W1602877-京族藥浴液對(duì)家兔的皮膚刺激性及急性毒性的研究

周 麗，許文波，張傳凱，陳 玲

(1. 廣西防城港市第一人民醫(yī)院，廣西 防城港 538021；2. 廣西防城港市衛(wèi)生計(jì)生委，廣西 防城港 538001)

新生兒高膽紅素血癥是新生兒期常見問題之一，部分高未結(jié)合膽紅素血癥患兒可發(fā)生膽紅素腦病，一般多留有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，重者甚至死亡，給社會(huì)和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)[1]。相關(guān)報(bào)道顯示，及時(shí)有效的早期干預(yù)可避免由于黃疸程度重引發(fā)的膽紅素腦病、核黃疸，降低重癥病率[2-3]。傳統(tǒng)中醫(yī)藥對(duì)新生兒高膽紅素血癥的防治效果明顯，由于新生兒皮膚嫩薄，體表面積大，藥物易于透過吸收，故中藥藥浴廣泛用于高膽紅素血癥的防治，早期應(yīng)用能降低高膽紅素血癥的發(fā)生率，且使用簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，無過敏性和刺激性及毒性等反應(yīng)[4-8]。京族藥浴在防城港市民間長(zhǎng)期應(yīng)用，是京族民眾傳統(tǒng)的新生兒退黃措施，為更科學(xué)地深入探討評(píng)價(jià)京族藥浴液的安全性，筆者對(duì)家兔進(jìn)行了皮膚給藥刺激性試驗(yàn)和急性毒性試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1藥物 京族藥浴液，用紅藍(lán)草、抹藥(廣防風(fēng))、桃子葉各200 g加水5 000 mL，煎煮至500 mL，藥物濃度為1.2 g/mL的生藥材，為臨床用藥的4倍[1]。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡健康家兔，體質(zhì)量1.8～2.5 kg，雌雄各半。由廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK桂2014-0002。動(dòng)物均飼養(yǎng)于廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物房，溫度23～25 ℃，濕度約50%。試驗(yàn)期間動(dòng)物單獨(dú)分籠飼養(yǎng)，喂養(yǎng)青飼料，自由飲水。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)分組與給藥 取25只4周齡家兔，按隨機(jī)數(shù)字表法分為完整皮膚單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)組、完整皮膚多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)組、破損皮膚單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)組、破損皮膚多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)組以及空白對(duì)照組，每組5只。試驗(yàn)前24 h將家兔脊柱兩側(cè)去毛(約50 cm2)，分別作為給藥區(qū)和對(duì)照區(qū)。破損皮膚組用無菌針頭于脫毛區(qū)劃“#”字(只損傷角質(zhì)層，不傷及皮下組織)，以表皮出血絲為度。除空白對(duì)照組外，其他各組家兔給藥區(qū)均涂抹京族藥浴液，對(duì)照區(qū)涂抹等量生理鹽水，以約2 cm2的消毒紗布覆蓋，用無刺激性膠布加以固定。

1.3.2單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn) 按“1.3.1”項(xiàng)下方法，給藥1次，給藥24 h后用雙蒸水擦洗以去除殘留藥液。觀察給藥后1 h、24 h、48 h、72 h給藥部位皮膚有無紅斑、水腫等情況，并參考文獻(xiàn)[9]中方法進(jìn)行皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分[0分：無紅斑或水腫；1分：輕微紅斑或水腫(勉強(qiáng)可見)；2分：明顯紅斑或輕度水腫(皮膚隆起輪廓清楚)；3分：中、重度紅斑或中度水腫(皮膚隆起約1 mm)；4分：嚴(yán)重紅斑(紫紅色)至輕微焦痂形成或重度水腫(皮膚隆起超過1 mm，范圍擴(kuò)大)]和刺激強(qiáng)度的評(píng)價(jià)(0～0.5分：無刺激性；>0.5～2.0分：輕刺激性；>2.0～6.0分：中刺激性；>6.0～8.0分：強(qiáng)刺激性)。

1.3.3多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn) 方法同“1.3.2”項(xiàng)，每天于同一部位給藥1次，每次6 h，連續(xù)7 d。從第2天開始，每次給藥前應(yīng)剪毛，用雙蒸水清除殘留藥物，1 h后觀察結(jié)果，并進(jìn)行皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分及皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。停藥后1 h、24 h、48 h、72 h繼續(xù)觀察給藥部位皮膚有無紅斑、水腫、色素沉著、潰爛、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或菲薄等現(xiàn)象。于實(shí)驗(yàn)開始前后抽取家兔耳動(dòng)脈血，取血清檢查肝、腎功能，并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)采取受試部位皮膚組織行HE染色進(jìn)行病理檢查，按皮膚刺激性試驗(yàn)受試皮膚病理組織學(xué)檢測(cè)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[a.棘層肥厚輕度(表皮為正常厚度1.5～3倍)為1分，中度(表皮為正常厚度>3～4倍)為2分，重度(表皮為正常厚度4倍以上)；b. 顆粒層增厚為1分；c. 角層增厚為1分； d. 顆粒層缺乏為1分；e.角化不全為1分；f.表皮細(xì)胞空泡化或細(xì)胞內(nèi)水腫或基底細(xì)胞液化變性為1分；g.棘細(xì)胞間水腫為1分，水泡形成為2分；h. 表皮壞死輕度(占表皮切面的1/3以下)為8分，中度(占表皮切面的>1/3～2/3)為10分，重度(占表皮切面的2/3以上)為15分；i.真皮結(jié)締組織血管擴(kuò)張充血或水腫為1分；j.膠原纖維變性或解離(指膠原纖維分離成細(xì)小碎片)為1分；k.真皮炎性細(xì)胞浸潤(rùn)輕度為1分，中度為2分，重度為3分]進(jìn)行評(píng)分：按總分為(a+b+c+d+e+f+g)+(i+j+k)或h+(i+j+k)選擇總分較大者。

1.3.4肝、腎功能指標(biāo)檢測(cè) 于實(shí)驗(yàn)開始前、7 d后分別抽取家兔耳動(dòng)脈血，離心后取血清，用日本東芝TBA-2000FR 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肝功能指標(biāo)[總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBil)、直接膽紅素(DBil)]及腎功能指標(biāo)[血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)]水平，試劑盒為北京利德曼生化股份有限公司生產(chǎn)，均由廣西防城港市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科專業(yè)人員檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1一般情況 試驗(yàn)家兔在給藥期間反應(yīng)好、食欲佳，大小便正常，無反應(yīng)差、局部紅腫、抓痕及死亡等情況。

2.2皮膚給藥刺激性試驗(yàn) 完整皮膚單次試驗(yàn)組、破損皮膚單次試驗(yàn)組以及空白對(duì)照組皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分和皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分均為0分；完整皮膚多次試驗(yàn)組用藥后各時(shí)間點(diǎn)和停藥后各時(shí)間點(diǎn)皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分和病理組織檢查積分均為0分；破損皮膚多次試驗(yàn)組用藥后2，3，5 d皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分為0分，7 d為0.2分，停藥后各時(shí)間點(diǎn)均為0分，病理組織檢查積分均為0.2分；多次試驗(yàn)各組皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分均為0分。

2.3病理學(xué)檢查 取完整皮膚和破損皮膚多次給藥皮膚刺激試驗(yàn)組家兔受試部位的皮膚組織行病理學(xué)檢查，顯微鏡下可見皮膚組織完整，無結(jié)構(gòu)紊亂，無出血點(diǎn)、水腫、表皮無增厚或菲薄、壞死，給藥區(qū)與對(duì)照區(qū)比較無明顯差異。HE染色鏡下表現(xiàn)見圖1～4。

2.4急性毒性試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)后，完整皮膚多次試驗(yàn)組TBil水平明顯低于實(shí)驗(yàn)前(P<0.05)，DBil水平明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，破損皮膚多次試驗(yàn)組ALB和DBil水平均明顯低于實(shí)驗(yàn)前(P均<0.05)，見表1。完整皮膚多次試驗(yàn)組和破損皮膚多次試驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)后BUN、Cr、UA水平與實(shí)驗(yàn)前及空白對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，見表2。

圖1 完整皮膚多次試驗(yàn)組對(duì)照區(qū)HE染色表現(xiàn)(×400)

圖2 完整皮膚多次試驗(yàn)組給藥區(qū)HE染色表現(xiàn)(×400)

圖3 破損皮膚多次試驗(yàn)組對(duì)照區(qū)HE染色表現(xiàn)(×400)

圖4 破損皮膚多次試驗(yàn)組給藥區(qū)HE染色表現(xiàn)(×400)

3 討 論

中醫(yī)認(rèn)為，黃疸多因濕熱之氣經(jīng)孕母侵入胎兒，或嬰兒于胎產(chǎn)之時(shí)或生后受濕熱邪毒而生。同時(shí)新生兒臟腑嬌嫩，脾運(yùn)不全，受濕熱之邪侵入后未能完全散除，郁結(jié)于體內(nèi)，熏蒸肝膽，導(dǎo)致膽汁淤積，透過表皮而顯黃染[8]，故清熱解毒、疏肝利濕、益氣健脾為退黃治療之關(guān)鍵。京族藥浴液主要是用紅藍(lán)草、抹藥、桃子葉等煎水泡洗，紅藍(lán)草、抹藥、桃子葉均具清熱解毒、祛風(fēng)利濕、利膽退黃之功效[10-14]，且單味藥未見有過敏性、刺激性及毒性反應(yīng)[15-16]。本研究對(duì)其安全性進(jìn)行了進(jìn)一步研究，皮膚刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無論是單次用藥還是多次用藥，京族藥浴液對(duì)完整和破損皮膚均無刺激性；皮膚組織病理學(xué)檢查中，有1只家兔用藥側(cè)與生理鹽水側(cè)均出現(xiàn)皮膚輕微紅斑，皮膚病理檢查有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及輕度間質(zhì)水腫，可能與該家兔在試驗(yàn)中掙扎過猛，不小心碰到固定器碰傷所致，其余家兔用藥側(cè)與生理鹽水側(cè)皮膚組織病理學(xué)檢查均無異常；肝腎功能檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)后完整皮膚多次試驗(yàn)組TBil水平降低，破損皮膚多次試驗(yàn)組ALB和DBil水平降低，完整皮膚多次試驗(yàn)組和破損皮膚多次試驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)后BUN、Cr、UA水平與實(shí)驗(yàn)前及空白對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果說明京族藥浴液對(duì)皮膚無刺激性，對(duì)肝、腎功能無明顯影響，臨床應(yīng)用安全。

表1 多次試驗(yàn)組和空白對(duì)照組家兔肝功能指標(biāo)水平比較

注：①與實(shí)驗(yàn)前比較，P<0.05；②與對(duì)照組比較，P<0.05。

表2 多次試驗(yàn)組和空白對(duì)照組腎功能指標(biāo)水平比較

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