaglandin G/H synthase 1，COX-1)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ)、凝血酶原、二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4，DPP-4)、雄激素受體、5-脂氧合酶(arachidonate 5-lipoxygenase，5-LOX)、β2腎上腺素能受體、雌激素受體(estrogen receptor，ER)、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶2α、凝血因子X、蛋白激酶A催化亞基C-α(mRNA of PKA catalytic subunit C-alpha，PKA C-α)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸-3-激酶催化亞基γ亞型(phosphatidylinositol 4,5-bisp-hosphate 3-kinase catalytic subunit gamma isoform，PI3K-γ)、胰蛋白酶-1、細(xì)胞核受體共激活劑2(nuclear receptor coactivator 2，NCoA-2)、鈣調(diào)蛋白(calmodulin，CaM)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase，inducible，iNOS)、鈉通道蛋白5型亞基α(sodium channel protein type 5 subunit alpha，SCN5A)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶3(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2(cyclin-dependent kinase 2，CDK2)、碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2，CA-Ⅱ)和絲裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase 14，MAPK 14)。(3)Degree≥5的疾病23種(占3.8%)，包括惡性腫瘤、乳腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、實體瘤、非小細(xì)胞肺癌及肺癌等腫瘤，心血管疾病、高血壓病、心力衰竭及心肌梗死等循環(huán)系統(tǒng)疾病，非胰島素依賴型糖尿病、肥胖等代謝性疾病，阿爾茨海默病、帕金森病等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，精神分裂癥、焦慮癥等精神行為障礙，哮喘、炎癥、瘧疾、疼痛及骨關(guān)節(jié)炎等。

圖1 “金銀花-板藍(lán)根”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò) Fig 1 “Drug-composition-target-disease” network of “l(fā)onicerae japonica-radix isatidis” herb couple

2.3 GO分類富集分析

通過BiNGO獲得了“金銀花-板藍(lán)根”藥對的基因集合中645個基因的分子功能注釋信息，641個基因的細(xì)胞組分注釋信息，638個基因的生物學(xué)過程注釋信息。進(jìn)一步對以上基因注釋信息進(jìn)行分類富集分析：(1)GO-MF獲得235條富集結(jié)果，其層次網(wǎng)絡(luò)見圖2(節(jié)點大小代表基因數(shù)量多少，顏色深淺代表P大小)，主要涉及跨膜受體活性、G-蛋白耦連受體活性、分子傳感器活性、受體活性、受體結(jié)合、蛋白結(jié)合、嘌呤核苷酸 結(jié)合、腺嘌呤核苷酸結(jié)合、酶結(jié)合、ATP結(jié)合和催化活性等方面；(2)GO-CC獲得78條富集結(jié)果，其層次網(wǎng)絡(luò)見圖3(節(jié)點大小代表基因數(shù)量多少，顏色深淺代表P大小)，主要涉及細(xì)胞膜固有組分、細(xì)胞膜必需組分、細(xì)胞膜、細(xì)胞外間隙、細(xì)胞外區(qū)域、細(xì)胞碎片、不溶性碎片、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體等方面；(3)GO-BP獲得1 367條富集結(jié)果，其層次網(wǎng)絡(luò)過于復(fù)雜龐大，未在文中表示，僅列出其中P<0.01且基因數(shù)量百分比≥10.0%的前20條注釋信息，主要涉及細(xì)胞表面受體相關(guān)信號通路、化學(xué)刺激響應(yīng)、信號通路、信號傳遞、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、生物過程、細(xì)胞過程、多細(xì)胞生物過程、生物過程調(diào)控、細(xì)胞過程調(diào)控、發(fā)育過程、代謝過程、細(xì)胞代謝過程、初級代謝過程、代謝過程調(diào)控和多細(xì)胞代謝過程調(diào)控等方面，見表3。

表2 “金銀花-板藍(lán)根”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病” 網(wǎng)絡(luò)節(jié)點及其參數(shù)(分子和靶標(biāo)節(jié)點Degree≥20，疾病 節(jié)點Degree≥5) Tab 2 Nodes and parameters of “drug-composition- target-disease” network of “l(fā)onicerae japonica-radix isatidis” herb couple(Degree of molecules and targets nodes ≥20, degree of diseases nodes ≥5)

2.4 KEGG通路富集分析

利用DAVID數(shù)據(jù)庫對“金銀花-板藍(lán)根”藥對的基因集合進(jìn)行KEGG通路富集分析，閾值參數(shù)設(shè)置為EASE=0.05，Count=10，共獲得137條富集結(jié)果。其中EASE<0.05，Count≥10，F(xiàn)DR<0.01的前20條通路主要包括5條信號傳導(dǎo)相關(guān)通路，1條代謝通路，7條生物系統(tǒng)相關(guān)通路(涉及免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、感覺系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng))和7條疾病通路(腫瘤和感染性疾病)，具體為神經(jīng)活性配體-受體相互作用通路、環(huán)磷腺苷信號通路、鈣離子信號通路、環(huán)磷鳥苷-蛋白激酶G信號通路、TNF信號通路、嘌呤代謝通路、趨化因子信號通路、脂肪細(xì)胞脂解作用調(diào)控通路、雌激素信號通路、催產(chǎn)素信號通路、唾液分泌通路、瞬時受體電位通道的炎癥介質(zhì)調(diào)控通路、心肌細(xì)胞的腎上腺素能信號通路、惡性腫瘤通路、乙型肝炎通路、胰腺癌通路、前列腺癌通路、美洲錐蟲病通路、膀胱癌通路和神經(jīng)膠質(zhì)瘤通路，見表4。

3 討論

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究策略具有整體性、系統(tǒng)性的特點，這與中醫(yī)藥整體觀與辨證論治的原則不謀而合[13]，已有諸多研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法進(jìn)行中藥潛在活性成分和作用靶點的預(yù)測及中藥作用機(jī)制的闡述[14-17]。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，構(gòu)建了“金銀花-板藍(lán)根”藥對的“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，從整體角度體現(xiàn)出了“金銀花-板藍(lán)根”藥對多成分、多靶標(biāo)和多途徑的治療機(jī)制。進(jìn)一步通過網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，發(fā)現(xiàn)該網(wǎng)絡(luò)同樣具備部分無標(biāo)度、小世界的網(wǎng)絡(luò)特性，說明網(wǎng)絡(luò)中存在關(guān)鍵節(jié)點。

網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點分析結(jié)果表明，“金銀花-板藍(lán)根”藥對中的活性成分可能通過調(diào)控某些關(guān)鍵靶標(biāo)而對多種疾病發(fā)揮治療作用。與炎癥、腫瘤密切相關(guān)的靶標(biāo)COX-2的Degree為96，遠(yuǎn)高于其他靶點節(jié)點，推測“金銀花-板藍(lán)根”藥對可能通過調(diào)控關(guān)鍵靶標(biāo)COX-2對多種炎癥、疼痛和腫瘤等疾病中發(fā)揮作用，這與已有研究結(jié)果一致。COX-2是花生四烯酸代謝過程中調(diào)節(jié)前列腺素合成的限速酶，主要引起炎癥反應(yīng)。王萍等[18]研究表明，金銀花能抑制前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)、TNF-α過表達(dá)，減輕宮頸黏膜壞死程度，對大鼠宮頸炎具有一定療效。另外，金銀花提取物能抑制PGE2的合成或釋放，提示金銀花提取物的抗炎作用可能與其抑制COX-2的活性，進(jìn)而阻滯炎性介質(zhì)前列腺素的合成與釋放有關(guān)[19]。板藍(lán)根70%乙醇提取部位在抗炎、鎮(zhèn)痛活性上均顯示出較強(qiáng)的作用，其機(jī)制可能與抑制炎性因子PGE2及TNF-α釋放有關(guān)[20]。

圖2 “金銀花-板藍(lán)根”藥對相應(yīng)基因GO分子功能分類的層次網(wǎng)絡(luò) Fig 2 Hierarchical network of GO classified molecular function of “l(fā)onicerae japonica-radix isatidis” herb couple related genes

圖3 “金銀花-板藍(lán)根”藥對相應(yīng)基因GO細(xì)胞組分分類的層次網(wǎng)絡(luò) Fig 3 Hierarchical network of GO classified cellular compositions of “l(fā)onicerae japonica-radix isatidis” herb couple related genes

表4 “金銀花-板藍(lán)根”藥對相應(yīng)基因KEGG通路富集分析(EASE<0.05，Count≥10，F(xiàn)DR<0.01的前20條通路) Tab 4 KEGG pathway enrichment analysis of “l(fā)onicerae japonica-radix isatidis” herb couple related genes(the first 20 pathways with EASE<0.05, Count≥10 and FDR<0.01)

“金銀花-板藍(lán)根”藥對的KEGG通路富集結(jié)果表明，其絕大部分基因富集在與惡性腫瘤直接相關(guān)的信號通路上，包括惡性腫瘤通路、胰腺癌通路、前列腺癌通路、膀胱癌通路及神經(jīng)膠質(zhì)瘤通路等，提示“金銀花-板藍(lán)根”藥對可能會在多種惡性腫瘤的治療方面發(fā)揮一定的作用。另有多數(shù)基因富集在與心臟活動密切相關(guān)的信號通路上，如環(huán)磷腺苷信號通路、鈣離子信號通路、環(huán)磷鳥苷-蛋白激酶G信號通路及心肌細(xì)胞的腎上腺素能信號通路，且結(jié)合之前“藥物-成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點的分析結(jié)果，心力衰竭、心肌梗死和高血壓病等心血管疾病為該藥對生物網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵疾病節(jié)點，推測心臟可能是“金銀花-板藍(lán)根”藥對作用的靶器官，這與中醫(yī)藥中金銀花、板藍(lán)根均入心經(jīng)的特點不謀而合，同時表明“金銀花-板藍(lán)根”藥對可能通過上述信號通路在心血管疾病中發(fā)揮治療作用，值得進(jìn)一步研究。

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