腦小血管病與氧化應(yīng)激

葛永利 王玉敏 王洪權(quán)

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

腦小血管病(CSVD)是指由于各種病因影響腦內(nèi)小動(dòng)脈、微動(dòng)脈、毛細(xì)血管、微靜脈和小靜脈所導(dǎo)致的一系列臨床、影像、病理綜合。病理改變主要累及顱內(nèi)小血管(arteriole)，主要表現(xiàn)為缺血性腦卒中、認(rèn)知功能障礙和情感障礙等。主要病理學(xué)特點(diǎn)為腔隙性腦梗死、腦白質(zhì)高信號(hào)和腦微出血〔1〕；主要表現(xiàn)為腔隙性腦梗死、腦出血、皮質(zhì)下白質(zhì)病變、腦微出血和微梗死〔2〕。目前，CSVD的發(fā)病機(jī)制仍然不清楚，亦沒有有效的防治措施。本文就氧化應(yīng)激在兩種類型CSVD〔3〕，即腦淀粉樣血管病(CAA)和非腦淀粉樣血管病(CNAA)中的作用進(jìn)行梳理，同時(shí)對(duì)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(NADPH)氧化酶介導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧(ROS)參與CSVD病理機(jī)制進(jìn)行了重點(diǎn)闡述，最后討論通過藥理學(xué)治療CSVD的可行性及潛在的NADPH氧化酶抑制劑現(xiàn)狀。

1 氧化應(yīng)激與腦血管功能失調(diào)

氧化應(yīng)激是指機(jī)體因外源性刺激或內(nèi)源性代謝的改變進(jìn)而使ROS產(chǎn)生增加或清除減少，破壞機(jī)體的氧化還原平衡穩(wěn)態(tài)，最終引起細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高。氧化應(yīng)激源于以ROS和活性氮(RNS)的形式存在的氧化物質(zhì)產(chǎn)生增多或抗氧化酶/抗氧化水平降低。

氧化應(yīng)激在腦血管功能中發(fā)揮重要作用。氧化應(yīng)激通過干擾內(nèi)皮細(xì)胞依賴的一氧化氮(NO)信號(hào)通路損害腦血管功能〔4〕。過氧化物與NO反應(yīng)，減少NO的生物利用度，減少NO的強(qiáng)效血管舒張作用、抗感染和抗增殖作用。這一反應(yīng)可產(chǎn)生RNS 過氧亞硝酸根(ONOO-)。 ONOO-是強(qiáng)效氧化物，可加重腦血管功能失調(diào)，引起蛋白和DNA損傷〔4〕。另外，高濃度的過氧化氫(H2O2)能夠誘導(dǎo)腦血管細(xì)胞凋亡的發(fā)生。NO生物利用度降低的另外一個(gè)重要結(jié)果是Rho激酶活性失調(diào)。NO具有調(diào)控腦微血管Rho激酶活性的功能，NO合成酶的功能抑制后會(huì)增加Rho激酶對(duì)血管張力的影響〔5〕。同時(shí)，ROS能夠直接增加Rho激酶通路活性〔6〕。相反，Rho激酶影響內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達(dá)和活性〔7〕。因此，NO的丟失可誘發(fā)惡性循環(huán)，增加的Rho激酶活性導(dǎo)致NOS介導(dǎo)的NO產(chǎn)生減低，從而進(jìn)一步增加Rho激酶活性。

2 NADPH氧化酶

圖1 NOX2 NADPH 氧化酶復(fù)合體激活機(jī)制示意圖

3 NADPH氧化酶是腦血管系統(tǒng)ROS產(chǎn)生的主要來源

線粒體和eNOS是在其正常的酶活動(dòng)或功能失調(diào)過程中產(chǎn)生副產(chǎn)物ROS，而NADPH氧化酶唯一的主要功能是產(chǎn)生ROS的氧化酶家族〔10〕。催化亞基Nox1、Nox2、Nox4和細(xì)胞質(zhì)成分p47phox，p67phox均在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)于腦血管系統(tǒng)〔11〕。研究表明，NADPH氧化酶在腦動(dòng)脈中具有功能活性，是正常狀態(tài)下腦動(dòng)脈ROS產(chǎn)生的主要來源〔12〕。 而氧化應(yīng)激狀態(tài)下，NADPH氧化酶產(chǎn)生過多的過氧化物，參與一些血管相關(guān)疾病(如高血壓、糖尿病和高脂血癥)和年齡相關(guān)疾病的病理機(jī)制〔4，13〕。

4 NADPH氧化酶與CSVD腦血管功能失調(diào)

NADPH氧化酶是腦血管系統(tǒng)ROS產(chǎn)生的主要來源，NADPH氧化酶介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS是腦缺血損傷的主要因素。Walder等〔14〕第一次證明NOX2 NADPH氧化酶是缺血性腦損傷的主要因子，本研究顯示在局灶性腦缺血模型中NOX2缺失的小鼠表現(xiàn)出較小的腦損傷。同時(shí)研究表明，NOX2 NADPH氧化酶參與腦缺血誘導(dǎo)的血腦屏障(BBB)破壞及BBB上游大的軟腦膜動(dòng)脈的功能障礙〔15〕。在NOX4缺失的小鼠中，局灶性腦缺血氧化應(yīng)激、神經(jīng)元凋亡和BBB破壞較野生型小鼠減低〔16〕。

藥理學(xué)證據(jù)亦表明NADPH氧化酶參與腦缺血相關(guān)腦損傷機(jī)制。NADPH氧化酶抑制劑夾竹桃麻素(apocynin)在局灶性、全腦和慢性低灌注腦缺血模型中均具有神經(jīng)保護(hù)作用〔17〕，抑制BBB破壞、腦出血發(fā)生及ROS產(chǎn)生〔18〕。另外，在NOX2缺失小鼠中的研究表明，夾竹桃麻素的腦保護(hù)作用通過抑制NOX2 NADPH氧化酶的功能實(shí)現(xiàn)〔19〕。NADPH氧化酶抑制劑VAS2870鞘內(nèi)注射可減少局灶性腦缺血造成的腦損傷，其通過抑制NOX4 NADPH氧化酶發(fā)揮腦保護(hù)作用〔16〕。

4.1NADPH氧化酶參與非腦淀粉樣血管病機(jī)制 CSVD的兩個(gè)重要危險(xiǎn)因素包括高血壓和衰老。利用CSVD危險(xiǎn)因素的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯勘砻?，氧化?yīng)激參與CSVD血管功能失調(diào)的病理機(jī)制〔15〕。嚙齒動(dòng)物高血壓模型研究顯示，CSVD具有腦血流量減低、血管舒張功能損害、內(nèi)向重構(gòu)(inward remodeling)及BBB損傷等特點(diǎn)〔20〕。血管緊張素(AT)Ⅱ在腦血管功能異常這一進(jìn)程中發(fā)揮重要作用〔21〕。越來越多研究表明，NADPH氧化酶介導(dǎo)的氧化應(yīng)激介導(dǎo)ATⅡ?qū)δX血管系統(tǒng)的損傷效應(yīng)，ATⅡ能夠增加嚙齒動(dòng)物腦血管NOX2 NADPH氧化酶介導(dǎo)的過氧化物產(chǎn)生〔19，21〕。而NOX2 NADPH氧化酶肽抑制劑gp91ds-tat或ROS清除劑MnTBAP能夠抑制ATⅡ引起的小鼠腦小動(dòng)脈功能損害〔22〕。另外，在NOX2缺失小鼠中的研究進(jìn)一步證明了NOX2 NADPH氧化酶在ATⅡ介導(dǎo)的小鼠腦小動(dòng)脈功能損傷中的作用〔23〕。研究顯示，氧化應(yīng)激和NADPH氧化酶介導(dǎo)高血壓/ATⅡ?qū)ξ⒀h(huán)的損傷作用。ROS清除劑四甲基哌啶(tempol)和NADPH氧化酶抑制劑夾竹桃麻素能夠減少ATⅡ處理的自發(fā)性高血壓腦卒中大鼠(SHRSP)BBB的損害〔24〕。

氧化應(yīng)激在腦血管結(jié)構(gòu)改變過程中發(fā)揮重要作用。腦血管結(jié)構(gòu)的改變對(duì)腦血流量具有復(fù)雜的作用。內(nèi)向重構(gòu)能夠?qū)е卵鼙诘闹貥?gòu)，從而導(dǎo)致腦血管腔直徑的減小。在NOX2缺失小鼠中，ATⅡ引起的腦血管肥厚和內(nèi)向重構(gòu)均降低，表明NOX2 NADPH氧化酶介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS參與腦血管壁重構(gòu)〔25〕。與CSVD相關(guān)的腦血管重構(gòu)是發(fā)生在腦白質(zhì)的血管稀疏，后者源于側(cè)支血管數(shù)目的丟失和剩余血管管腔直徑的降低。最近研究顯示，腦血管稀疏發(fā)生于高血壓、衰老、糖尿病、高脂血癥和代謝綜合征的大腦軟腦膜小動(dòng)脈和毛細(xì)血管〔26〕。ATⅡ 1型受體(AT1)和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)能夠逆轉(zhuǎn)腦功能性毛細(xì)血管稀疏，并降低腦氧化應(yīng)激〔27〕。

研究顯示NADPH氧化酶介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS參與衰老相關(guān)大腦血管的功能異常。衰老過程中，腦血管也發(fā)生各種改變。衰老可降低剩余的腦血流量(CBF)和損害血管內(nèi)皮-NO依賴的反應(yīng)及神經(jīng)血管耦合〔28〕。在人類，衰老增加基底動(dòng)脈和椎動(dòng)脈等大血管的血管厚度和降低膨脹性。四甲基哌啶和MnTBAP能夠急性清除過氧化物，從而提高衰老小鼠腦血管NO依賴的血管舒張反應(yīng)及神經(jīng)血管耦合〔29〕。夾竹桃麻素、二亞苯基碘(DPI)或 gp91ds-tat抑制NADPH氧化酶活性同樣能夠提高衰老小鼠腦血管功能。而在NOX2缺失小鼠中，不存在年齡相關(guān)的腦血管功能異常。

而CSVD的其他危險(xiǎn)因素，如高膽固醇血癥、糖尿病、肥胖和高同型半胱氨酸血癥均可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生，引起腦血管功能異常。在高膽固醇血癥載脂蛋白E基因敲除的小鼠中，NOX2敲除能夠阻斷ROS的產(chǎn)生和腦血管舒張的而損害〔4〕。同樣NOX2缺失，能夠阻止肥胖誘導(dǎo)的腦小血管的功能失調(diào)〔30〕。

4.2NADPH氧化酶參與腦淀粉樣血管病機(jī)制 在腦淀粉樣血管中，β淀粉樣蛋白(Aβ)沉積于腦血管，導(dǎo)致血管運(yùn)動(dòng)裝置的改變，引起腦血管平滑肌的丟失〔31〕。同時(shí)Aβ可作為腦血管舒張的機(jī)械性阻礙，或干擾細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在存在CAA的衰老淀粉樣前體蛋白(APP)小鼠中存在明顯的氧化應(yīng)激〔32〕。 在有CAA發(fā)生的APP轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的研究發(fā)現(xiàn)，CAA陽性的腦血管和氧化應(yīng)激之間存在很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性〔33〕。研究顯示，氧化應(yīng)激參與Aβ/CAA引起腦血管系統(tǒng)的損傷效應(yīng)機(jī)制，四甲基哌啶慢性處理，能夠降低有CAA發(fā)生的APP轉(zhuǎn)基因小鼠模型氧化應(yīng)激水平和增高腦小動(dòng)脈的血管舒張反應(yīng)性〔34〕。本研究同時(shí)表明氧化應(yīng)激也參與CAA相關(guān)的微出血機(jī)制。另有研究顯示，氧化應(yīng)激參與APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦血管功能失調(diào)〔35〕。NOX2敲除或抑制NOX2能夠提高APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦血管功能〔36〕。同樣，夾竹桃麻素或四甲基哌啶減少APP轉(zhuǎn)基因小鼠氧化應(yīng)激和腦血管功能失調(diào)的發(fā)生〔34〕。因此，NADPH氧化尤其是NOX2是氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的CAA發(fā)生的始動(dòng)因素。而可溶性Aβ亦參與腦血管的氧化應(yīng)激損傷。存在可溶性Aβ而無CAA表現(xiàn)的年輕APP轉(zhuǎn)基因小鼠的大腦中，同樣存在氧化應(yīng)激〔36〕。超氧化物歧化酶(SOD)過表達(dá)或ROS清除劑能夠提高APP轉(zhuǎn)基因小鼠的大腦血管的功能〔36〕。而進(jìn)一步研究顯示，NOX2 NADPH氧化酶參與可溶性Aβ介導(dǎo)的氧化應(yīng)激發(fā)生機(jī)制和腦血管功能失調(diào)〔37〕。最近研究顯示，夾竹桃麻素或四甲基哌啶能夠顯著降低老化APP轉(zhuǎn)基因小鼠CAA的形成，表明ROS和NADPH氧化酶參與血管淀粉樣蛋白病理機(jī)制〔34〕。

5 抑制NADPH氧化酶是防治CSVD的靶標(biāo)

NADPH氧化酶介導(dǎo)產(chǎn)生的ROS參與CSVD及其危險(xiǎn)因素引起的腦血管病理和腦損傷。因此，NADPH氧化酶抑制劑或許能夠成為防治CSVD的有效策略。DPI和夾竹桃麻素是最為常用的NADPH氧化酶抑制劑，二者均已經(jīng)用來闡述NADPH氧化酶在CSVD及其相關(guān)危險(xiǎn)因素的動(dòng)脈病理中的作用。然而引起具有非特異性效應(yīng)限制其臨床應(yīng)用。小分子NADPH氧化酶抑制劑第一個(gè)肽類抑制劑為gp91ds-tat，其能夠特異性抑制Nox2 NADPH氧化酶〔38〕。gp91ds-tat對(duì)研究NOX2 NADPH氧化酶的功能具有無價(jià)的藥理學(xué)研究工具作用。

表1 新型NADPH氧化酶抑制劑

通過對(duì)化合物庫的高通量篩選，一些具有前景的NADPH氧化酶抑制劑被發(fā)現(xiàn)〔39〕。三唑嘧啶類化合物(Triazolo pyrimidines)VAS2870 和VAS3947即是NOX2 NADPH氧化酶抑制劑〔40〕。吡唑并吡啶類化合物(Pyrazolopyridine)VAS2870 和VAS3947能夠抑制NOX1-，NOX4-及NOX5-NADPH氧化酶，具有口服生物吸收特性，安全性好〔41〕。類黃酮衍生物S17834具有NADPH氧化酶抑制劑活性，能夠抑制過氧化物產(chǎn)生〔42〕。依布硒啉(Ebselen)及其集中含硒類似物具有抑制NOX1-，NOX2-活性，其中的JM-77b具有選擇性抑制Nox2活性功能。依布硒啉具有很好的口服吸收特性，具有很好的安全性。其他具有前景的NADPH氧化酶抑制劑包括三苯基甲烷衍生物(Triphenylmethane derivatives)、膠草酸(Grindelic acid)和ML171。見表1。然而目前這些NADPH氧化酶抑制劑均處于研發(fā)階段，未能進(jìn)入臨床試驗(yàn)。因此更多研究應(yīng)該聚焦研發(fā)具有良好的生物利用度和選擇性NADPH氧化酶抑制劑。未來研究需要進(jìn)一步闡述Nox催化亞基的分子結(jié)構(gòu)、NADPH氧化酶各亞基之間的相互作用，這些均對(duì)研發(fā)下一代選擇性NADPH氧化酶抑制劑至關(guān)重要。

1Wardlaw JM，Smith EE，Biessels GJ，etal.Neuroimaging standards for research into small vessel disease and its contribution to ageing and neurodegeneration〔J〕.Lancet Neurol，2013；12(8)：822-38.

2陶 雯，柯開富.腦小血管病研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)卒中雜志，2017；12(2)：147-51.

3Pantoni L.Cerebral small vessel disease：from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges〔J〕.Lancet Neurol，2010；9(7)：689-701.

4Miller AA，De Silva TM，Judkins CP，etal.Augmented superoxide production by Nox2-containing NADPH oxidase causes cerebral artery dysfunction during hypercholesterolemia〔J〕.Stroke，2010；41(4)：784-9.

5Didion SP，Lynch CM，Baumbach GL，etal.Impaired endothelium-dependent responses and enhanced influence of Rho-kinase in cerebral arterioles in type Ⅱ diabetes〔J〕.Stroke，2005；36(2)：342-7.

6Aghajanian A，Wittchen ES，Campbell SL，etal.Direct activation of RhoA by reactive oxygen species requires a redox-sensitive motif〔J〕.PLoS One，2009；4(11)：e8045.

7Faraco G，Moraga A，Moore J，etal.Circulating endothelin-1 alters critical mechanisms regulating cerebral microcirculation〔J〕.Hypertension，2013；62(4)：759-66.

8王玉敏，王月華，杜冠華，等.靶向調(diào)控HO-1/NOX2治療帕金森病的新進(jìn)展〔J〕.中國(guó)藥學(xué)雜志，2015：50(23)：2024-7.

9Nayernia Z，Jaquet V，Krause KH.New insights on NOX enzymes in the central nervous system〔J〕.Antioxid Redox Signal，2014；20(17)：2815-37.

10Drummond GR，Selemidis S，Griendling KK，etal.Combating oxidative stress in vascular disease：NADPH oxidases as therapeutic targets〔J〕.Nat Rev Drug Discov，2011；10(6)：453-71.

11Miller AA，Drummond GR，Mast AE，etal.Effect of gender on NADPH-oxidase activity，expression，and function in the cerebral circulation：role of estrogen〔J〕.Stroke，2007；38(7)：2142-9.

12Miller AA，Drummond GR，Schmidt HH，etal.NADPH oxidase activity and function are profoundly greater in cerebral versus systemic arteries〔J〕.Circ Res，2005；97(10)：1055-62.

13Kitayama J，F(xiàn)araci FM，Lentz SR，etal.Cerebral vascular dysfunction during hypercholesterolemia〔J〕.Stroke，2007；38(7)：2136-41.

14Walder CE，Green SP，Darbonne WC，etal.Ischemic stroke injury is reduced in mice lacking a functional NADPH oxidase〔J〕.Stroke，1997；28(11)：2252-8.

15Kahles T，Luedike P，Endres M，etal.NADPH oxidase plays a central role in blood-brain barrier damage in experimental stroke〔J〕.Stroke，2007；38(11)：3000-6.

16Kleinschnitz C，Grund H，Wingler K，etal.Post-stroke inhibition of induced NADPH oxidase type 4 prevents oxidative stress and neurodegeneration〔J〕.PLoS Biol，2010；8(9)：e1000479.

17Choi DH，Lee KH，Kim JH，etal.NADPH oxidase 1，a novel molecular source of ROS in hippocampal neuronal death in vascular dementia〔J〕.Antioxid Redox Signal，2014；21(4)：533-50.

18Yamamoto E，Tamamaki N，Nakamura T，etal.Excess salt causes cerebral neuronal apoptosis and inflammation in stroke-prone hypertensive rats through angiotensin Ⅱ-induced NADPH oxidase activation〔J〕.Stroke，2008；39(11)：3049-56.

19Jackman KA，Miller AA，De Silva TM，etal.Reduction of cerebral infarct volume by apocynin requires pretreatment and is absent in Nox2-deficient mice〔J〕.Br J Pharmacol，2009；156(4)：680-8.

20Henning EC，Warach S，Spatz M.Hypertension-induced vascular remodeling contributes to reduced cerebral perfusion and the development of spontaneous stroke in aged SHRSP rats〔J〕.J Cereb Blood Flow Metab，2010；30(4)：827-36.

21De Silva TM，F(xiàn)araci FM.Effects of angiotensin Ⅱ on the cerebral circulation：role of oxidative stress〔J〕.Front Physiol，2012；3(4)：484.

22Girouard H，Iadecola C.Neurovascular coupling in the normal brain and in hypertension，stroke，and Alzheimer disease〔J〕.J Appl Physiol(1985)，2006；100(1)：328-35.

23Chrissobolis S，Banfi B，Sobey CG，etal.Role of Nox isoforms in angiotensin Ⅱ-induced oxidative stress and endothelial dysfunction in brain〔J〕.J Appl Physiol(1985)，2012；113(2)：184-91.

24Kim-Mitsuyama S，Yamamoto E，Tanaka T，etal.Critical role of angiotensin Ⅱ in excess salt-induced brain oxidative stress of stroke-prone spontaneously hypertensive rats〔J〕.Stroke，2005；36(5)：1083-8.

25Chan SL，Baumbach GL.Nox2 deficiency prevents hypertension-induced vascular dysfunction and hypertrophy in cerebral arterioles〔J〕.Int J Hypertens，2013；2013：793630.

26Moore SM，Zhang H，Maeda N，etal.Cardiovascular risk factors cause premature rarefaction of the collateral circulation and greater ischemic tissue injury〔J〕.Angiogenesis，2015；18(3)：265-81.

27Estato V，Obadia N，Carvalho-Tavares J，etal.Blockade of the renin-angiotensin system improves cerebral microcirculatory perfusion in diabetic hypertensive rats〔J〕.Microvasc Res，2013；87(1)：41-9.

28Pea SRA，Chu Y，Miller JD，etal.Impact of ACE2 deficiency and oxidative stress on cerebrovascular function with aging〔J〕.Stroke，2012；43(12)：3358-63.

29Modrick ML，Didion SP，Sigmund CD，etal.Role of oxidative stress and AT1 receptors in cerebral vascular dysfunction with aging〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2009；296(6)：H1914-9.

30Lynch CM，Kinzenbaw DA，Chen X，etal.Nox2-derived superoxide contributes to cerebral vascular dysfunction in diet-induced obesity〔J〕.Stroke，2013；44(12)：3195-201.

31Ruzali WA，Kehoe PG，Love S.Influence of LRP-1 and apolipoprotein E on amyloid-β uptake and toxicity to cerebrovascular smooth muscle cells〔J〕.J Alzheimers Dis，2013；33(1)：95-110.

32Park L，Wang G，Moore J，etal.The key role of transient receptor potential melastatin-2 channels in amyloid-β-induced neurovascular dysfunction〔J〕.Nat Commun，2014；5：5318.

33Garcia-Alloza M，Prada C，Lattarulo C，etal.Matrix metalloproteinase inhibition reduces oxidative stress associated with cerebral amyloid angiopathy in vivo in transgenic mice〔J〕.J Neurochem，2009；109(6)：1636-47.

34Han BH，Zhou ML，Johnson AW，etal.Contribution of reactive oxygen species to cerebral amyloid angiopathy，vasomotor dysfunction，and microhemorrhage in aged Tg2576 mice〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2015；112(8)：E881-90.

35Park L，Koizumi K，El JS，etal.Age-dependent neurovascular dysfunction and damage in a mouse model of cerebral amyloid angiopathy〔J〕.Stroke，2014；45(6)：1815-21.

36Park L，Zhou P，Pitstick R，etal.Nox2-derived radicals contribute to neurovascular and behavioral dysfunction in mice overexpressing the amyloid precursor protein〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2008；105(4)：1347-52.

37Hamel E，Nicolakakis N，Aboulkassim T，etal.Oxidative stress and cerebrovascular dysfunction in mouse models of Alzheimer′s disease〔J〕.Exp Physiol，2008；93(1)：116-20.

38Rey FE，Cifuentes ME，Kiarash A，etal.Novel competitive inhibitor of NAD(P)H oxidase assembly attenuates vascular O(2)(-)and systolic blood pressure in mice〔J〕.Circ Res，2001；89(5)：408-14.

39Altenh?fer S，Radermacher KA，Kleikers PW，etal.Evolution of NADPH Oxidase Inhibitors：Selectivity and Mechanisms for Target Engagement〔J〕.Antioxid Redox Signal，2015；23(5)：406-27.

40Stielow C，Catar RA，Muller G，etal.Novel Nox inhibitor of oxLDL-induced reactive oxygen species formation in human endothelial cells〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2006；344(1)：200-5.

41Laleu B，Gaggini F，Orchard M，etal.First in class，potent，and orally bioavailable NADPH oxidase isoform 4(Nox4)inhibitors for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis〔J〕.J Med Chem，2010；53(21)：7715-30.

42Cayatte AJ，Rupin A，Oliver-Krasinski J，etal.S17834，a new inhibitor of cell adhesion and atherosclerosis that targets nadph oxidase〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2001；21(10)：1577-84.

43Csányi G，Cifuentes-Pagano E，Al GI，etal.Nox2 B-loop peptide，Nox2ds，specifically inhibits the NADPH oxidase Nox2〔J〕.Free Radic Biol Med，2011；51：1116-25.

44Sun QA，Hess DT，Wang B，etal.Off-target thiol alkylation by the NADPH oxidase inhibitor 3-benzyl-7-(2-benzoxazolyl)thio-1，2，3-triazolo〔4，5-d〕pyrimidine(VAS2870)〔J〕.Free Radic Biol Med，2012；52：1897-902.

45Gaggini F，Laleu B，Orchard M，etal.Design，synthesis and biological activity of original pyrazolo-pyrido-diazepine，-pyrazine and-oxazine dione derivatives as novel dual Nox4/Nox1 inhibitors〔J〕.Bioorg Med Chem，2011；19：6989-99.

46Bedard K，Jaquet V.Cell-free screening for NOX inhibitors〔J〕.Chem Biol，2012；19：664-5.

47Bhandarkar SS，Jaconi M，F(xiàn)ried LE，etal.Fulvene-5 potently inhibits NADPH oxidase 4 and blocks the growth of endothelial tumors in mice〔J〕.J Clin Invest，2009；119：2359-65.

48Munson JM，F(xiàn)ried L，Rowson SA，etal.Anti-invasive adjuvant therapy with imipramine blue enhances chemotherapeutic efficacy against glioma〔J〕.Sci Transl Med，2012；4：127-36.

49Kofler PA，Pircher H，Von GS，etal.Characterisation of Nox4 inhibitors from edible plants〔J〕.Planta Med，2013；79：244-52.

50Gianni D，Taulet N，Zhang H，etal.A novel and specific NADPH oxidase-1(Nox1)small-molecule inhibitor blocks the formation of functional invadopodia in human colon cancer cells〔J〕.ACS Chem Biol，2010；5：981-93.