奶牛隱性乳房炎的幾種診斷方法

薛 銀

（浙江省動物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 310002）

奶牛乳房炎（Mastitis）是奶牛場危害最大，投入費用最多，防治工作最難的疾病之一。隱性乳房炎在奶牛乳房炎中所占比例最大，由于乳汁無肉眼可見明顯的變化加上臨床癥狀不明顯，所以很容易被忽視。由于患病奶牛乳汁理化性質(zhì)發(fā)生改變，體細胞含量升高，乳腺組織發(fā)生明顯的病理學(xué)變化，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)和乳品加工業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。而且由于牛奶品質(zhì)發(fā)生變化，給乳品食品安全問題帶來一定的隱患。

奶牛乳汁中的酶類，體細胞數(shù)量、各種成分的含量、乳汁的pH等在正常的乳腺細胞中是大體上不變的，但在患有乳房炎的奶牛中各項指標有明顯變化。目前診斷隱性乳房炎方法主要有分子生物學(xué)方法、乳中酶類檢驗法、乳汁細胞學(xué)檢查、乳汁病原微生物檢查、乳汁pH檢查、乳汁導(dǎo)電性檢查、乳清電泳診斷法等。本文介紹幾種常用以及仍處在研究中的幾種隱性乳房炎的診斷方法，供養(yǎng)殖場戶和科研工作者參考。

1 分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)的檢測方法主要是PCR的方法?？梢愿鶕?jù)感染隱性乳房炎的相關(guān)的各種主要的致病微生物，比如金黃色葡萄球菌等設(shè)計相關(guān)的引物，從而建立一種多重PCR的方法來檢測這些致病原，進而檢測隱性乳房炎。這種分子生物學(xué)的檢測方法需要有專門的獸醫(yī)科技人員來完成。養(yǎng)殖場（戶）可以通過第三方檢測機構(gòu)來實現(xiàn)。

2 乳中酶檢測方法

乳汁中的各種酶類在發(fā)生乳房炎時會有一個明顯的變化，這些指標的變化可以作為診斷奶牛隱性乳房炎的指標。結(jié)合珠蛋白 (haptoglobin，HP)是奶牛的一種主要急性期蛋白（acute phase protein，APP），牛乳中HP含量的變化能準確地反映乳房炎的炎癥程度并可以評價治療的效果。曹隨忠等利用乳汁中結(jié)合珠蛋白作為奶牛隱性乳房炎診斷指標，其陽性值達94.7%。

乳汁中的炎性細胞比如單核細胞、中性粒細胞等在奶牛患乳房炎之后會釋放一種嗜天青顆粒，髓過氧化物酶（MPO）作為這種嗜天青顆粒的主要成分，在炎癥過程中會大量釋放，參與殺死病原微生物的過程中。所以髓過氧化物酶的大量升高可以作為監(jiān)測奶牛隱性乳房炎的重要指標。

在奶?；茧[性乳房炎之后，損傷的乳房組織細胞和乳汁中的大量白細胞還會釋放一種叫乳酸脫氫酶的酶，黃利權(quán)等通過選擇奶牛正常乳區(qū)和患有隱性乳房炎的奶牛乳區(qū)，通過檢測此酶發(fā)現(xiàn)在患有隱性乳房炎的奶牛的乳汁中乳酸脫氫酶的含量有顯著升高。所以這個酶可以作為診斷奶牛隱性乳房炎的一個指標。

乳中的 N-乙?；?-D-氨基葡萄糖苷酶（N-acety1-β-D-glucosaminidase）也是損傷的乳腺細胞和乳汁中的白細胞產(chǎn)生的。在患病的奶牛中，由于致病的微生物對乳腺組織的破壞，大量的N-乙?；?D-氨基葡萄糖苷酶會釋放到乳腺組織中。因此檢驗乳汁中的N-乙酰基-D-氨基葡萄糖苷酶便能檢測出奶?；加须[性乳房炎。

3 乳汁中體細胞檢查方法

在正常的牛奶中，通常每毫升體細胞數(shù)在20萬以下我們認為是合格的牛奶。體細胞數(shù)越低，說明奶牛越健康，牛奶品質(zhì)越好。牛奶中的體細胞主要包括一些炎性細胞，比如淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞等，還有一部分是被破壞的乳腺細胞。奶?；茧[性乳房炎后，這些細胞的含量會有明顯的提高。所以通過檢測牛奶中的體細胞數(shù)就可以來判斷奶牛是否患有隱性乳房炎。通常的方法是將牛奶混合后取一定的量制作涂片，通過人工計數(shù)的方法來判斷。但是這項工作耗時耗力，得不償失?，F(xiàn)在已經(jīng)有專門的自動體細胞計數(shù)儀產(chǎn)生，比如瑞典的福斯體細胞計數(shù)儀，通過流式細胞技術(shù)，取2mL左右的牛奶樣品，通過染色等自動工序，可以準確的檢測出牛奶中的體細胞數(shù)，方便快捷，但是設(shè)備成本很高。根據(jù)乳汁中的體細胞在表面活性劑等的破壞下，會釋放出DNA，再經(jīng)過一些反應(yīng)乳汁會出現(xiàn)凝集結(jié)塊等，可以據(jù)此來判斷乳房炎的嚴重程度，輕微凝集設(shè)為“+”，中度凝集“++”，重度凝集“+++”，據(jù)此可以直觀的監(jiān)測奶牛隱性乳房炎。比如浙江大學(xué)奶業(yè)科學(xué)研究所研制的奶牛乳房炎快速診斷方法，就是基于這個原理。但是這個方法也存在一定的問題，檢測過程中有假陽性的存在。

4 乳中病原微生物學(xué)檢查

引起奶?；茧[性乳房炎的主要因素是致病的微生物。細菌、真菌、支原體等都會引起疾病的發(fā)生。臨床上檢測出的致病菌主要包括金黃色葡萄球菌、嗜熱鏈球菌、埃希大腸桿菌等，這些病菌占了發(fā)生乳房炎的絕大部分。但是，雖然有些致病菌存在于乳汁中，但是奶牛的抵抗力比較強，并不一定會發(fā)病。另外還有樣品污染的問題，養(yǎng)殖場戶可以通過細菌、真菌培養(yǎng)做出一個初步診斷。

5 牛奶中pH檢查方法

相關(guān)研究證明，奶牛患有隱性乳房炎時，乳汁中pH會有一個明顯的上升。正常乳汁的pH大約在6.5左右上下浮動。當(dāng)乳腺發(fā)生炎癥時，乳汁的pH會升高至6.9以上，常接近血漿的pH 7.4，牛奶pH的變化與體細胞和炎性細胞的含量呈正相關(guān)。但是此項檢查pH與多種因素有關(guān)，存在一定不確定性。

6 其他檢測方法

6.1 乳清電泳診斷法

根據(jù)研究表明：健康、可疑和隱性乳房炎乳清蛋白的變化規(guī)律與電泳圖譜的結(jié)果相一致，由此可根據(jù)乳清電泳圖譜的變化來判斷奶牛是否換有隱性乳房炎，西南農(nóng)業(yè)大學(xué)宋宣明、北京農(nóng)業(yè)大學(xué)艾曉杰等利用牛乳清進行電泳的手段來檢測奶牛是否患有隱性乳房炎，能直觀地反映隱性乳房炎的程度。

6.2 乳汁電導(dǎo)率檢測法

健康奶牛乳汁滲透壓大約75%，由氯化鈉和乳糖形成，正常情況下奶牛乳汁中無機鹽濃度是相對恒定的。奶?；加须[性乳房炎后，由于乳汁成分的變化，無機鹽、酪蛋白膠體濃度會發(fā)生明顯變化。由此導(dǎo)致乳汁導(dǎo)電率的上升，因此可以通過檢測牛奶的導(dǎo)電率來檢測奶牛隱性乳房炎。

奶牛隱性乳房炎檢測方法雖然有多種，但養(yǎng)殖場戶應(yīng)根據(jù)養(yǎng)殖場戶自身經(jīng)濟條件和監(jiān)測目的，選擇適合本場的檢測方法，可以適當(dāng)多選幾種檢測方法，提高診斷正確率，從而準確、快速的檢測出患病奶牛，并針對性的開展用藥。提高乳品的產(chǎn)量和質(zhì)量，提高養(yǎng)殖場的經(jīng)濟效益。