• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    細胞因子FAM3C在攜帶人突變型α-突觸核蛋白A53T純合子小鼠黑質(zhì)區(qū)表達的研究

    2018-02-13 09:58:34
    精準醫(yī)學雜志 2018年6期
    關鍵詞:黑質(zhì)月齡細胞因子

    (青島大學國家生理學重點(培育)學科,山東 青島 266071)

    帕金森病(PD)是一種發(fā)病率僅次于阿爾茨海默病(AD)的第2大神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。許多研究表明,遺傳、環(huán)境、老齡化和氧化應激等因素均參與了PD的發(fā)病的過程[1-2]。目前,臨床上用于治療PD的藥物只能在一定程度上改善疾病的相關癥狀,而不能阻止PD病情的發(fā)展[3-5]。因此,闡明PD的發(fā)病原因及可能機制成為現(xiàn)代醫(yī)學研究亟需解決的難題。

    FAM3基因家族(FAM3)是2002年新發(fā)現(xiàn)的一個細胞因子樣基因家族,目前已知包括FAM3A、FAM3B、FAM3C和FAM3D 4個成員[5]。FAM3基因家族成員的蛋白序列由224~235個氨基酸殘基組成,具有高度的同源性,而與其他已知的蛋白均沒有發(fā)現(xiàn)同源性[6-7]。目前的研究已初步揭示FAM3基因家族成員有可能在包括糖尿病、腫瘤及神經(jīng)退行性疾病等在內(nèi)的多種重大疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[8-10]。FAM3C是FAM3基因家族的第3個成員,研究發(fā)現(xiàn)FAM3C在人與小鼠的全身組織中均有表達[11]。目前越來越多的研究表明,F(xiàn)AM3C是葡萄糖和脂質(zhì)代謝的重要調(diào)節(jié)劑[12],而且FAM3C的異常表達參與了多種腫瘤的形成及轉(zhuǎn)移過程[13-14]。HASEGAWA等[15]研究顯示,AD的發(fā)生和大腦中淀粉樣斑塊的形成密切相關,F(xiàn)AM3C通過破壞淀粉樣β前體的穩(wěn)定來改善阿爾茨海默病。然而,F(xiàn)AM3C在PD發(fā)病中的作用尚不明確。本研究選用攜帶人突變型α-突觸核蛋白A53T純合子(α-SynA53T+/+)小鼠,通過檢測不同月齡的α-SynA53T+/+小鼠黑質(zhì)(SN)區(qū)FAM3C蛋白的表達水平,探究FAM3C在PD發(fā)生、發(fā)展中的作用,為闡明PD發(fā)生和發(fā)展的分子機制提供實驗基礎?,F(xiàn)將結果報告如下。

    1 材料和方法

    1.1 實驗動物

    健康α-SynA53T+/+小鼠購于南京大學模式動物研究所,按SPF級別飼養(yǎng),置于室溫(22±2)℃下,12-12 h晝夜循環(huán)光照下生活,自由飲水取食。鑒定基因型后,選取3、6月齡雄性α-SynA53T+/+小鼠和同窩野生型(WT)小鼠各4只。所有關于實驗動物的操作均符合青島大學實驗動物操作規(guī)則中的要求。

    1.2 儀器與試劑

    大鼠源FAM3C抗體購買于美國R&D SYSTEMS公司,小鼠源Alpha-Synuclein抗體購買于英國Abcam公司,HRP標記山羊抗大鼠IgG購買于MDBio.Inc公司,HRP標記山羊抗小鼠IgG購買于Absin公司,RIPA裂解液、分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液購于康為公司,ECL發(fā)光試劑盒購買于美國Millipore公司。

    1.3 實驗儀器

    電泳槽Mini-VE、電轉(zhuǎn)儀(濕轉(zhuǎn))Trans-Blot和電泳儀Power-Pac200購買于美國BIO-RAD公司。

    1.4 Western Blot方法鑒定小鼠基因型及檢測小鼠SN區(qū)FAM3C蛋白表達水平

    以水合氯醛深度麻醉小鼠,迅速斷頭,完整取出包括中腦SN區(qū)的腦組織,置于冰盒內(nèi),迅速準確取出SN部分,放入預冷的EP管中,準確稱質(zhì)量后,在冰上用加入蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA蛋白裂解液充分研磨、裂解30 min以后,4 ℃下以12 000 r/min離心20 min,取上清液于新的EP管中,應用酶標儀以BCA法測定波長562 nm處的吸光度值,進行蛋白濃度測定。按每孔25 μg蛋白上樣,通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳將不同分子質(zhì)量的蛋白分開,然后電轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,于室溫下以100 g/L的脫脂奶粉封閉2 h;分別加入大鼠源FAM3C一抗(1∶300)和小鼠源Alpha-Synuclein 一抗(1∶1 000),4 ℃孵育過夜,在PBST中洗3次后,分別與辣根過氧化物酶標記的山羊抗大鼠IgG(1∶5 000)和山羊抗小鼠IgG(1∶10 000)在室溫下孵育1 h,在PBST中洗滌3次,ECL發(fā)光液顯影,UVP凝膠成像系統(tǒng)成像后用Image J軟件對蛋白條帶進行半定量分析。

    1.5 統(tǒng)計學方法

    2 結 果

    2.1 α-SynA53T+/+小鼠的鑒定

    Western Blot方法檢測結果顯示,3月齡α-SynA53T+/+小鼠SN區(qū)Human-α-Syn蛋白表達水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(t=9.884,P<0.05)。6月齡α-SynA53T+/+小鼠SN區(qū)Human-α-Syn蛋白的表達水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(t=3.779,P<0.05)。見圖1。

    2.2 不同月齡α-SynA53T+/+小鼠SN區(qū)FAM3C蛋白表達變化

    Western Blot方法檢測結果顯示,3月齡α-SynA53T+/+小鼠SN區(qū)FAM3C蛋白水平與WT小鼠相比,差異無統(tǒng)計學意義(t=1.245,P>0.05);而6月齡α-SynA53T+/+小鼠SN區(qū)FAM3C蛋白表達水平與WT小鼠相比明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(t=8.865,P<0.05)。見圖2。

    3 討 論

    PD的主要病理特征是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的退行性變性死亡,黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元漸進性死亡與氧化應激和炎癥反應有關。前期研究發(fā)現(xiàn),多種細胞因子參與了PD的發(fā)生及發(fā)展過程,PD病人腦脊液中的腫瘤壞死因子-α、白細胞介素1β和白細胞介素6的含量出現(xiàn)了上升[16-18]。自FAM3家族被發(fā)現(xiàn)以來,國內(nèi)外研究者對FAM3基因家族成員的生物學功能展開了深入的研究,目前的研究已經(jīng)初步揭示FAM 3基因家族在代謝、腫瘤以及蛋白質(zhì)相互作用等方面具有重要的生理作用[6,7,10,19]。FAM3A是FAM3細胞因子樣基因家族的第1個成員,體外研究表明,F(xiàn)AM3A主要定位在培養(yǎng)肝細胞的線粒體之中,具有促進ATP生成以及分泌的作用[20-21]。FAM3B是FAM3基因家族的第2個成員,主要表達于胰腺,具有與炎癥因子白細胞介素6相似的致細胞凋亡的作用[22-23],在胰島素抵抗和2型糖尿病發(fā)展過程中起重要作用,其可能成為2型糖尿病的新干預靶點[24-25]。FAM3D被發(fā)現(xiàn)可能介入了機體能量代謝異常、結腸癌及嗜睡等的發(fā)生發(fā)展過程[18,24,26-27]。FAM3C是FAM3基因家族的第3個成員,已被發(fā)現(xiàn)在胚胎發(fā)育和視網(wǎng)膜功能調(diào)控、上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及胰腺癌發(fā)生過程中起著重要作用,在腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)了高水平的FAM3C蛋白表達[15,28-30]。在唾液腺、胰腺、結腸、十二指腸和乳腺中的分泌性上皮細胞中也有FAM3C的表達[13]。近年來FAM3C的功能和表達也在哺乳動物大腦中進行了研究,結果顯示FAM3C水平降低與AD的發(fā)病有關,腦內(nèi)FAM3C的表達水平在出生后達到峰值,隨著年齡的增長而下降,與年齡匹配的正常腦相比,AD腦中FAM3C免疫反應神經(jīng)元的陽性數(shù)量減少[15,30]。

    A:3月齡,B:6月齡。

    A:3月齡,B:6月齡。

    本實驗研究顯示,PD模型小鼠在6月齡時SN區(qū)FAM3C蛋白表達水平出現(xiàn)增高,提示FAM3C異常表達參與了PD的發(fā)生及發(fā)展過程,為進一步闡述PD的發(fā)病機制提供了實驗依據(jù)。

    綜上所述,在PD的發(fā)病過程中出現(xiàn)了SN區(qū)FAM3C的異常表達,但其對PD發(fā)病機制的作用還需要進一步的研究探討。

    猜你喜歡
    黑質(zhì)月齡細胞因子
    抗GD2抗體聯(lián)合細胞因子在高危NB治療中的研究進展
    帕金森病模型大鼠黑質(zhì)磁共振ESWAN序列R2*值與酪氨酸羥化酶表達相關性的研究
    湖州33月齡男童不慎9樓墜落上海九院對接“空中120”成功救治
    科學生活(2019年7期)2020-01-01 08:28:02
    提高育肥豬出欄率合理的飼養(yǎng)密度
    不同月齡荷斯坦牛產(chǎn)奶量的研究
    帕金森病患者黑質(zhì)的磁共振成像研究進展
    急性心肌梗死病人細胞因子表達及臨床意義
    不同月齡嬰兒ABR正常值分析
    1H-MRS檢測早期帕金森病紋狀體、黑質(zhì)的功能代謝
    磁共振成像(2015年7期)2015-12-23 08:53:04
    細胞因子在慢性腎缺血與腎小管-間質(zhì)纖維化過程中的作用
    集安市| 西贡区| 菏泽市| 孟州市| 大厂| 鄂伦春自治旗| 将乐县| 太仆寺旗| 甘洛县| 纳雍县| 巴中市| 上蔡县| 涪陵区| 华阴市| 金昌市| 鄱阳县| 郸城县| 南皮县| 农安县| 紫阳县| 六枝特区| 甘孜| 商河县| 长沙市| 宜宾市| 滦平县| 凤庆县| 尖扎县| 呼和浩特市| 平塘县| 安塞县| 莱州市| 宝山区| 南昌县| 海城市| 霍山县| 马关县| 鄂伦春自治旗| 平山县| 徐州市| 密山市|