甘草指紋圖譜的研究進(jìn)展

柯昌虎，嚴(yán) 慧，鄭 芳，陳琴華

0 引言

甘草(Licorice)是我國(guó)最為常見(jiàn)的中草藥之一，約60%的中藥配方中含有甘草。藥用甘草來(lái)源于烏拉爾甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)、脹果甘草(GlycyrrhizainflateBat)或光果甘草(GlycyrrhizaglabraL)的干燥根及根莖。現(xiàn)代藥理研究表明，甘草具有抗氧化、抗炎、抗病毒、解痙、抗癌、抗過(guò)敏、抗?jié)儭⒖固悄虿〉榷喾N活性[1-2]，有關(guān)甘草化學(xué)成分研究表明，甘草主要含有三萜皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖等活性物質(zhì)[2]。目前我國(guó)甘草屬植物共18種，植物來(lái)源、產(chǎn)地、變異類(lèi)型、栽培條件、生產(chǎn)方式等方面的不同均使得甘草的成分組成和含量存在差異，且僅以甘草酸或甘草苷等某個(gè)單一指標(biāo)成分難以完整而全面表現(xiàn)出甘草中藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。基于化學(xué)技術(shù)(色譜、光譜)與現(xiàn)代生物技術(shù)的指紋圖譜(Fingerprint)是近年來(lái)用于表征中藥中多成分特征的一種綜合性質(zhì)量分析方法，可以較為全面地反映出中藥多成分體系的整體狀況，并能體現(xiàn)中藥成分的復(fù)雜性和相關(guān)性，與中醫(yī)藥的傳統(tǒng)理論相適應(yīng)[3]，且已成為控制中草藥質(zhì)量的有效手段。將指紋圖譜與中藥藥效評(píng)價(jià)相結(jié)合，基于“譜效關(guān)系”，可以確定中藥特定藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本文就甘草指紋圖譜的研究成果進(jìn)行綜述。

1 色譜指紋圖譜

1.1 液相

1.1.1 不同來(lái)源甘草的高效液相色譜分析 目前，高效液相色譜法(HPLC)應(yīng)用最為廣泛，其分析速度快，信息量大，可以配置不同的檢測(cè)器，適用于甘草等各類(lèi)中藥材及其制劑指紋圖譜的建立與分析。朱中佳等[4]采用HPLC建立了10個(gè)不同產(chǎn)地甘草藥材的指紋圖譜，指認(rèn)出11個(gè)共有峰，相似度均大于0.9，從而為中藥甘草的質(zhì)量控制提供依據(jù)。李成義等[5]建立了西北地區(qū)16批商品甘草的HPLC指紋圖譜，確認(rèn)了10個(gè)特征峰，相似度均大于0.904，聚類(lèi)分析結(jié)果顯示,16批甘草共聚為4類(lèi)，該研究為西北地區(qū)商品甘草的質(zhì)量評(píng)價(jià)和等級(jí)劃分提供了依據(jù)。Dong等[6]采用HPLC-DAD分析了種子經(jīng)18 d太空飛行返回地面后培育生長(zhǎng)的甘草，HPLC指紋圖譜顯示出12批樣品共有26個(gè)共有峰，且太空飛行組中異甘草素、異甘草苷、甘草素、光甘草定4種成分的含量明顯高于對(duì)照組，表明地外環(huán)境可能會(huì)影響其次生代謝產(chǎn)物的量，也為藥用植物的航天育種提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。Chen等[7]采用LC-DAD-MS建立了葛根芩連配方顆粒的LC指紋圖譜，對(duì)其進(jìn)行歸屬研究發(fā)現(xiàn),其中有3個(gè)成分源于炙甘草。孫磊等[8]建立了10批產(chǎn)自不同地區(qū)炙甘草HPLC指紋圖譜，HPLC-MS/MS指認(rèn)出19個(gè)共有峰中的6個(gè)指紋峰，相似度范圍為0.72～0.99，為炙甘草的質(zhì)控提供了方法。另外，濮潤(rùn)等[9]建立了不同地區(qū)甘草藥材的快速高效液相色譜(RRLC)指紋圖譜，LC-MS聯(lián)用技術(shù)結(jié)合對(duì)照化合物指認(rèn)了其中6個(gè)色譜峰，70個(gè)產(chǎn)地甘草聚為脹果甘草和烏拉爾甘草兩大類(lèi)，其中烏拉爾甘草數(shù)量占84%以上，且發(fā)現(xiàn)甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷和甘草酸3個(gè)指標(biāo)成分的聯(lián)合可以有效評(píng)價(jià)甘草品種，從而為甘草商品藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1.1.2 甘草不同提取成分的高效液相色譜分析 張翠英等[10]采用RP-HPLC法建立了烏拉爾甘草水溶性成分的HPLC指紋圖譜，12批樣品中共確定了18個(gè)共有峰，其中4個(gè)特征指紋峰分別為甘草苷、異甘草苷、異甘草素和甘草酸，該研究為烏拉爾甘草藥材有效成分研究及其浸膏的質(zhì)量控制提供了參考。蘇本正等[11]采用RP-HPLC法建立了甘草飲片乙酸乙酯提取部位HPLC指紋圖譜，比較了生炙飲片乙酸乙酯部位化學(xué)成分差異，10批甘草樣品測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①不同產(chǎn)地甘草飲片圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜之間相似度均大于0.90；②甘草與炙甘草乙酸乙酯部位的化學(xué)成分有所不同，二者共有峰數(shù)目分別為10、8個(gè)，且蜜炙使甘草極性成分峰面積增大。該研究為闡明甘草蜜炙后增強(qiáng)藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，為解析甘草蜜炙原理提供了依據(jù)。Zhang等[12]基于比較分析經(jīng)口服進(jìn)入消化系統(tǒng)中的甘草成分而建立多組分連續(xù)代謝方法，在250 nm下對(duì)甘草水提取物進(jìn)行HPLC指紋圖譜分析，按照保留時(shí)間的不同標(biāo)識(shí)出13個(gè)特征組分，確定出組分2、11分別為甘草苷和甘草酸，并采用LC-MS/MS鑒別出甘草水提取物中的一系列成分。

1.1.3 不同配伍比例甘草的高效液相色譜分析 劉穎等[13]采用RP-HPLC法建立了不同比例甘草海藻配伍的HPLC指紋圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn),甘草21個(gè)共有峰峰面積隨配伍比例的不同而變化，說(shuō)明二者的配伍比例顯著地影響著甘草指紋圖譜。王亮等[14]采用HPLC對(duì)芫花甘草不同配伍比例的指紋圖譜進(jìn)行比較，并用HPLC-ESI-MS對(duì)共有峰進(jìn)行歸屬，發(fā)現(xiàn)二者配伍后成分的溶出減少，從而可能導(dǎo)致其藥理作用下降，其成果從化學(xué)成分角度為中藥配伍禁忌評(píng)價(jià)研究提供了思路和方法。陳梅等[15]采用血清HPLC指紋圖譜技術(shù)考察了芍藥甘草湯伍用的合理性，發(fā)現(xiàn)甘草單味藥有23個(gè)入血成分，配伍后二者的生物利用度明顯提高，可以產(chǎn)生相互協(xié)同作用。

1.1.4 譜效關(guān)系 以指紋圖譜為基礎(chǔ)，可以借助中藥的譜效關(guān)系來(lái)指導(dǎo)相應(yīng)的藥效和藥理研究。陳云華[16]采用HPLC確定了甘草的指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)不同來(lái)源甘草中甘草酸、甘草苷、異甘草素含量差異明顯，并采用誤差反傳人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)藥材指紋圖譜和抗菌作用進(jìn)行了組效建模和測(cè)試，指出可以通過(guò)指紋圖譜信息預(yù)測(cè)相關(guān)藥效。馬玲[17]建立了10個(gè)不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類(lèi)成分的HPLC指紋圖譜，分別確定了11個(gè)共有峰和13個(gè)共有峰，氨水引咳實(shí)驗(yàn)表明，甘草黃酮及皂苷類(lèi)成分對(duì)氨水引起的咳嗽有一定的抑制作用，小鼠致肝損傷實(shí)驗(yàn)表明，10個(gè)不同產(chǎn)地甘草皂苷類(lèi)成分均能降低四氯化碳致肝損傷引起的AST、ALT升高，從而對(duì)肝損傷具有一定的保護(hù)作用。對(duì)甘草指紋圖譜及藥效學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行灰色關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)甘草黃酮中有5個(gè)特征峰與鎮(zhèn)咳作用高度關(guān)聯(lián)，皂苷中有3個(gè)特征峰與血清中AST酶活力高度關(guān)聯(lián)、4個(gè)特征峰與血清中ALT酶活力高度關(guān)聯(lián)。

1.2 毛細(xì)管電泳 毛細(xì)管電泳法(CE)廣泛應(yīng)用于甘草等中藥材及其制劑的鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，特別適用于中藥中水溶性的極性成分分析。孫國(guó)祥等[18]采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CZE)，對(duì)6個(gè)廠家各10批以上復(fù)方甘草片進(jìn)行指紋圖譜研究，評(píng)價(jià)不同批指紋與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照指紋間的相似性，結(jié)果表明，所建立的CE指紋圖譜具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，可以用于復(fù)方甘草片的質(zhì)量控制。周逸芝等[19]采用高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)，建立了甘草飲片HPCE-DAD指紋圖譜分析方法，確定了10個(gè)共有峰，對(duì)甘草生品及其炮制品的指紋圖譜進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)二者指紋譜中共有峰的相對(duì)峰面積差異較為顯著，該方法可用于評(píng)價(jià)甘草飲片的內(nèi)在質(zhì)量。智雪枝[20]也建立了21批復(fù)方甘草片的HPCE數(shù)字化指紋圖譜，確定了18個(gè)共有峰，考察了提取溶劑、運(yùn)行電壓、背景電解質(zhì)三者對(duì)電泳圖譜的影響，并應(yīng)用系統(tǒng)指紋定量法判定了復(fù)方甘草片的質(zhì)量等級(jí)。

1.3 薄層 薄層色譜(TLC)兼有定性和定量作用，可以提供直觀形象的可見(jiàn)光或熒光色譜圖像，TLC指紋圖譜可以在同一薄層板上同時(shí)比較多個(gè)樣品，并通過(guò)獲取指紋確定組合物的身份，成為植物原料或天然產(chǎn)物快速可靠的質(zhì)量檢測(cè)工具。崔淑芬等[21]以乙酸乙酯-乙酸-甲酸-水(15∶1∶1∶2)為展開(kāi)劑，于254 nm處對(duì)來(lái)自?xún)?nèi)蒙古的5個(gè)等級(jí)的甘草樣品進(jìn)行薄層吸收掃描，建立了甘草樣品TLC指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)6個(gè)共有峰，依此建立的柱狀條形碼圖可以快速評(píng)判藥材品質(zhì)。在相同條件下又得到了來(lái)自不同產(chǎn)地的14個(gè)甘草藥材樣品的TLC指紋圖譜，也發(fā)現(xiàn)有6個(gè)共有峰，聚類(lèi)分析發(fā)現(xiàn)，正品甘草藥材有較好的相似度且三維圖譜可對(duì)不同產(chǎn)地的甘草質(zhì)量進(jìn)行直觀比較[22]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，微乳薄層色譜(METLC)指紋圖譜可以準(zhǔn)確且有效地區(qū)分不同甘草樣品的特征組成成分，從而成為快速評(píng)價(jià)甘草質(zhì)量的工具[23]。崔淑芬等[24]又建立了甘草的膠束薄層色譜(MTLC)指紋圖譜，通過(guò)優(yōu)化得到最優(yōu)膠束流動(dòng)相為：0.23 mol/L SDS+16%(v/v)正丁醇+11%(v/v)甲酸，在展距為95 mm時(shí)分離得到17個(gè)色譜峰，且分離效果良好。另外，高效薄層色譜法(HPTLC)自動(dòng)化程度高，可與其他色譜技術(shù)聯(lián)用，已成為天然產(chǎn)物中復(fù)雜化合物的有效分析工具[25]。Liu等[26]利用HPTLC準(zhǔn)確地確定了甘草的多種組分，對(duì)其進(jìn)行HPTLC指紋圖譜分析，發(fā)現(xiàn)有16個(gè)共有峰，其中8個(gè)指紋峰得到確認(rèn)，且相似性很高，表明HPTLC可以快速、準(zhǔn)確、有效地實(shí)現(xiàn)甘草質(zhì)量的評(píng)價(jià)。

1.4 氣相 不同品種及采集時(shí)間的中藥揮發(fā)性成分出峰時(shí)間及含量存在差異，氣相色譜以此可將不同中藥進(jìn)行有效區(qū)分，通過(guò)建立指紋圖譜來(lái)達(dá)到對(duì)原料藥、中藥材及其制劑質(zhì)量控制的目的。禹曉梅[27]采用GC法對(duì)10批甘草藥材進(jìn)行了研究，建立了不同產(chǎn)地甘草藥材氣相色譜指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的甘草中揮發(fā)油具有一定的相似性，相似度均在0.78以上，且藥材中十六酸的含量均很高。另外，不同產(chǎn)地甘草的成分組成大體相同，流出次序基本一致，且5、12、20、44、48 min左右10批藥材均有比較明顯的共有峰出現(xiàn)，可以判斷不同產(chǎn)地的甘草藥材揮發(fā)油的絕大部分成分是相同的，說(shuō)明甘草間具有共性，但在甘草組分的含量上存在一定的差異。

2 光譜指紋圖譜

基于振蕩指紋圖譜等非線性化學(xué)原理，方宣啟等[32]提出了非線性化學(xué)指紋圖譜的概念，建立了甘草等中藥誘導(dǎo)時(shí)間相同的非線性化學(xué)指紋圖譜，相似度評(píng)價(jià)能夠很好地將甘草從其他中藥中鑒別出來(lái)，并確立了4個(gè)產(chǎn)地甘草中活性物質(zhì)的當(dāng)量關(guān)系。非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)成為一種鑒別和評(píng)價(jià)甘草的新方法，也為其臨床使用提供了依據(jù)。

2.2 紅外 紅外光譜是鑒別化合物和確定物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的有力手段，適用的藥材范圍廣泛，對(duì)樣品無(wú)損傷，是藥物的專(zhuān)屬鑒別方法。高燕菁等[33]采用傅立葉變換紅外光譜法(FTIR)對(duì)4種批號(hào)且產(chǎn)地均為內(nèi)蒙古的炙甘草進(jìn)行質(zhì)量鑒定，發(fā)現(xiàn)所建立的紅外指紋圖譜不僅能夠提供完整的特征圖像，準(zhǔn)確而形象地鑒別藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，還可以判別各批次質(zhì)量的相關(guān)性。莫文龍等[34]采用傅立葉紅外技術(shù)對(duì)4個(gè)不同產(chǎn)地的甘草樣品進(jìn)行考察，建立其紅外指紋圖譜，聚類(lèi)分析將樣品分為2個(gè)類(lèi)別，且相同類(lèi)別中化學(xué)組分十分相似，反映出在不同地理位置和氣候條件下甘草的多樣化，從而為甘草的質(zhì)量評(píng)價(jià)和合理開(kāi)發(fā)提供參考。

另外，楊天鳴等[35]采用近紅外漫反射(NIRS)技術(shù)對(duì)來(lái)自新疆、內(nèi)蒙古(種植)、內(nèi)蒙古(野生)、甘肅4個(gè)產(chǎn)地的甘草進(jìn)行鑒別，建立其近紅外指紋圖譜。歐氏距離判別分析方法能夠清晰地反映出野生和種植的內(nèi)蒙古甘草相似程度最高，新疆甘草較為接近，甘肅甘草則相差較大，而將其與PLSDA結(jié)合則可實(shí)現(xiàn)甘草等中藥材產(chǎn)地的快速準(zhǔn)確鑒別。Wang等[36]通過(guò)多級(jí)紅外光譜(FT-IR、SD-IR和2DCOS-IR)建立了甘草的宏觀指紋圖譜分析方法，全面表征了甘草的整體及單個(gè)活性成分的指紋特征，從而有助于甘草等中草藥的綜合利用。

2.3 紫外 紫外(UV)指紋圖譜法根據(jù)藥材各成分之間的非對(duì)稱(chēng)性關(guān)系和藥材自身具有遺傳穩(wěn)定性和變異性的生物學(xué)特點(diǎn)，從整體上更為細(xì)致地反映藥材的成分信息。采用UV指紋圖譜共有峰率和變異峰率雙指標(biāo)序列法可以從整體或局部區(qū)別不同品種野生和種植甘草的遠(yuǎn)近關(guān)系。鄒華彬等[37]采用氯仿、無(wú)水乙醇及水3種溶劑系統(tǒng)提取甘草中不同極性區(qū)間成分，建立了多維共有峰率和變異率雙指標(biāo)序列紫外指紋圖譜，分析甘草樣品，發(fā)現(xiàn)野生甘草與種植甘草以及產(chǎn)地和品種不同的甘草之間差異顯著，該方法可以對(duì)兩個(gè)或多個(gè)甘草樣本進(jìn)行可靠的鑒別。王玲[38]建立了黃芪、甘草等9種中藥的UV指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)不同濃度的甘草水提醇沉液紫外吸收?qǐng)D譜相似，200～500 nm區(qū)間內(nèi)的紫外吸收值存在差異，在271.00 nm處甘草濃度與吸收值之間線性關(guān)系良好，借此可以對(duì)其進(jìn)行定量分析，從而對(duì)中藥飲片及其提取物進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。張丹等[39]采用UV測(cè)定附子與甘草不同炮制品配伍前后總生物堿、酯型生物堿含量，結(jié)合指紋圖譜研究配伍前后附子甘草總體成分變化，發(fā)現(xiàn)配伍后附子總生物堿、酯型生物堿均降低，炙甘草降低的程度要高于生甘草；從指紋圖譜分析可知附子甘草配伍后，生甘草各成分的總加權(quán)變化率總體上有所降低，而炙甘草各成分的總加權(quán)變化率總體上有所增加，從而說(shuō)明炙甘草解毒的作用強(qiáng)于生甘草，達(dá)到很好的減毒作用。

2.4 X射線 X射線圖譜可以反映出物質(zhì)的固有屬性，使其具有指紋特性，重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，在中藥鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用前景。張麗娟等[40]采用粉末X射線衍射Fouirer指紋圖譜鑒定法，對(duì)甘草對(duì)照品(2個(gè))和內(nèi)蒙古產(chǎn)甘草樣品(8個(gè))進(jìn)行分析，獲得了甘草的標(biāo)準(zhǔn)X射線衍射Fouirer指紋圖譜及特征標(biāo)記峰值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①甘草藥材對(duì)照品1#和2#具有一致的幾何拓?fù)鋱D形，共有40個(gè)衍射峰值，其中有3個(gè)特有的衍射特征標(biāo)記峰，衍射峰一致程度分別為91%、87%；②第一類(lèi)甘草藥材3#～6#具有一致的幾何拓?fù)鋱D形，共有30個(gè)衍射峰值，其中有6個(gè)特有的衍射特征標(biāo)記峰，衍射峰一致程度分別為83%、71%、75%、79%；③第二類(lèi)甘草藥材7#～10#甘草藥材對(duì)照品具有一致的幾何拓?fù)鋱D形，共有25個(gè)衍射峰值，其中有10個(gè)特有的衍射特征標(biāo)記峰，衍射峰一致程度分別為86%、63%、63%、76%；④所有甘草藥材均含有α-石英、一水草酸鈣，且含量各自存在差異。以上結(jié)果表明，X射線衍射Fouirer指紋圖譜中的幾何拓?fù)鋱D形與衍射特征標(biāo)記峰值可以作為甘草藥材的鑒定依據(jù)。

2.5 NMR1H NMR和13C NMR是鑒別中藥中有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)的有力手段，其指紋圖譜具有高度的特征性和重現(xiàn)性，且與植物品種間存在十分準(zhǔn)確的對(duì)應(yīng)關(guān)系，特別適用于中草藥的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評(píng)價(jià)。Farag等[41]研究發(fā)現(xiàn)，在600 MHz下，以氘代甲醇作為溶劑，光果甘草1H NMR圖譜顯示有3個(gè)特征區(qū)域：①查爾酮和黃烷酮類(lèi)的芳香質(zhì)子(5.5～8.0 ppm)，②糖單元的異頭質(zhì)子(4.0～5.5 ppm)，③甘草酸的甲基、亞甲基和次甲基(0.8～3.2 ppm)。在其芳香區(qū)域(5.5～9.0 ppm)中甘草查爾酮A信號(hào)相當(dāng)強(qiáng)。以上數(shù)據(jù)均表明，NMR代謝指紋分析可以有效區(qū)分脹果甘草和其他3個(gè)品種。

3 聯(lián)用技術(shù)

聯(lián)用技術(shù)的運(yùn)用實(shí)現(xiàn)了色譜法與波譜法的有力結(jié)合，它兼具分離能力和結(jié)構(gòu)鑒別能力，已成為中藥品種鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)的有效方法。段天璇等[42]以甲醇為溶劑對(duì)內(nèi)蒙古野生和人工栽培的烏拉爾甘草以及新疆脹果甘草進(jìn)行提取，建立其甲醇提取物的HPLC-DAD及HPLC-MS指紋圖譜，結(jié)合文獻(xiàn)推斷出17個(gè)色譜峰中19個(gè)可能的成分，并發(fā)現(xiàn)野生和栽培、野生不同品種甘草的色譜峰的數(shù)量不同、相同色譜峰的峰面積存在差異，從而為甘草質(zhì)量、品種、種植及譜效關(guān)系等各類(lèi)研究提供較全面的化學(xué)依據(jù)。王愛(ài)潮等[43]建立了14批溫膽湯的UPLC-UV指紋圖譜，共標(biāo)記了22個(gè)共有峰，相似度在0.863～0.998，分別以?xún)?nèi)蒙古3個(gè)產(chǎn)地的甘草作為陰性對(duì)照品，發(fā)現(xiàn)3號(hào)、9號(hào)、10號(hào)、18號(hào)和20號(hào)峰來(lái)源于甘草；UPLC-MS/MS法定性分析發(fā)現(xiàn)9號(hào)色譜峰為甘草苷，18號(hào)色譜峰為甘草酸，所建立的UPLC-UV-MS/MS指紋圖譜方法可靠、準(zhǔn)確，可以將其應(yīng)用于溫膽湯等復(fù)方的質(zhì)量控制。

Farag等[41]對(duì)刺果甘草、脹果甘草、光果甘草及烏拉爾甘草根部的代謝物和指紋圖譜進(jìn)行了比較分析，LC-MS分析結(jié)果顯示，包括三萜皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)和香豆素類(lèi)在內(nèi)共有61個(gè)化合物，其中有46個(gè)得到確認(rèn)，所有化合物中皂苷類(lèi)的豐度最高。采用GC-MS對(duì)甘草代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)主要代謝物為糖類(lèi)、脂肪酸和酚酸。在刺果甘草中，糖類(lèi)和酚酸衍生物含量較高，其他甘草品種中類(lèi)黃酮和甘草酸的含量占據(jù)優(yōu)勢(shì)，聯(lián)用技術(shù)的使用有助于確定物種之間的關(guān)系。

4 生物指紋圖譜

中藥生物指紋圖譜是從分子水平揭示中藥及其與細(xì)胞作用后的基因和蛋白的表達(dá)特征，研究解決化學(xué)成分和藥理作用、藥效活性的相關(guān)性，對(duì)于中藥品種鑒別更加準(zhǔn)確可靠。

周成明等[44]采用AFLP標(biāo)記技術(shù)對(duì)烏拉爾甘草栽培新品系“民勤1號(hào)”、“喀什1號(hào)”、“阿克蘇1號(hào)”和常規(guī)栽培品系內(nèi)蒙古烏拉爾甘草進(jìn)行遺傳基礎(chǔ)研究，篩選得到8對(duì)引物組合，對(duì)其進(jìn)行多態(tài)性分析，并以E-AAC/M-CAG組合構(gòu)建不同來(lái)源甘草的指紋圖譜，UPGMA聚類(lèi)分析將4個(gè)來(lái)源甘草分為4組，表現(xiàn)出不同的親緣關(guān)系，“民勤1號(hào)”、“喀什1號(hào)”、“阿克蘇1號(hào)”三者的基因構(gòu)成較為獨(dú)特，可以作為選育品種進(jìn)行深入研究。

劉婷[45]采用ISSR分子標(biāo)記法對(duì)甘草、脹果甘草和光果甘草3種藥用甘草進(jìn)行遺傳多樣性研究，5條引物對(duì)60份DNA樣品進(jìn)行ISSR擴(kuò)增，共擴(kuò)展出886條有效條帶，其中多態(tài)性條帶共498條，甘草、脹果甘草和光果甘草的多態(tài)率分別為48.57%、62.86%和57.14%，三者多態(tài)性條帶分別為148、187和162條，采用UPGMA聚類(lèi)法發(fā)現(xiàn)三者Nei氏遺傳距離分別為0.44、0.47和0.52，三者Nei氏相似系數(shù)范圍為0.45～0.51，甘草與脹果甘草、光果甘草的遺傳相似系數(shù)分別為0.51和0.45，且發(fā)現(xiàn)ISSR分子標(biāo)記指紋圖譜法和化學(xué)色譜指紋圖譜法所得結(jié)果具有一致性，從而為甘草資源的利用和撫育提供了科學(xué)依據(jù)。

5 小結(jié)

甘草是我國(guó)常用的中藥材，種類(lèi)多，質(zhì)量不一。植物來(lái)源、藥材產(chǎn)地、生產(chǎn)方式等因素均顯著影響甘草的質(zhì)量，僅以其單個(gè)成分也難以完整反映甘草的真實(shí)品質(zhì)，對(duì)其制定科學(xué)可靠的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系顯得尤為重要。甘草化學(xué)指紋圖譜技術(shù)主要借助光譜、色譜等現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)手段，可以較為全面地反映甘草所含化學(xué)成分的真實(shí)情況，進(jìn)而對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評(píng)價(jià)。甘草生物指紋圖譜則在分子水平上反映其遺傳多樣性，已成為真?zhèn)舞b別的有力手段。因此，綜合運(yùn)用各種現(xiàn)代技術(shù)對(duì)甘草進(jìn)行深入全面的分析研究，不僅可以進(jìn)一步明確甘草藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，全面控制甘草藥材及飲片的質(zhì)量，還可以進(jìn)一步完善其鑒別體系和質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng)，為甘草的合理開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

[1] Zhu Z,Tao W,Li J,et al.Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species[J].J Sep Sci,2016,39(3):473-482.

[2] Zhang Q,Ye M.Chemical analysis of the Chinese herbal medicine Gan-Cao (licorice)[J].J Chromatogr A,2009,1216(11):1954-1969.

[3] 李強(qiáng),杜思邈,張忠亮,等.中藥指紋圖譜技術(shù)進(jìn)展及未來(lái)發(fā)展方向展望[J].中草藥,2013,44(22):3095-3104.

[4] 朱中佳,熊富良,張雪瓊,等.不同產(chǎn)地甘草藥材高效液相色譜指紋圖譜研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,30(8):1090-1091.

[5] 李成義,馬艷茹,李越峰,等.西北地區(qū)商品甘草HPLC指紋圖譜[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(9):129-132.

[6] Dong YY,Gao WY,Zhang JZ,et al.Quantification of four active ingredients and fingerprint analysis of Licorice(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)after spaceflight by HPLC-DAD[J].Res Chem Intermed,2012,38(8):1719-1731.

[7] Chen L,Tang YP,Chen MJ,et al.Chemical correlation between Gegen Qinlian dispensing granule and its four raw herbs by LC fingerprint[J].Phytomedicine,2010,17(2):100-107.

[8] 孫磊,靳勇,劉曉晴,等.炙甘草藥材指紋圖譜研究[J].中國(guó)中藥雜志,2014,39(11):2056-2059.

[9] 濮潤(rùn),王衛(wèi)星,王京輝,等.甘草藥材的快速HPLC指紋圖譜分析[J].中國(guó)中藥雜志,2008,33(22):2650-2652.

[10]張翠英,常斷玲,周應(yīng)群,等.烏拉爾甘草水溶性成分的HPLC指紋圖譜研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,32(12):842-845.

[11]蘇本正,周倩,孫立立.甘草飲片乙酸乙酯提取部位HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥,2011,33(2):203-207.

[12]Zhang L,Zhao H,Liu Y,et al.Metabolic routes along digestive system of licorice:multicomponent sequential metabolism method in rat[J].Biomed Chromatogr,2016,30(6):902-912.

[13]劉穎,武傳文,趙春杰,等.甘草與海藻配伍對(duì)甘草高效液相指紋圖譜的影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,13(10):235-238.

[14]王亮,張振秋,鄧仕任,等.芫花甘草不同配伍比例的HPLC指紋圖譜探討[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015,21(2):80-82.

[15]陳梅,姚楠,周秋香,等.血清HPLC指紋圖譜法研究芍藥甘草湯伍用的合理性[J].中國(guó)藥房,2010,21(15):1347-1350.

[16]陳云華.不同來(lái)源甘草的化學(xué)成分及其相關(guān)藥效的研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2008.

[17]馬玲.甘草黃酮及皂苷類(lèi)成分譜效關(guān)系研究[D].銀川:寧夏醫(yī)科大學(xué),2015.

[18]孫國(guó)祥,孫毓慶,王宇.復(fù)方甘草片的毛細(xì)管電泳指紋圖譜研究[J].中南藥學(xué),2003,1(3):131-134.

[19]周逸芝,韓樂(lè),劉訓(xùn)紅,等.甘草飲片HPCE指紋圖譜研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2012,29(5):405-409.

[20]智雪枝.復(fù)方甘草片數(shù)字化指紋圖譜研究[D].沈陽(yáng):沈陽(yáng)藥科大學(xué),2009.

[21]崔淑芬,蔣軼倫,王小如.薄層色譜指紋圖譜在甘草GAP生產(chǎn)與質(zhì)控中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2004,18(4):3-6.

[22]崔淑芬,蔣軼倫,王小如.甘草藥材薄層掃描指紋圖譜研究[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2004,21(5):367-370.

[23]崔淑芬.微乳薄層色譜及其在中藥甘草指紋圖譜質(zhì)量控制方面的應(yīng)用研究[D].廈門(mén):廈門(mén)大學(xué),2006.

[24]崔淑芬,林煥冰,王小如.膠束薄層色譜分離甘草活性成分的影響因素及優(yōu)化方法[J].藥物分析雜志,2012,32(3):505-511.

[25]Nicoletti M.HPTLC fingerprint:a modern approach for the analytical determination of botanicals[J].Rev Bras Farmacogn,2011,21(21):818-823.

[26]Liu X,Li Q,Lv C,et al.Combination of the advantages of chromatographic methods based on active components for the quality evaluation of licorice[J].J Sep Sci,2015,38(24):4180-4186.

[27]禹曉梅.甘草藥材指紋圖譜研究及其與清肝注射液非揮發(fā)性成分的相關(guān)分析[D].長(zhǎng)沙:中南大學(xué),2007.

[28]張孟民.化學(xué)振蕩技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J].中草藥,2006,37(7):961-965.

[29]張秀莉,王金珠,王旭,等.幾種豆科中草藥的電化學(xué)指紋圖譜鑒別[J].佳木斯大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2010,28(3):429-430.

[30]李祖君,鄒桂華,李守君,等.甘草參與的B-Z振蕩反應(yīng)研究[J].分子科學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(1):14-18.

[32]方宣啟,張?zhí)┿?趙哲,等.非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)在鑒別和評(píng)價(jià)甘草及其臨床應(yīng)用中的作用[J].科學(xué)通報(bào),2010,55(17):1661-1669.

[33]高燕菁,林佳佳,張劍平,等.4種炙甘草樣品的質(zhì)量分析[J].中國(guó)藥業(yè),2011,20(19):36-37.

[34]莫文龍,唐軍,王強(qiáng),等.聚類(lèi)分析在甘草紅外測(cè)定指紋圖譜中的應(yīng)用研究[J].中國(guó)石油和化工標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量,2013,(3):27-28.

[35]楊天鳴,張璐,付海燕,等.不同產(chǎn)地甘草的近紅外指紋圖譜模式識(shí)別鑒別方法[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(14):11-14.

[36]Wang Y,Wang P,Xu CH,et al.Macro-fingerprint analysis through separation of licorice based on FT-IR and 2DCOS-IR[J].J Mol Struct,2014,1070(1):1-9.

[37]鄒華彬,袁久榮,呂青濤,等.共有峰率和變異率雙指標(biāo)序列分析法分析甘草紫外指紋圖譜[J].中藥材,2003,26(9):625-629.

[38]王玲.黃芩等中藥的紫外指紋圖譜及黃芩苷活性研究[D].青島:青島農(nóng)業(yè)大學(xué),2011.

[39]張丹,葉強(qiáng).附子配伍不同甘草炮制品及其比例的研究[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2013,33(13):1102-1104.

[34]張麗娟,龔寧波,鄭笑為,等.中藥材甘草的X射線衍射Fourier指紋圖譜鑒定研究[J].中藥材,2004,27(5):332-335.

[41]Farag MA,Porzel A,Wessjohann LA.Comparative metabolite profiling and fingerprinting of medicinal licorice roots using a multiplex approach of GC-MS,LC-MS and 1D NMR techniques[J].Phytochemistry,2012,76:60-72.

[42]段天璇,馬長(zhǎng)華,王文全,等.HPLC-MS法鑒定甘草的指紋圖譜[J].中國(guó)藥師,2009,12(4):414-417.

[43]王愛(ài)潮,祁東利,羅配,等.溫膽湯UPLC-UV-MS/MS指紋圖譜研究[J].中草藥,2014,45(23):3408-3413.

[44]周成明,許彬,張金屯,等.烏拉爾甘草優(yōu)良品系選育研究(Ⅰ)-4個(gè)來(lái)源甘草遺傳基礎(chǔ)的AFLP分析[J].中草藥,2007,38(7):1078-1081.

[45]劉婷.三種藥用甘草遺傳多樣性和次生代謝物含量研究[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),2011.