iASPP表達與鼻咽癌患者臨床病理學特征及預后的關系*

焦紅葉，薛 飛，程 友

(南京軍區(qū)總醫(yī)院耳鼻喉科，江蘇南京 210000)

鼻咽癌是耳鼻咽喉科較為常見的惡性腫瘤，且近5年發(fā)病率逐年上升[1]。鼻咽癌易早期發(fā)生淋巴結或血行轉移，預后較差[2]。 p53基因是重要的抗癌基因，對腫瘤細胞的發(fā)生、增殖、分化及凋亡起調控作用，p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the ASPP family，iASPP) 可以發(fā)揮拮抗p53的生物學效應，在促進癌細胞異常持續(xù)性增殖過程中發(fā)揮重要作用，也提高了癌細胞的侵襲能力[3-6]。因此，iASPP可為鼻咽癌的早期診斷及預后評估提供實驗室參考指標。為探討iASPP在鼻咽癌診斷中的價值，本研究分析了鼻咽癌患者iASPP表達水平，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2010年1月至2012年12月在本院經病理學證實為鼻咽癌的133例患者，同時選取本院病理科既往收集的30例患者鼻咽部慢性黏膜炎活組織蠟塊作為對照組。鼻咽癌組133例，其中男89例、女44例，年齡39～75歲，平均(53.3±12.5)歲，病理學分型：Ⅰ型6例、Ⅱ型13例、Ⅲ型114例，TNM分期：Ⅰ期13例、Ⅱ期33例、Ⅲ期57例、Ⅳ期30例，92例患者獲得隨訪。對照組30例，其中男20例、女10例，年齡33～70歲，平均(51.4±15.0)歲。納入標準：(1)鼻咽癌的診斷依據中華醫(yī)學會頭頸外科學分會制訂的診斷標準[6]；(2)年齡18～79歲；(3)所有患者均經過病理活檢或術后病理學證實；(4)獲取組織學標本前，患者無鼻咽癌放化療史；(5)患者一般資料、臨床資料收集完整。排除標準：(1)具有放化療史；(2)復發(fā)性鼻咽癌患者；(3)各項臨床資料不完整，無法納入統(tǒng)計的患者。兩組患者年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學 采用石蠟切片(切片厚度3 mm)脫蠟至水，切片厚度3 mm，3%過氧化氫(H2O2)室溫孵育5 min；去離子水沖洗3次，每次3 min，采用10%牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL純水)封閉，室溫孵育 5 min；加入iASPP抗體(鼠來源，南京碧云天生物科技有限公司)，37 ℃孵育2 h；磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗3次，每次5 min，滴加辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗(兔來源，購自羅氏檢測公司)，37 ℃ 孵育30 min；PBS沖洗3次，每次5 min，加入硝基四氮唑藍/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)顯色5 min，復染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。OLIPICS電子顯微鏡購自上海精密儀器有限公司，配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。

1.2.2判斷標準 陽性著色的iASPP蛋白定位于細胞質、細胞核，顯色為黃色、褐色，(1)依據顯色強度：無色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、褐色及黑色(3分)；(2)依據陽性細胞所占比例： <5%為0分、≥5%～≤25%為1分、 >25%～≤50%為2分、>50%～≤75%為3分、>75%為4分。兩種積分之和，0～1分為陰性(-)；2分為弱陽性(+)；3～5分為陽性(++)、6～7分為強陽性(+++)。

2 結 果

2.1兩組標本中iASPP蛋白陽性表達率比較 鼻咽癌組織中iASPP蛋白陽性表達率(72.18%)高于對照組的20.00%(χ2=28.461，P<0.01)，見表1、圖1。

表1 兩組標本中iASPP蛋白陽性表達率比較(n)

A:鼻咽部慢性黏膜炎組織;B:鼻咽癌組織

圖1免疫組織化學染色(×400)

2.2iASPP蛋白表達與鼻咽癌患者臨床相關特征的關系 原發(fā)腫瘤(T3～T4)、發(fā)生淋巴結轉移患者iASPP蛋白陽性表達率高于原發(fā)腫瘤(T1～T2)、未發(fā)生淋巴結轉移的患者(P<0.05)，而iASPP表達與患者的年齡、性別、病理學分型、TNM分期無關(P>0.05)，見表2。

表2 iASPP蛋白表達與鼻咽癌患者的臨床相關特征的關系[n(%)]

2.3隨訪結果分析 92例鼻咽癌患者獲得隨訪，其中iASPP蛋白陽性表達患者63例、陰性表達患者29例，iASPP蛋白陽性表達患者的5年生存率(71.43%)與陰性表達患者(86.21%)比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.993，P=0.084)，見圖2。

圖2 鼻咽癌患者的5年生存函數圖

3 討 論

臨床上鼻咽癌早期血行轉移率可達25%以上，臨床預后較差，5年生存率不足35%[7-8]。惡性腫瘤依靠超聲或CT等早期診斷較困難。而通過對鼻咽癌發(fā)病過程中相關生物學機制的研究，可以為鼻咽癌患者的早期診斷提供潛在的理論參考指標。

p53/CYC/NOTCH信號通路及p53/HES信號通路的激活，可以促進上游轉錄調節(jié)基因的激活，提高轉錄增強子或啟動子的活性，進而促進癌細胞細胞周期的調控，促進癌細胞凋亡[9-10]。而iASPP通過拮抗性抑制p53受體，進而沉默了p53導致的保護性效應的產生[11]。iASPP對于相關保護性信號通路的抑制，促進了癌細胞的自我增殖，并提高了浸潤能力，促進了病情進展[3，12]。已有的研究探討了iASPP在鼻咽癌患者病灶組織中的異常表達，但缺乏對于iASPP的表達與患者臨床病理特征間關系的研究。

本研究發(fā)現，在鼻咽癌病灶組織中，iASPP的表達明顯上升，表達陽性率高于正常組織，提示iASPP可能參與了鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展過程。侯文群等[13]和WANG等[14]通過回顧性分析研究了73例患者臨床資料，從免疫組織化學結果中可以發(fā)現明顯的iASPP表達陽性率的上升，且iASPP的陽性率越高，患者的病情越嚴重、預后越差，這與本研究的結果一致。在發(fā)生了淋巴結轉移的患者中，iASPP的陽性表達率較高，提示iASPP促進了癌細胞對于淋巴結的浸潤。此外，iASPP的表達與鼻咽癌原發(fā)灶的范圍有關，提示在癌細胞早期浸潤或擴張過程中，iASPP的生物活性作用可能較為劇烈，也提示iASPP的表達對于原發(fā)部位惡性腫瘤的生物學調控作用較為明顯，而對于轉移或淋巴結轉移等部位的調控作用較弱。

綜上所述，鼻咽癌患者癌組織中iASPP的表達上調，與患者的淋巴結轉移、原發(fā)腫瘤的范圍有關，但本研究對于iASPP在鼻咽癌患者中血清學診斷價值分析不足，存在一定局限性。

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