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    非洲豬瘟研究進展

    2018-02-26 13:31:16商雨溫國元趙宗正張文婷張騰飛羅青平邵華斌
    湖北畜牧獸醫(yī) 2018年12期
    關鍵詞:非洲豬瘟病毒檢測臨床癥狀

    商雨 溫國元 趙宗正 張文婷 張騰飛 羅青平 邵華斌

    摘要:近些年,非洲豬瘟(African swine fever,ASF)在世界范圍內(nèi)的很多地區(qū)肆虐,每年給全世界的養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的損失。ASF的防控依舊是個世界性的難題,目前尚無對抗ASF的疫苗和藥物,疫病防控依賴于封鎖隔離。就ASF的病原、臨床癥狀、病毒檢測、流行病學、免疫逃逸和疫苗研發(fā)進展進行了簡要介紹,旨在為ASF的防控提供理論參考。

    關鍵詞:非洲豬瘟;臨床癥狀;病毒檢測;流行病學;免疫逃逸;疫苗

    中圖分類號:S858.28? ? ? ? 文獻標識碼:A? ? ? ? 文章編號:1007-273X(2018)12-0016-03

    ASF是豬的一種急性、接觸傳染性和高致死性傳染病,其病原是非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)。ASF每年給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失,被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)分為A類疾病以及法定報告動物疫病[1]。依據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》,我國將ASF列為一類動物傳染病。現(xiàn)對ASF的研究進展作一綜述,為ASF的防控提供參考。

    1? ASF的病原

    ASFV屬于非洲豬瘟病毒科(Asfarviridae)非洲豬瘟病毒屬(Asfarvirus)的惟一成員。病毒粒子具有正二十面體的結(jié)構,直徑約200 nm。位于病毒粒子正中間的是包含病毒基因組的病毒核心,在病毒核心的外圍包裹著一層厚的衣殼。衣殼有三層結(jié)構,在衣殼的兩側(cè)各有一個脂質(zhì)膜,中間為蛋白衣殼[2]。病毒粒子上含有大于50種病毒編碼的蛋白,涉及到病毒基因轉(zhuǎn)錄、DNA修復、蛋白修飾、病毒入侵和免疫逃逸相關的酶和因子[3]。另外,在病毒粒子上還存在大量的宿主蛋白,其中一些位于囊膜上的宿主蛋白可能與病毒的出芽相關 [3]。病毒的基因組是單股雙鏈線性DNA,長度在170~190 kb范圍內(nèi),包含151~167個開放閱讀框(Open reading frames,ORFs)[4,5]。

    2? ASF的臨床癥狀和剖檢病變

    2.1? ASF的臨床癥狀

    不同ASFV毒株的毒力強弱不同,感染后引發(fā)的癥狀也有差異,根據(jù)癥狀可以將ASF分為急性型、亞急性型、緩慢型和隱性帶毒型[6]。急性ASF的臨床癥狀為高熱,體溫可升至40.5~42.0 ℃;發(fā)病及死亡率高,病死率可以達到100%;耳、四肢腹背部皮膚有出血點;嘔吐,腹瀉或便秘,糞便帶血。有些最急性的ASF可能不產(chǎn)生任何臨床癥狀而突然死亡。亞急性型和緩慢型ASF臨床癥狀要緩和一些,發(fā)病豬出現(xiàn)虛弱、步態(tài)僵直和不愿站立,精神沉郁,食欲下降,呼吸困難,關節(jié)腫脹、皮膚瘀血及妊娠母豬的流產(chǎn)和死胎等癥狀。隱性帶毒型ASF不表現(xiàn)臨床癥狀,但帶毒豬可以持續(xù)性排出病毒[7]。

    2.2? ASF的剖檢病變

    ASF的剖檢病變以內(nèi)臟器官出血為主要特征,急性型ASF表現(xiàn)尤為明顯。脾臟顯著性腫大、出血、瘀血、顏色變暗、質(zhì)地變脆易碎;淋巴結(jié)增大、水腫以及出血;心臟和腎臟表面、膀胱皮質(zhì)、膽囊和皮下出血;肝和肺可能出現(xiàn)充血,肺泡和間質(zhì)水腫[7]。

    3? ASF病毒的檢測

    3.1? 紅細胞吸附試驗(Hemadsorption,HAD)

    感染病毒的白細胞可以吸附豬的紅細胞,形成玫瑰花環(huán)樣的結(jié)構,依此來判斷病原的陽性[8,9]。但有少數(shù)毒株的感染不能產(chǎn)生這樣的結(jié)構,因此該方法會造成假陰性。

    3.2? 免疫熒光實驗(Immunofluorescence assay,F(xiàn)A)

    將淋巴結(jié)、腎、脾、肺等組織器官制作切片或?qū)⒉×辖臃NASFV敏感的細胞系,然后用熒光標記的ASFV抗體染色,通過觀察熒光來檢測是否存在ASFV[10]。

    3.3? 抗體檢測

    目前市場上尚無有效的對抗ASFV的疫苗,因此血清中ASFV抗體也可以作為病毒感染的指標,利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、間接免疫熒光試驗(Indirect immunofluorescence assay,IFA)或蛋白免疫印跡試驗(Western blot,WB)檢測血清中ASFV抗體,可以判斷是否受到病毒攻擊[11-13]。

    3.4? 病毒核酸檢測

    聚合酶鏈式反應(PCR)檢測周期短,靈敏度高,特異性好,比較適合用于ASFV的快速檢測[14]。也可以利用多重PCR在一個反應中檢測多重病原,可用于區(qū)別ASFV與其他病原或者多個病原混合感染的診斷[15,16]。熒光定量PCR可以進一步提高檢測的靈敏度和特異性,而且可以減少反應步驟,可計算病毒相對或絕對含量,這個方法也越來越多地應用于ASFV的檢測[17]。但是,上述兩種PCR檢測方法需要相對昂貴的儀器,因此不適合基層和野外的應用。環(huán)介導等溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可實現(xiàn)在恒溫下對目的基因的擴增,在檢測ASFV中因其操作簡單、特異性好和靈敏度高,越來越受到青睞[18]。

    4? ASF的流行病學

    ASFV的主要宿主是家豬和野豬,病毒可以通過與感染豬直接接觸來傳播,也可以通過污染的食物、蜱蟲來間接傳播[19]。另外,在一些生物安全防護級別較高的養(yǎng)殖場依然暴發(fā)ASF。有研究表明,ASFV可以在螫蠅體內(nèi)存活3 d,這也意味著這些螫蠅可能是ASFV傳播的另一種昆蟲媒介[20]。

    1921年,在肯尼亞第一次發(fā)現(xiàn)ASFV,隨后傳播到非洲其他的國家。1957年,ASFV首次傳到歐洲[21],隨后在歐洲國家大規(guī)模暴發(fā),經(jīng)過采取系列措施,ASF得到了很好的控制[22]。2007年,ASF在歐洲的格魯吉亞再次暴發(fā),隨后傳播到俄羅斯、白俄羅斯和烏克蘭[23],到2014年蔓延至歐洲東部國家[24]。2018年8月份,在中國首次暴發(fā)ASF疫情,隨后迅速蔓延,多次暴發(fā)[25]。

    依據(jù)p72基因的進化分析,可以將ASFV分成24個基因型,即基因I-XXIV。依據(jù)CD2v的序列分析,可將ASFV分為8個血清亞型(1-8亞型)[26]。在非洲主要以I基因型為主要流行基因型,歐洲以II型為主要血清型。中國流行株的血清型為II型,血清亞型為8亞型[25]。

    5? ASFV的免疫逃逸

    ASFV毒力的強弱可能與病毒逃逸機體免疫的能力相關。有研究表明,強毒感染的過程中可以逃避免疫系統(tǒng),而弱毒則會激發(fā)炎癥反應和免疫反應的細胞信號通路[27]。在ASFV中有許多基因參與到免疫逃逸中來,如DP71L、A238L、MGF360、MGF505/530、I329L和CD2v等。它們以不同的方式來幫助病毒逃逸免疫系統(tǒng)的清除,如DP71L蛋白抑制病毒感染早期細胞凋亡的啟動[28],MGF360和MGF505/530抑制干擾素的產(chǎn)生和干擾素的抗病毒效應[29],A179L抑制細胞自噬[30]以及CD2v蛋白抑制淋巴細胞的產(chǎn)生[31]等。這些不同的逃逸機制可能單獨或協(xié)同發(fā)揮作用,在中斷一條通路時可能會有其他的機制替補上來,使得病毒維持逃避免疫的能力。

    6? ASF的疫苗研究

    ASFV的強大免疫逃逸能力使得開發(fā)疫苗的難度較大。傳統(tǒng)方法制備滅活疫苗可以產(chǎn)生抗體,但是對于強毒的攻擊不能提供有效的免疫保護[32]。在自然界中,存在一些毒力弱的ASFV毒株,如OURT88/3和NH/P68毒株等,利用這些病毒來開發(fā)弱毒活疫苗也被嘗試。研究表明,弱毒株開發(fā)的減毒活疫苗能夠?qū)SF提供有效的保護,并且不同的免疫組合還能對不同的毒株產(chǎn)生交叉免疫保護。但是弱毒株會對機體產(chǎn)生不同程度的副作用,這對豬的生產(chǎn)養(yǎng)殖帶來了很大的影響[33]。另外,研究表明ASFV在細胞系上連續(xù)傳代可以使病毒的毒力減弱甚至喪失。但是利用該方法開發(fā)的減毒活疫苗并不能使機體產(chǎn)生對母本強毒的有效抵抗[34]。由此可見,開發(fā)常規(guī)ASF滅活疫苗和弱毒/減毒活疫苗的難度很大。

    隨著生物技術的發(fā)展,操作大的病毒DNA已不是難題。利用分子生物學技術敲除ASFV病毒的部分基因,如DP148R,EP402R,MGF360/MGF505和B119L,獲得重組ASFV病毒。重組ASFV在細胞上的復制能力不變,但對宿主動物的致病性大大降低。在實驗條件下,用這些重組病毒免疫宿主動物,可以使宿主產(chǎn)生對抗同基因型強毒的攻擊,但對不同基因型的強毒的攻擊效果差異較大[24,35]。亞單位疫苗是開發(fā)ASF疫苗的另一種嘗試,但單獨使用亞單位疫苗很難促使機體產(chǎn)生有效的免疫保護。有研究表明[36],用p30亞單位疫苗免疫后,再用減毒ASFV毒株OURT88/3株加強免疫,可以達到很好的免疫效果,而且可以擴大抗原表位的區(qū)域,表明用亞單位疫苗和ASFV減毒株聯(lián)合使用有利于潛在抗原表位的開發(fā),這為開發(fā)高效,安全和能交叉保護的疫苗增添了一份希望。

    7? 小語

    近些年,ASF在全世界多個區(qū)域暴發(fā),范圍有擴大的趨勢。我國在2018年8月發(fā)現(xiàn)第一例ASF,至11月中旬已經(jīng)發(fā)生多起,給我國生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來了極大的打擊。目前,市場上尚無ASF疫苗,對ASF的控制主要采取封鎖隔離(即對發(fā)病的豬場進行隔離),對發(fā)病豬場生豬進行撲殺和無害化處理,控制人和動物進出,養(yǎng)殖場和周圍區(qū)域消毒封鎖等措施。了解ASFV的研究進展可以促進對ASF的認識和引起對ASF防控的重視,同時為ASF的防控提供理論依據(jù)。ASF的防控一方面需要政府采取一系列措施對ASFV進行圍追堵截;另一方面還需要出臺系列政策促進養(yǎng)殖業(yè)向綠色、高效、環(huán)保和高生物防護模式轉(zhuǎn)變;要加強對ASF的研究,政府應當適當擴大對ASF疫苗研發(fā)的投入,爭取及早研發(fā)出高效、安全的ASF疫苗。

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