ERα-29位多態(tài)性與HBV感染相關(guān)原發(fā)性肝癌的關(guān)系

徐國(guó)輝 徐宗全 何 均 解長(zhǎng)佶

(江西省腫瘤醫(yī)院肝腫瘤診斷治療中心，江西 南昌 330029)

原發(fā)性肝癌(PHC)的病因和發(fā)病機(jī)制目前尚無(wú)定論，但已經(jīng)證明和肝硬化、病毒性肝炎及黃曲霉素等化學(xué)致癌物質(zhì)及環(huán)境因素有關(guān)，這些危險(xiǎn)因素中又以乙型肝炎病毒(HBV)感染最多見(jiàn)〔1〕。相關(guān)研究報(bào)道〔2〕，乙型肝炎表面抗原陽(yáng)性者患肝癌的概率顯著提升，最高可達(dá)到陰性者的50倍。由此可見(jiàn)，控制HBV感染對(duì)于降低PHC患病率具有重要的價(jià)值。雌激素受體(ER)是一種蛋白質(zhì)分子，可與激素發(fā)生特異性結(jié)合而形成激素-受體復(fù)合物，使激素發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。ER對(duì)機(jī)體有著多方面的重要的調(diào)節(jié)作用〔3〕。相關(guān)研究顯示〔4〕，ERα-29在HBV感染者血清中異常表達(dá)，可能與HBV感染存在關(guān)聯(lián)。本研究從基因角度著手，旨在探討ERα-29位多態(tài)性與HBV感染相關(guān)PHC的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1～12月收治的HBV感染相關(guān)PHC患者150例作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合2015年制定的《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》，且經(jīng)臨床病理確診〔5〕；②HBV感染診斷參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)制定的《慢性乙型肝炎防治指南》〔6〕；③患者知情同意且簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性肝癌患者；②合并有其他腫瘤者；③肝癌復(fù)發(fā)者；④意識(shí)不清者。另選同期健康體檢的志愿者100例作為對(duì)照組。兩組性別、年齡及相關(guān)臨床特征比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 兩組性別、年齡及相關(guān)臨床特征比較〔n(%)〕

1.2檢測(cè)方法 兩組研究對(duì)象在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血3 ml，乙二胺四乙酸抗凝處理，室溫中靜置10 min，2 000 r/min離心10 min，去除上清液，振蕩搖勻15 s，加入3 ml核裂解液，37℃靜置1 h，加入1.3 ml蛋白沉淀液，振蕩搖勻15 s，2 000 r/min離心10 min，去除上清液，加入與樣本量等量的70%乙醇，2 000 r/min離心1 min，采用巴氏吸管吸走乙醇，加入DNA溶解液，置室溫過(guò)夜，提取DNA。全血基因組提取試劑盒購(gòu)于普洛麥格(北京)生物技術(shù)有限公司，上述操作均按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min；57℃退火50 s；72℃延伸30 s，連續(xù)30次，然后再于72℃延伸10 min，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度220 bp。取PCR反應(yīng)產(chǎn)物10 μl，37℃加入10 U BamH I內(nèi)切酶，靜置4 h，反應(yīng)終止后進(jìn)行凝膠電泳，紫外燈下成像，參考標(biāo)準(zhǔn)采用DNA 片段長(zhǎng)度標(biāo)準(zhǔn)物。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1ERα-29位多態(tài)性分析 ERα-29擴(kuò)增產(chǎn)物分三型，TT型出現(xiàn)1條帶：220 bp，沒(méi)有BamH I酶切位點(diǎn)；CC型出現(xiàn)2條帶：23 bp和197 bp，同時(shí)有BamH I酶切位點(diǎn)；TC型出現(xiàn)3條帶：23 bp、197 bp和220 bp。

2.2兩組ERα-29基因型和等位基因?qū)Ρ?研究組TT型、CC型、TC型比例分別為48例(32.00%)、37例(24.67%)、65例(43.33%)，對(duì)照組分別為12例(12.00%)、41例(41.00%)、47例(47.00%)，兩組基因型整體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.310,P=0.000)。研究組T、C等位基因占比分別為53.67%、46.33%，對(duì)照組分別為35.50%、64.50%，兩組等位基因占比比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.924,P=0.000)。T等位基因發(fā)生HBV感染相關(guān)PHC的風(fēng)險(xiǎn)為C等位基因的2.542倍(OR=2.542，95%CI：1.423～3.958)。

3 討 論

有研究證實(shí)〔7〕，我國(guó)有統(tǒng)計(jì)記錄的肝癌患者中70%是由HBV感染引發(fā)的，因此HBV感染者是PHC的高發(fā)群體，若已確診為乙型肝炎表面抗原陽(yáng)性，應(yīng)及時(shí)戒煙戒酒，保持良好的生活習(xí)慣，同時(shí)定期檢查。慢性HBV感染者肝硬化、重型乙型肝炎、肝癌的發(fā)病率有較大的差異，其中男性患PHC的概率比女性高2～7倍；同時(shí)對(duì)HBV感染相關(guān)PHC患者進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，男性與女性的比例為7～9∶1，且女性HBV感染相關(guān)PHC患者的1年和2年生存率均高于男性患者，雖然這種優(yōu)勢(shì)會(huì)在女性進(jìn)入更年期后逐漸下降，但已足夠引起人們的重視。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)肝癌也是與乳腺癌和前列腺癌一樣受到性激素的影響，其發(fā)病率和性激素的變化有著直接的關(guān)系〔8〕。ER是一種雌激素特異性的受體和配體依賴性轉(zhuǎn)錄激活因子，雌激素通過(guò)與ER相結(jié)合來(lái)發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，內(nèi)源性雌激素和ER相互作用后，受體發(fā)生二聚體化磷酸化以及磷酸化，同時(shí)將DNA結(jié)合區(qū)暴露，導(dǎo)致特異的DNA序列與之相結(jié)合，從而調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄。此外，ER還可以通過(guò)和部分復(fù)合物通過(guò)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的形式相互作用，最終起到調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄的作用。ER主要有ERα和ERβ兩種亞型，相關(guān)研究報(bào)道ERα基因的多態(tài)性和很多疾病都存在一定關(guān)聯(lián)，如肝癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、血管瘤、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)等疾病〔9〕。

本次研究說(shuō)明HBV感染相關(guān)PHC患者和正常人血清內(nèi)ERα-29多態(tài)性表達(dá)存在明顯的差異，HBV感染相關(guān)PHC患者中以T等位基因?yàn)橹饕攸c(diǎn)，提示T等位基因可能是HBV感染相關(guān)PHC的危險(xiǎn)因素，C等位基因可能是其保護(hù)因素。由此可見(jiàn)，ERα-29位多態(tài)性可能與HBV感染相關(guān)PHC存在一定的相關(guān)性。ERα位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)，能起到調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因的作用，雌激素與其結(jié)合可形成二聚體，通過(guò)和靶基 因中的雌激素反應(yīng)元件特異性結(jié)合刺激靶基因轉(zhuǎn)錄，從而誘導(dǎo)細(xì)胞分裂、增殖〔10〕。ERα-29位點(diǎn)多態(tài)性異?？赡軙?huì)影響ER對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控能力，導(dǎo)致雌激素的最終生理效應(yīng)發(fā)生變化，進(jìn)而導(dǎo)致多種與雌激素相關(guān)的疾病發(fā)生、發(fā)展〔11〕。劉俊峰等〔12〕的研究發(fā)現(xiàn)，ERα在肝癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織和正常組織，說(shuō)明在肝癌患者中不但ERα-29基因多態(tài)性存在異常，ERα表達(dá)水平也異常表達(dá)，因此可將ERα作為肝癌的研究切入點(diǎn)。雖本研究能證明HBV感染相關(guān)PHC患者的ERα-29位多態(tài)性存在異常表達(dá)，但未能探究其存在異常的原因以及ERα-29位多態(tài)性異常表達(dá)增加HBV感染相關(guān)PHC發(fā)病率的具體機(jī)制，還有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

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