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    稀土鈰對(duì)芥菜生理效應(yīng)及其土壤酶系統(tǒng)影響研究

    2018-01-30 08:57:06游露安禮航劉敏超
    綠色科技 2018年8期

    游露 安禮航 劉敏超

    摘要:通過水培—土培實(shí)驗(yàn),研究了芥菜在Ce的6個(gè)濃度梯度下的葉綠素含量、根系活力、抗氧化酶活性和土壤酶活性。結(jié)果表明:低濃度Ce處理能促進(jìn)植物的生長(zhǎng),而當(dāng)其超過某一濃度時(shí)則對(duì)植物起抑制作用,并對(duì)植物產(chǎn)生毒害,到土壤Ce含量為1500 mg/L時(shí),植株生長(zhǎng)已受到明顯抑制作用;植物的生理效應(yīng)能很好的反映植株的健康情況,隨著土壤Ce含量增加,芥菜中葉綠素含量、根系活力、SOD活性、POD活性、CAT活性總體上均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。當(dāng)超過某一濃度(1500 mg/L)后,Ce對(duì)芥菜的毒害作用隨Ce濃度增加而增強(qiáng);土壤酶活性不僅受到根際土壤環(huán)境的影響,而且不同種類的酶受到根際土壤影響的效應(yīng)也不相同。芥菜根際土壤中,土壤腺酶、磷酸酶、纖維素酶、轉(zhuǎn)化酶時(shí)Ce均表現(xiàn)為激活效應(yīng),而過氧化氫酶則表現(xiàn)為先激活后抑制。本研究旨在為芥菜對(duì)鈰污染土壤的修復(fù)能力提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),同時(shí)進(jìn)一步為受污區(qū)特別是稀土礦區(qū)的蔬菜食用安全提供科學(xué)依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:稀土鈰;芥菜;生理效應(yīng);土壤酶活性

    中圖分類號(hào):S154.2

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1674-9944(2018)8-0075-04

    1 引言

    中國(guó)是世界稀土資源最為豐富的國(guó)家。同時(shí)也承擔(dān)著世界90%以上的市場(chǎng)需求。近年來,由于稀土不合理開采、冶煉及稀土微肥的廣泛使用,導(dǎo)致土壤中稀土元素含量不斷提高,稀土污染日益嚴(yán)重,蔬菜中稀土元素的積累量也有上升趨勢(shì)[1,2]。Liang[3]等研究顯示,我國(guó)稀土礦區(qū)水、土壤環(huán)境中稀土含量較高,導(dǎo)致蔬菜等作物稀土含量大于國(guó)家食物限量標(biāo)準(zhǔn)的10~20倍。李小飛[4]等研究也發(fā)現(xiàn),福建省長(zhǎng)汀縣稀土礦區(qū)芋頭與空心菜稀土元素的含量分別可達(dá)3.68 mg/kg和0.92mg/kg,超過了蔬菜衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)限值(0.7 mg/kg)。

    本研究以芥菜為材料,研究了鈰脅迫下芥菜的生理效應(yīng)及其土壤酶活性變化規(guī)律,旨在為受污區(qū)特別是稀土礦區(qū)的蔬菜食用安全提供科學(xué)依據(jù)。

    2 材料與方法

    2.1 實(shí)驗(yàn)材料

    本實(shí)驗(yàn)所采用的蔬菜包括油麥菜、芥菜等在內(nèi)的17種蔬菜。種子購(gòu)于江門市利隆種業(yè)有限公司。種植前,選取優(yōu)良種子于水中浸泡24 h,之后用紗布包好放入培育箱控溫催芽,待種子露出白牙尖后均勻的播種于施足基肥的土壤里,待長(zhǎng)大2~3片真葉后用于盆栽實(shí)驗(yàn)。供試土壤取自廣東省江門市東湖公園園林土,土壤經(jīng)風(fēng)干、壓碎過5 mm篩。

    2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

    2.2.1 篩選實(shí)驗(yàn)

    選取苗期約15 d,生長(zhǎng)基本一致的供試植物的植株培養(yǎng)于1/4 Hoagland營(yíng)養(yǎng)液中,每盆種植3株,pH值保持在6~6.5,每3天更換一次營(yíng)養(yǎng)液,保持連續(xù)通氣,等到菜苗適應(yīng)了盆中營(yíng)養(yǎng)液環(huán)境后,按濃度加入CeCl2·7H20,質(zhì)量濃度設(shè)置為50 mg,/L(以Ce3+計(jì))。每處理重復(fù)3次,自然條件下培養(yǎng)22 d后收獲。并將其分可食部分與不可食部分進(jìn)行采樣分析,測(cè)定Ce元素含量。

    2.2.2 濃度梯度實(shí)驗(yàn)

    供試植物為芥菜,Ce3+設(shè)6個(gè)質(zhì)量濃度(單位為mg/L):100、300、600、900、1 200、1500,以CeC13·7H20形態(tài)加入。

    2.3 樣品處理與測(cè)定方法

    2.3.1 樣品的預(yù)處理

    植物樣品:用電子天平稱取一定量的樣品于干凈的瓷坩堝中,用電熱板低溫炭化2~3 h,之后用坩堝鉗將瓷坩堝轉(zhuǎn)置馬弗爐內(nèi).以每升湍100℃停半小時(shí)直至600℃,5~6 h即可灰化完畢[8]。冷卻至室溫后,向瓷坩鍋內(nèi)加入5 mL 10%的HNO3,置電熱板上進(jìn)行低溫消化,直到堝內(nèi)快蒸干時(shí),加入3 mL1%的稀硝酸,溶解并轉(zhuǎn)入容量瓶中,搖勻定容,以備測(cè)定。

    土壤樣品:取出土樣,自然風(fēng)干,壓碎后進(jìn)行研磨并過100目尼龍篩,封裝并貼好標(biāo)簽置于陰涼處,以備后期測(cè)定。

    2.3.2 測(cè)定方法

    葉綠素含量:采用乙醇提取法;根系活力采用TTC法,具體操作參照李合生主編植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)測(cè)定方法[6];SOD活性:NBT光化還原法;CAT活性:高錳酸鉀滴定法;POD:愈創(chuàng)木酚法;土壤過氧化氫酶活性:高錳酸鉀滴定法;磷酸酶活性:苯磷酸二鈉法;脲酶活性:奈氏比色法;土壤轉(zhuǎn)化酶:比色法;土壤纖維素酶活性:3,5-二硝基水楊酸比色法。具體操作參照關(guān)松萌等主編土壤酶及其研究中測(cè)定方法[7]。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 篩選實(shí)驗(yàn)

    一般來說,某種植物對(duì)某種元素的吸收特點(diǎn),常用富集系數(shù)和轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)來描述。富集系數(shù)為植物地上部重金屬含量與介質(zhì)中重金屬含量的比值,在一定程度上標(biāo)志著介質(zhì)一植物系統(tǒng)中元素遷移的難易程度[8];轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)為植物地上部重金屬含量與植物地下部重金屬含量的比值。17種蔬菜對(duì)稀土元素鈰的累積吸收情況詳見表1。

    從表1可以看出,不同種類蔬菜對(duì)稀土元素鈰的吸收不同,17種蔬菜對(duì)鈰的富集系數(shù)和轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)存在著較犬的差異。從富集系數(shù)來說,芥菜的富集系數(shù)最大,可達(dá)1.96,而17種蔬菜的轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)都較小,其轉(zhuǎn)運(yùn)能力普遍較低。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,故選取鈰高積累蔬菜芥菜作為下面實(shí)驗(yàn)的供試植物。

    3.2

    Ce脅迫對(duì)芥菜葉綠索含量的影響

    葉綠素含量高低與葉片的衰老氧化緊密相關(guān),葉片組織內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基會(huì)對(duì)葉綠素結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞[9],各種環(huán)境脅迫也可導(dǎo)致植物體內(nèi)葉綠素破壞與降解。從圖1中可以看出,隨著Ce處理濃度的增加,芥菜葉片中的葉綠素含量變化呈先上升后下降的趨勢(shì)。在Ce濃度為600 mg/kg時(shí),達(dá)到其最大值3.47 mg/g,高于對(duì)照組91.7%,超過600 mg/kg時(shí),葉綠素含量明顯下降,直至低于對(duì)照水平。由此可見,低濃度Ce處理促進(jìn)了芥菜對(duì)光能的吸收、傳遞和轉(zhuǎn)化,刺激了植物體葉綠素的合成,對(duì)芥菜光合作用具有促進(jìn)作用;高濃度Ce處理對(duì)芥菜光合作用起阻礙作用,嚴(yán)重影響芥菜的生長(zhǎng),此結(jié)果同Ce對(duì)其生物量的影響趨勢(shì)相似,與陳祖義等[10]研究結(jié)果相似。

    3.3

    Ce脅迫對(duì)芥菜根系活力的影響

    根系是植物吸收水分與養(yǎng)分的重要器官,它生長(zhǎng)發(fā)育狀況的好壞將直接影響到整個(gè)植株的生命活力,因此,根系活力可以直接反映根系的發(fā)育狀況和植物的生長(zhǎng)情況。

    從圖2可看出,隨著Ce濃度的增加,芥菜的根系活力呈先上升后下降的趨勢(shì)。在芥菜根系中,Ce處理濃度為600 mg/kg時(shí)其根系活力達(dá)到最大值,為6.77mg/( g/h),高于對(duì)照的213.4%,當(dāng)Ce處理濃度大于600 mg/kg時(shí),根系活力上升速度下降,直至根系開始失活,1500 mg/kg時(shí)芥菜葉子邊緣已發(fā)黃,植株已出現(xiàn)輕度中毒現(xiàn)象,根系幾乎失活。因此,低濃度Ce能增強(qiáng)芥菜的根系活力,當(dāng)超過允許的濃度后對(duì)芥菜根系活力呈毒害作用,抑制其根系活力增強(qiáng)。

    3.4 Ce脅迫對(duì)芥菜體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的影響

    抗氧化酶是指超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD),它們是植物活性氧清除系統(tǒng)中重要的酶,能維持活性氧自由基產(chǎn)生與清除系統(tǒng)的平衡[11],其活性被看作重金屬脅迫下植物能耐受的指標(biāo)之一。

    由圖3可知,隨著Ce濃度逐漸增加,芥菜體內(nèi)SOD活性、POD活性、CAT活性總體上都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),當(dāng)Ce濃度在O~600 mg/kg范圍內(nèi),SOD活性、POD活性、CAT活性都呈上升的趨勢(shì);并在600 mg/kg時(shí)達(dá)到最大值,分別為367.64u/g、218.3U/(g/min)、349.47 mg/(g/min);當(dāng)Ce濃度大于600mg kg-l時(shí),SOD活性、POD活性、CAT活性均下降,其中POD活性和SOD活性低于對(duì)照組。

    實(shí)驗(yàn)表明,在較低Ce濃度處理下,由于稀土作為微量元素能促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育,對(duì)植物生長(zhǎng)副作用不明顯,抗氧化酶活性保持較低的水平,但濃度超過-定范圍后,植物受到迫害,刺激芥菜抗氧化酶的活性,增強(qiáng)了芥菜抵御活性氧傷害的能力,減輕了高濃度Ce給植物帶來的傷害,直至防御系統(tǒng)被破壞。

    3.5

    Ce脅迫對(duì)土壤酶活性的影響

    土壤酶是具有高度催化作用的生物催化劑,土壤中的一切生物化學(xué)過程都是在土壤酶的作用下進(jìn)行的。土壤酶在土壤有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化和養(yǎng)分循環(huán)中起著非常重要的作用,它作為土壤的重要組成部分,與土壤理化性質(zhì)之間具有較好的關(guān)聯(lián)性[12]??梢苑从惩寥乐猩锎x和物質(zhì)轉(zhuǎn)化狀況[13],能較好地反映土壤的表觀肥力[14]。此外,許多研究者認(rèn)為,土壤酶活性對(duì)重金屬的激活或抑制作用非常的敏感,且某些酶的活性與重金屬的污染程度存在著一定的相關(guān)性,可作為反映重金屬污染程度的有效指標(biāo)[15]。

    本研究是在稀土污染的影響下,探討酶活性變化的情況,并通過加入外源稀土金屬Ce,達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)設(shè)的土壤稀土濃度值,再測(cè)定根際土壤中過氧化氫酶、磷酸酶、脲酶、轉(zhuǎn)化酶和纖維素酶的活性。然后分析稀土Ce對(duì)土壤酶的影響,為稀土農(nóng)用過程巾對(duì)生態(tài)環(huán)境的效應(yīng)評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)進(jìn)一步為受污染區(qū)特別是稀土礦區(qū)的蔬菜食用安全提供科學(xué)依據(jù)。

    由圖4可知,隨著土壤Ce質(zhì)量濃度的逐漸增加,土壤酶活性總體上都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。在芥菜根際土壤中,當(dāng)Ce濃度為600 mg/kg時(shí),過氧化氫酶活性和磷酸酶活性達(dá)到最大值,分別為1.67 mL/g和0.86 mg/g;當(dāng)Ce濃度為900 mg/kg時(shí),脲酶、纖維素酶和轉(zhuǎn)化酶活性達(dá)到最大值,分別為0.22 mg/kg,3.67 mg/g,1.01 mg/g。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)Ce對(duì)土壤酶的活性有一定的刺激作用,并且隨著濃度的逐漸增加,刺激作用由強(qiáng)變?nèi)?,此研究結(jié)果與褚海燕等人[16,17]研究結(jié)果變化趨勢(shì)相符。

    4 討論與分析

    通過在含稀土Ce六個(gè)水平濃度梯度的土壤中盆栽篩選的蔬菜芥菜,待其成熟收割后,取其植株與根際土壤測(cè)定植物生理指標(biāo)和5種常見的土壤酶活性,結(jié)果如下:

    (1)礦區(qū)農(nóng)田稀土污染情況日趨嚴(yán)峻,使蔬菜受稀土污染的情況也愈發(fā)嚴(yán)重。如何有效利用污染土壤意義重大,篩選重金屬高低積累植物被認(rèn)為是一種有效的方法。在本實(shí)驗(yàn)中,通過對(duì)17種蔬菜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后分析可得出芥菜可食部分稀土金屬含量為98.21 mg/kg,是17種蔬菜中可食部分稀土金屬含量最高的蔬菜,故選擇芥菜作為接下來的供試植物。

    (2)葉綠素是一類與光合作用有關(guān)的最重要的色素。實(shí)驗(yàn)表明,芥菜葉片中葉綠素含量先上升后下降,且在Ce濃度為600 mg/kg時(shí)達(dá)到最大,為3.47 mg/g。當(dāng)Ce濃度小于600 mg/kg時(shí),此時(shí)稀土Ce對(duì)芥菜葉綠素含量起促進(jìn)作用,葉綠素含量隨著稀土Ce濃度升高而增加;當(dāng)Ce濃度大于600 mg/kg時(shí),稀土Ce對(duì)芥菜葉綠素含量的促進(jìn)作用降低,當(dāng)芥菜葉綠素含量低于對(duì)照組葉綠素含量時(shí),表明高濃度的稀土Ce處理會(huì)抑制植物葉綠素的合成,從而影響植物的光合作用,進(jìn)而影響植物的生長(zhǎng),與陳祖義等人研究結(jié)果相似。

    (3)植物的旺盛生長(zhǎng)離不開一個(gè)強(qiáng)大的根系系統(tǒng),根系活力作為反映根系代謝和植物生長(zhǎng)的指標(biāo)就顯得尤為重要。研究表明,在稀土Ce處理下,芥菜的根系活力呈先上升后下降的趨勢(shì)。且在Ce濃度為600 mg/kg時(shí)達(dá)到最大,為5.02 mg,/(g/min)。當(dāng)Ce濃度小于600m/kg時(shí),此時(shí)稀土Ce對(duì)芥菜根系活力起促進(jìn)作用,根系活力隨著稀土Ce濃度升高而增大;當(dāng)Ce濃度大于600 mg/kg時(shí),稀土Ce對(duì)芥菜根系活力的促進(jìn)作用降低,當(dāng)芥菜根系活力低于對(duì)照組根系活力時(shí),表明高濃度的稀土Ce處理會(huì)抑制植物的根系活力??赡艿脑蚴歉考?xì)胞結(jié)構(gòu)遭到破壞,從而致使植物根活力下降深知失活。

    (4)生物體在生命活動(dòng)中不斷地產(chǎn)生自由基,正常情況下,機(jī)體內(nèi)存在的SOD、POD、CAT通過形成一個(gè)自由基清除系統(tǒng)使自由基水平處于一種相對(duì)的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)[18]。而當(dāng)植物體受到外界環(huán)境的脅迫時(shí)有可能會(huì)破壞這種平衡。此次研究表明,隨著土壤Ce含量的增加,芥菜葉片SOD、POD、CAT活性均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);可能的原因是低濃度的Ce處理雖然對(duì)芥菜的生長(zhǎng)起促進(jìn)作用,但植物體內(nèi)活性氧(ROS)增幅不大,其葉片內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)未完全啟動(dòng)來清除過量的ROS,所以SOD、POD、CAT活性增幅不大:隨著Ce處理濃度的增加,植物體內(nèi)ROS增幅較大,需增加大量的SOD、POD、CAT來清除過多的ROS。但抗氧化防御系統(tǒng)這種保護(hù)作用是有限的,當(dāng)Ce質(zhì)量濃度繼續(xù)上升時(shí),植物體內(nèi)防御系統(tǒng)功能紊亂,清除ROS能力減弱,ROS在細(xì)胞內(nèi)過量積累,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞膜脂過氧化加強(qiáng)[19].高濃度的Ce處理使SOD、POD、CAT活性降低,直至低于對(duì)照組。

    (4)土壤酶活性不僅受到根際土壤環(huán)境的影響,而且不同種類的酶受到根際土壤影響的效應(yīng)也不相同。由土壤酶活性變化規(guī)律表明:芥菜根際土壤中過氧化氫酶先被激活再被抑制,脲酶、磷酸酶、纖維素酶、轉(zhuǎn)化酶對(duì)Ce的敏感性影響趨勢(shì)相似,均表現(xiàn)為激活效應(yīng),激活作用先增強(qiáng)后減弱。當(dāng)Ce濃度為600 mg/kg時(shí),為過氧化氫酶,磷酸酶活性值大小的分界點(diǎn);當(dāng)Ce濃度為900 mg/kg時(shí),為脲酶、纖維素酶和轉(zhuǎn)化酶活性值大小的分界點(diǎn)??赡艿脑蚴牵和寥烂笇?duì)稀土元素有一定的耐性,在濃度允許的范圍內(nèi)對(duì)土壤酶活性呈增強(qiáng)作用,而當(dāng)超過允許濃度后土壤酶活性有減弱的趨勢(shì),直至出現(xiàn)抑制作用。在芥菜根際土壤中,脲酶對(duì)鈰的敏感性相對(duì)于過氧化氫酶來說差異性更大,脲酶活性最大相差0.14 mg/g。

    5 結(jié)論

    研究中選取常見蔬菜芥菜在Ce濃度水平為50mg/L條件下水培.然后進(jìn)一步對(duì)芥菜進(jìn)行盆栽土培試驗(yàn),通過土培實(shí)驗(yàn)分析了稀土Ce對(duì)芥菜的葉綠素含量、根系活力、抗氧化酶和土壤酶活性的影響得到以下主要結(jié)論。

    (1)本研究中,芥菜的富集系數(shù)最大,可達(dá)1.96,說明芥菜對(duì)Ce有較強(qiáng)的富集能力。再結(jié)合蔬菜的實(shí)際生長(zhǎng)情況,認(rèn)為芥菜可食部分對(duì)Ce有較高的富集,因此選擇高Ce積累芥菜作為下面實(shí)驗(yàn)的供試植物。

    (2)芥菜葉片中葉綠素含量先上升后下降,且在Ce濃度為600 mg/kg時(shí)達(dá)到最大,為3.47 mg/g。當(dāng)Ce濃度小于600 mg/kg時(shí),此時(shí)稀土Ce對(duì)芥菜葉綠素含量起促進(jìn)作用,葉綠素含量隨著稀土Ce濃度升高而增加;當(dāng)Ce濃度大于600 mg/kg時(shí),稀土Ce對(duì)芥菜葉綠素含量的促進(jìn)作用降低,直至低于對(duì)照組并對(duì)植物產(chǎn)生毒害作用。

    (3)在稀土Ce處理下,芥菜的根系活力呈先上升后下降的趨勢(shì)。且在Ce濃度為600 mg/kg時(shí)達(dá)到最大,為5.02 mg/( g/min)。當(dāng)Ce濃度小于600 mg,/kg時(shí),此時(shí)稀土Ce對(duì)芥菜根系活力起促進(jìn)作用,根系活力隨著稀土Ce濃度升高而增大;當(dāng)Ce濃度大于600 mg/kg時(shí),稀土Ce對(duì)芥菜根系活力的促進(jìn)作用降低,直至植物根系失活。

    (4)研究表明,植物的生理效應(yīng)能很好的反映植株的健康情況,隨著土壤Ce含量增加,芥菜中SOD活性、POD活性、CAT活性總體上均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。當(dāng)超過某一濃度后,Ce對(duì)芥菜的抑制作用隨Ce濃度增加而增強(qiáng)。

    (5)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,土壤酶活性不僅受到根際土壤環(huán)境的影響,而且不同種類的酶受到根際土壤影響的效應(yīng)也不相同。芥菜根際土壤中,土壤脲酶、磷酸酶、纖維素酶、轉(zhuǎn)化酶對(duì)Ce的敏感性影響趨勢(shì)相似,均表現(xiàn)為激活效應(yīng),激活作用先增強(qiáng)后減弱。而過氧化氫酶則表現(xiàn)為先激活后抑制,表明過氧化氫酶對(duì)Ce更敏感。總之,稀土元素Ce是影響酶活性的重要因素之一。

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