慢性蕁麻疹患者血清IL-17 IL-23 TGF-β水平檢測(cè)分析*

何沅莉，單 葵，曹雨微，陳 偉（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科，重慶400016）

慢性蕁麻疹（CU）是皮膚科常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病，因反復(fù)發(fā)作伴劇烈瘙癢，常嚴(yán)重影響患者正常工作和生活。其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，可能與免疫功能異常相關(guān)。有研究表明，輔助性T細(xì)胞（Th17）與部分自身免疫疾病有關(guān)[1]。本研究擬通過檢測(cè)與Th17細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素-17（IL-17）、IL-23、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β（TGF-β）]水平，探討 Th17細(xì)胞在 CU 中的診斷作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 選取2015年7月至2016年11月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科收治的72例CU患者作為觀察組，其中男35例，女37例；年齡19～57歲，平均（39.16±10.27）歲。另選取健康體檢者20例作為對(duì)照組，其中男 10例，女 10例；年齡 25～53歲，平均（38.43±9.87）歲。兩組研究對(duì)象性別、年齡等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）風(fēng)團(tuán)反復(fù)發(fā)作6周以上，且每周至少2次或2 d癥狀發(fā)作。（2）排除其他物理性蕁麻疹。（3）無嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病，并在4周內(nèi)未使用過糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑，7 d內(nèi)未使用過抗組胺藥物治療。

1.1.2 試劑與儀器 IL-17酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒、IL-23 ELISA試劑盒、TGF-β ELISA試劑盒均選購自依科賽生物科技（大倉）有限公司，采用Spectra-Max plus384酶標(biāo)檢測(cè)。

1.2 方法 采集研究對(duì)象肘靜脈約5 mL置于肝素鈉抗凝管中，留取標(biāo)本30 min內(nèi)分離血漿，1 500 r/min離心8 min，用移液槍將血清移至EP管中，將EP管編號(hào)，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?，按照試劑盒說明書，采用雙抗體夾心ELISA測(cè)定血清中IL-17、IL-23、TGF-β水平，嚴(yán)格按照試劑盒的操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)分析變量滿足正態(tài)分布時(shí)采用Pearson直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清樣本中 IL-17、IL-23、TGF-β水平比較 觀察組患者血清 IL-17、IL-23、TGF-β水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 兩組血清樣本中 IL-17、IL-23、TGF-β 水平比較（±s）

表1 兩組血清樣本中 IL-17、IL-23、TGF-β 水平比較（±s）

注：-表示無此項(xiàng)

組別 IL-17（pg/mL）觀察組對(duì)照組IL-23（pg/mL）23.85±19.76 9.66±2.49 5.605 0.000 n 72 20 tP--3.32±1.27 1.89±0.74 6.232 0.000 TGF-β（ng/mL）39.95±17.90 25.55±12.77 3.362 0.001

2.2 觀察組患者IL-17、IL-23、TGF-β三者間相關(guān)性分析 觀察組患者IL-17、IL-23、TGF-β三者間無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。見表 2。

表2 觀察組患者IL-17、IL-23、TGF-β三者間相關(guān)性分析

3 討 論

CU主要表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的風(fēng)團(tuán)和（或）血管性水腫，常伴明顯瘙癢，病程超過6周。CU可見于任何年齡，多發(fā)于20～40歲青年人，超過1/2的CU患者伴中度以上瘙癢，1/5患者可伴血管性水腫，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2]。CU病因復(fù)雜，可能病因?yàn)榧毙耘c慢性感染，食物、藥物過敏及自身免疫異常等。有研究發(fā)現(xiàn)，CU患者血清中不僅存在甲狀腺自身抗體，同時(shí)存在抗高親和力血清免疫球蛋白E（IgE）受體自身抗體和功能性IgE抗體[3-4]，越來越多學(xué)者認(rèn)為，CU為自身免疫性疾病。而KRYCZEK等[5]發(fā)現(xiàn)，Th1和Th17細(xì)胞可協(xié)同作用于人類自身免疫性疾病。本研究擬通過檢測(cè)與Th17細(xì)胞密切相關(guān)的IL-17、IL-23、TGF-β水平，探討Th17細(xì)胞在CU的診斷作用。

TGF-β是單核-巨噬細(xì)胞分泌的具有多種生物活動(dòng)的多肽調(diào)節(jié)因子，在機(jī)體免疫防御中有重要作用。初始CD4+T細(xì)胞接受抗原刺激后，在血清中TGF-β單獨(dú)存在的條件下被誘導(dǎo)分化為Treg細(xì)胞，在TGF-β和IL-6共同存在的條件下被誘導(dǎo)分化為Th17細(xì)胞[6]。目前，國內(nèi)外對(duì)TGF-β與CU的關(guān)系鮮有報(bào)道。TAVAKOL等[7]觀察到TGF-β基因的遺傳變異與CU的發(fā)病有關(guān)，而CU患者基因型傾向于高產(chǎn)TGF-β。本研究發(fā)現(xiàn)，CU患者血清中TGF-β水平明顯高于對(duì)照組，從側(cè)面證實(shí)了的 TAVAKOL 等[7]的研究結(jié)果。ALASANDAGUTTI等[8]、KASPERSKA-ZAJAC等[9]觀察到CU患者血清中IL-6及IL-6受體水平明顯升高?？赏茰y(cè)TGF-β通過誘導(dǎo)初始CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞參與了CU的發(fā)生。

IL-23是巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，是Th17細(xì)胞產(chǎn)生過程中的關(guān)鍵性細(xì)胞因子，對(duì)其存活及功能維持起至關(guān)重要作用，而對(duì)Treg細(xì)胞則具有抑制作用[10-12]。有研究顯示，一些自身免疫性疾病的發(fā)病與IL-23的升高有關(guān)，如銀屑病、皮肌炎、炎癥性腸病等[13-15]。IL-23主要通過維持Th17細(xì)胞功能及誘導(dǎo)IL-17的產(chǎn)生，從而促進(jìn)炎性反應(yīng)的發(fā)生[16-17]。IL-17由Th17細(xì)胞分泌，可以通過NF-кB通路刺激上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生前列腺素E2、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子和趨化因子，直接或間接引起變態(tài)反應(yīng)。同時(shí)，IL-17可以與腫瘤壞死因子α、干擾素γ等產(chǎn)生協(xié)同作用以放大炎性反應(yīng)，誘導(dǎo)自身免疫性疾病和慢性過敏性疾病的發(fā)生[18]。在健康人的血清中可以檢測(cè)到低水平的IL-17、IL-23，而在一些變態(tài)反應(yīng)性疾病中卻顯著增加，如變應(yīng)性鼻炎[19]、特應(yīng)性皮炎[20]等，其外周血中Th17細(xì)胞IL-17水平均高于健康對(duì)照組，且與疾病的嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。而ATWA等[21]也發(fā)現(xiàn)，CU患者血清中IL-17、IL-23水平高于對(duì)照組，且與疾病嚴(yán)重程度成正比，與本研究結(jié)果相符。

綜上所述，Th17 細(xì)胞通過 IL-17、IL-23、TGF-β 3 種細(xì)胞因子參與了CU的發(fā)病過程，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CU患者用藥前后3種因子及Th17細(xì)胞的變化，也許將來可以此作為靶點(diǎn)為CU的治療提供新的方向或?qū)⑵溆米髋袛郈U的預(yù)后。本研究也存在一些缺陷，如未對(duì)觀察組進(jìn)行病情程度分級(jí)并分析其是否與3種因子存在相關(guān)性，兩組人數(shù)差距大，大多數(shù)患者既往用藥不詳，不能徹底排除藥物對(duì)IL-17、IL-23、TGF-β的影響等，有待今后擴(kuò)大樣本進(jìn)一步深入研究。

[1]丁潔，游晶，劉懷鄂，等.IL-17、Foxp3+Treg和 IL-17+Foxp3+T細(xì)胞在自身免疫性疾病中的作用[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2016，36（6）：496-499.

[2]羅婕，宋志強(qiáng)，鐘華，等.535例慢性蕁麻疹臨床流行病學(xué)特征分析[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33（22）：2421-2424.

[3]GREAVES MW.Chronic idiopathic urticariab[J].Curr Opin Allergy Clin Immunol，2003，3（5）：363-368.

[4]MIESCHER SM，HORN MP，PACHLOPNIK JM，et al.Natural anti-Fcepsilon RIalpha autoantibodies isolated from healthy donors and chronic idiopathic urticaria patients reveal a restricted repertoire and autoreactivity on human basophils[J].Hum Antibodies，2001，10（3/4）：119-126.

[5]KRYCZEK I，BRUCE AT，GUDJONSSON JE，et al.Induction of IL-17+T cell trafficking and development by IFN-gamma：mechanism and pathological relevance in psoriasis[J].J Immunol，2008，181（7）：4733-4741.

[6]BETTELLI E，CARRIER Y，GAO W，et al.Reciprocal developmental pathways for the Generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells[J].Nature，2006，441（790）：235-238.

[7]TAVAKOL M，MOVAHEDI M，AMIRZARGAR AA，et al.Association of interleukin 10 and transforming growth factor β gene polymorphisms with chronic idiopathic urticaria[J].Acta Dermatovenerol Croat，2014，22（4）：239-245.

[8]ALASANDAGUTTI ML，PONNANA M，SIVANGALA R，et al.Role of IFN-γ and IL-6 cytokines and their association in determining susceptibility to chronic idiopathic urticaria[J].GenetTestMol Biomarkers，2014，18（12）：804-809.

[9]KASPERSKA-ZAJAC A，GRZANKA A，DAMASIEWICZ-BODZEK A.IL-6 transsignaling in patients with chronic spontaneous urticaria[J].PLoS One，2015，10（12）：e0145751.

[10]ZHOU L，LOPES JE，CHONG MM，et al.TGF-beta-induced Foxp3 inhibits T（H）17 cell differentiation by antagonizing RORgammat function[J].Nature，2008，453（7192）：236-240.

[11]ICHIYAMA K，YOSHIDA H，WAKABAYASHI Y，et al.Foxp3 inhibits RORgammat-mediated IL-17A mRNA transcription through direct interaction with RORgammat[J].J Biol Chem，2008，283（25）：17003-17008.

[12]IZCUE A，HUE S，BUONOCORE S，et al.Interleukin-23 restrains regulatory T cell activity to drive T cell-dependent colitis[J].Immunity，2008，28（4）：559-570.

[13]BEYER BM，INGRAM R，RAMANATHAN L，et al.Crystal structures ofthepro-inflammatorycytokineinterleukin-23anditscomplexwithahighaffinity neutralizing antibody[J].J Mol Biol，2008，382（4）：942-955.

[14]BRENTANO F，OSPELT C，STANCZYK J，et al.Abundant expression of the interleukin（IL）23 subunit p19，but low levels of bioactive IL23 in the rheumatoid synovium：differential expression and Toll-like receptor-（TLR）dependent regulation of the IL23 subunits，p19 and p40，in rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis，2009，68（1）：143-150.

[15]SHEN H，XIA L，LU J，et al.Interleukin-17 and interleukin-23 in patients with polymyositis and dermatomyositis[J].Scand J Rheumatol，2011，40（3）：217-220.

[16]LANGRISH CL，CHEN Y，BLUMENSCHEIN WM，et al.IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation[J].J Exp Med，2005，201（2）：233-240.

[17]IWAKURA Y，ISHIGAME H.The IL-23/IL-17 axis in inflammation[J].J Clin Invest，2006，116（5）：1218-1222.

[18]寧靜，白莉.慢性蕁麻疹患者血清中IL-17和IL-33的表達(dá)及意義[J/CD].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2016，10（4）：525-528.

[19]李良波，譚君武，彭洪，等.變應(yīng)性鼻炎患者血清IL-17和IL-23的表達(dá)及臨床意義[J].中國免疫學(xué)雜志，2015，31（2）：247-249.

[20]曾碧冰，陳明春，王魯梅，等.特應(yīng)性皮炎患者外周血白介素-17和白介素-23 水平的檢測(cè)[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2014，14（6）：751-752.

[21]ATWAMA，EMARAAS，YOUSSEFN，etal.SerumconcentrationofIL-17，IL-23 and TNF-α among patients with chronic spontaneous urticaria：association with disease activity and autologous serum skin test[J].J Eur Acad Dermatol Venereol，2014，28（4）：469-474.