豬后肢靜脈采血技術(shù)及血清樣品的制備

夏九鮮 李志明 鄔培昆

（1.昆明市西山區(qū)畜牧獸醫(yī)站，云南昆明 650000；2.昆明市西山區(qū)團(tuán)結(jié)街道辦事處畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心，云南昆明 650000）

血液樣品的采集和血清樣品的制備是保證動物疫病檢測順利完成的一項(xiàng)基礎(chǔ)的工作。近年來，國家高度重視動物防疫工作，豬口蹄疫，豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病列入了國家重大動物疫病強(qiáng)制免疫的病種，每年春、秋兩季防疫之后的重大動物疫病免疫質(zhì)量評估、日常監(jiān)測和豬圓環(huán)病毒病、豬偽狂犬病等豬專項(xiàng)病監(jiān)測，需要采集數(shù)百份豬血液樣品，同時(shí)，還要滿足一個(gè)樣品檢測多個(gè)項(xiàng)目，要求的血清量較大。根據(jù)教科書上介紹的前腔靜脈采血和耳郭靜脈采血的兩種方法，在實(shí)際工作中應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)采用豬耳郭靜脈采集血液，日齡小的豬只靜脈血管較細(xì)，用此方法血液流速較慢，血液凝固較快而堵塞采血針頭，不易采集到需要的血量；用前腔靜脈采血對豬只傷害較大，養(yǎng)殖戶有抵觸情緒。并且我們參與了云南省的生豬免疫新技術(shù)的前期實(shí)驗(yàn)需要在免疫后不同時(shí)段進(jìn)行采血，檢測免疫抗體消長規(guī)律。若反復(fù)的用前腔靜脈采血農(nóng)戶也不贊同。通過多年的摸索實(shí)踐，我們應(yīng)用豬后肢靜脈采血技術(shù)，對28到160日齡，不同品種（杜洛克、長白豬、本地黑豬）的豬1500多頭進(jìn)行了血液樣品的采集。此方法容易掌握，深受養(yǎng)殖戶歡迎。將采好2～3ml全血用離心機(jī)離心即可得到1ml左右的血清，滿足同一份血清檢測多個(gè)病種的需要量。

1 材料

0.8、0.9號一次性靜脈輸液針、5ml離心管、真空采血管、采樣盒、油性記號筆、冷藏箱及冷源、豬保定繩、酒精棉球、干棉球、移液器、1.5ml離心管、離心機(jī)

2 血液樣品的采集

2.1 采樣部位

兩后肢跖骨處腓側(cè)、脛側(cè)靜脈

后肢腓側(cè)靜脈采血

后肢脛側(cè)靜脈采血

2.2 豬只的保定及采血方法

2.2.1 后肢腓側(cè)靜脈采血方法。

在這個(gè)部位有兩條可采血的血管。

仔豬采用一人保定：豬側(cè)臥位，保定人員位于豬的背側(cè)，持針操作者位于豬的腹側(cè)。若豬右側(cè)臥位則豬的左后肢腓側(cè)位于上側(cè)。持針者用左手拉住左后肢跗骨或腓骨處（豬大可以助手拉?。┝ι晕⑾虼笸鹊姆较虬哑つw繃緊（或用橡皮筋扎一下），即在跖骨靠近跖側(cè)處可看或觸摸到與跖骨走向一致的靜脈血管（在同一部位30～40kg的豬可明顯看到有一條從跖側(cè)向背側(cè)的一條橫向的血管），這兩條血管均可采血。用酒精棉球消毒進(jìn)針部位。用右手把準(zhǔn)備好的一次性靜脈輸液針（靜脈輸液針的軟管用剪刀剪掉只剩2～3cm，減少血從血管出來的壓力）從遠(yuǎn)心端向近心端刺入血管（橫向這條血管從背側(cè)向跖側(cè)進(jìn)針），用準(zhǔn)備好的5ml的離心管接全血（35日齡以上用真空采血針和真空采血管）。此時(shí)左手不能松開，待全血量達(dá)到2～3ml時(shí)再松手，若提前松手針頭因角度改變血流可能減少或不出血。

處理后的一次性靜脈輸液針

真空采血管及針

2.2.2 后肢脛側(cè)靜脈采血方法

仔豬采用一人保定：豬側(cè)臥位，保定人員位于豬的背側(cè)，持針操作者位于豬的腹側(cè)。若豬右側(cè)臥位則豬的右后肢腓側(cè)著地，脛側(cè)向上。采血者用左手拉住右后肢跗骨處（豬大可以助手拉?。┝ι晕⑾虼笸鹊姆较虬哑つw繃緊（或用橡皮筋扎一下），在跖骨脛側(cè)懸蹄上方血管即怒張。右手持針以遠(yuǎn)心端向近心端進(jìn)針（35日齡以上用真空采血針和真空采血管）。進(jìn)針后左手不松開直到血量達(dá)2～3ml后用干棉花壓住后再拔針。

3 血液樣品的保存

將裝有全血的5ml的離心管編號后放入采樣盒，同時(shí)放入裝有冷源的冷藏箱中。全血樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后，若不能及時(shí)分離血清時(shí)，將裝有全血的采樣盒放入冰箱4℃冷藏保存。

采集好的全血樣品

制備好的血清樣品

4 血清的制備

4.1 未凝固全血血清的分離

全血直接放入離心機(jī)3000轉(zhuǎn)離心10min，用移液器吸取血清，裝入1.5ml離心管編號冷凍保存。

4.2 冷藏后全血的分離

冷藏后的全血從冰箱拿出后用移液器裝入吸頭沿試管壁把凝固的全血沿離心管壁轉(zhuǎn)一圈放入離心機(jī)3000轉(zhuǎn)離心20min。吸取血清，裝入1.5ml離心管編號冷凍保存。

5 經(jīng)驗(yàn)與體會

（1）完成豬只保定后等豬掙扎一會后再進(jìn)針，否則即使針扎在血管里但豬一掙扎針就滑出血管。由于具有血管的躲避特性二次進(jìn)針不容易。

（2）進(jìn)針時(shí)針頭的切口面要向上，進(jìn)針深度要達(dá)針長的2/3左右，進(jìn)針后不要松開跗骨處固定的手（或橡皮筋），防止松開后因血管彈性、方向改變而改變針的角度引起出血減少或不出血。只要固定得好這個(gè)部位出血量很快。

（3）脛側(cè)皮膚薄血管怒張明顯，容易進(jìn)針。腓側(cè)皮膚稍厚黑豬血管怒張可用手感覺血管波動，進(jìn)針要稍用力。

（4）如采血過程中出現(xiàn)開始進(jìn)針時(shí)出血很快，未到達(dá)所需采血量就不出血的情況，可調(diào)整針頭角度，不要急于拔出針。

（5）采血前一定要用酒精棉球消毒，酒精除有消毒作用外還有擴(kuò)張血管的作用，采血完成后用干棉球壓迫采血部位止血。

（6）若豬小于35日齡就不用真空采血管而用一次性靜脈輸液針，做接血，并且要把的軟管剪去一段只留3厘米左右且剪成斜口，便于血液流出。若太長則血液容易在軟管中凝固，若太短不便于接血。

（7）大于35日齡的豬用真空采血管采一頭平均1～2min可以采好。

（8）相同的全血冷藏12h后離心，分離出的血清量比沒有冷藏就分離出的血清量多。

（9）若豬日齡較大，先用保定繩將豬固定后再將其側(cè)臥位保定。

[1] 李靜雙.畜禽解剖學(xué)彩色圖譜[M].遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，2012.