PNPLA3基因多態(tài)性與非酒精性脂肪性肝病肝損傷間相關(guān)性的系統(tǒng)評價*

魏益國，陳 捷，石明巧，吳曉娟，蘇真珍，蔡 蓓

(1.四川大學(xué)華西臨床醫(yī)學(xué)院，成都 610041；2.四川大學(xué)華西醫(yī)院實驗醫(yī)學(xué)科，成都 610041)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是以單純脂肪變性、非酒精性脂肪性肝炎、肝纖維化等進(jìn)行性肝病的統(tǒng)稱，被認(rèn)為是影響人體健康的一種重要疾病，患者肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)水平增加，引起細(xì)胞脂肪變性逐漸發(fā)展為纖維化，甚至發(fā)展為肝硬化[1]。近年來相關(guān)研究表明，遺傳因素與NAFLD有密切關(guān)聯(lián)，最新研究發(fā)現(xiàn)馬鈴薯糖蛋白樣磷脂酶蛋白 3(PNPLA3 )基因在NAFLD中起到了關(guān)鍵的作用[2]，PNPLA3基因的變異會使肝細(xì)胞中的三酰甘油(TG)沉積，導(dǎo)致肝臟發(fā)生脂肪變性，嚴(yán)重影響肝臟代謝，進(jìn)而逐漸發(fā)展為肝纖維化、肝硬化[3]。然而，該位點基因多態(tài)性是否與NAFLD肝損傷相關(guān)還沒有達(dá)成共識，本文對相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行全面、嚴(yán)格的Meta分析，探討PNPLA3 rs738409 基因多態(tài)性與NAFLD肝損傷的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1文獻(xiàn)檢索策略 通過四川大學(xué)圖書館以“PNPLA3”或者“rs738409”為檢索詞檢索Pub Med、CNKI、Embase、Ovid數(shù)據(jù)庫，搜索有關(guān)PNPLA3基因多態(tài)性與NAFLD肝損傷的相關(guān)文獻(xiàn)，未對檢索詞進(jìn)行其他限制，同時瀏覽了相關(guān)文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)來補(bǔ)充可能遺失的文獻(xiàn)。檢索時限為建庫至2017年4月20日，具體檢索策略見圖1 。

圖1 檢索策略流程圖

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1研究類型 PNPLA3基因多態(tài)性與NAFLD肝損傷的橫斷面研究。

1.2.2暴露因素 PNPLA3 rs738409位點多態(tài)性。

1.2.3結(jié)局指標(biāo) 肝臟代謝指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、TG、膽固醇(TC)水平。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn) (1)沒有具體基因型數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；(2)合并HIV/HCV等感染；(3)肝纖維化未通過病理活檢確診；(4)研究對象為同一人群的重復(fù)文獻(xiàn)；(5)研究對象有代謝綜合征、糖尿病等干擾本研究的基礎(chǔ)疾病的文獻(xiàn)。

1.4方法

1.4.1文獻(xiàn)篩選 所有納入文獻(xiàn)均首先由2位研究者獨立篩選文獻(xiàn)、提取資料，然后交叉審核。如遇分歧，則由第3位研究者對分歧內(nèi)容進(jìn)行校對審核，判定是否納入。

1.4.2數(shù)據(jù)提取 所有納入文獻(xiàn)中的資料由自制提取表提取，包含(1)第一作者，發(fā)表年份，國家，受試者的年齡、種族、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、性別；(2)各基因型對應(yīng)的樣本量，相應(yīng)肝功能指標(biāo)；(3)是否符合哈-溫平衡(HWE)。

1.4.3納入文獻(xiàn)的質(zhì)量評價 本研究采用Agency for Healthcare Research and Quality (AHRQ)量表作為納入橫斷面研究的方法學(xué)質(zhì)量評分標(biāo)準(zhǔn)，共分為6個條目：是否明確了資料的來源；是否給出了人群選擇的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)；是否給出了鑒別患者的時間段；研究對象是否連續(xù)；納入的種族是否相同；是否符合HWE。分別作出“是”“否”和“不清楚”的評價，“是”得 1 分，“否”或者“不清楚”得 0 分，評價也是先由2位研究人員獨立完成，如遇分歧，則由第3位研究人員進(jìn)行校對。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 本研究采用STATA14.0軟件進(jìn)行分析；計數(shù)資料采用比值比(OR) 為效應(yīng)指標(biāo)，計量資料采用加權(quán)均數(shù)差(WMD)為效應(yīng)指標(biāo)，各效應(yīng)量均給出其點估計值和95%CI，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義；納入研究結(jié)果間的異質(zhì)性采用χ2檢驗進(jìn)行分析(檢驗水準(zhǔn)為α=0.1)，同時結(jié)合I2定量判斷異質(zhì)性的大小，若各研究結(jié)果間無統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性(I2<50%)，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行Meta分析；若各研究結(jié)果間存在統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性，則采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行Meta分析(I2>50%)，對有明顯的臨床異質(zhì)性采用亞組分析或敏感性分析等方法進(jìn)行處理。

2 結(jié) 果

2.1納入文獻(xiàn)結(jié)果及特點 初篩相關(guān)文獻(xiàn) 45 篇，其中中文5篇，英文40篇，經(jīng)過研究人員逐步篩選，最終納入9篇文獻(xiàn)[2-10]。納入研究的基本特征見表1。

表1 篩選文獻(xiàn)基本信息表

2.2Meta分析結(jié)果

2.2.1PNPLA3 rs738409 與ALT水平的相關(guān)性研究 共納入9個研究，分析結(jié)果顯示，PNPLA3 rs738409基因多態(tài)性與ALT水平相關(guān)(MD=21.661，95%CI：7.818～35.504，P=0.002)。基于年齡的亞組分析結(jié)果顯示，在青年人中PNPLA3 rs738409基因多態(tài)性與ALT水平相關(guān)(MD=45.522，95%CI：2.947～88.098，P=0.036)；而在中老年組中該基因位點多態(tài)性與ALT水平無相關(guān)性(MD=21.661，95%CI：7.818～35.504，P=0.298)。基于人種亞組分析顯示，在亞洲人群中PNPLA3基因的多態(tài)性與ALT水平相關(guān)(MD=35.566，95%CI：10.471～60.662，P=0.005)；但在高加索人群研究中該基因與ALT水平無相關(guān)性(MD=3.330，95%CI：-6.660～13.320，P=0.514)。見圖2、圖3。

2.2.2PNPLA3 rs738409 與AST水平的相關(guān)性研究 共納入7個研究，分析結(jié)果顯示，PNPLA3 rs738409基因多態(tài)性與AST水平相關(guān)(MD=13.842，95%CI：3.950～23.735，P=0.006)?；趤喗M分析顯示，在亞洲人群中，該基因多態(tài)性與AST水平相關(guān)(MD=22.240，95%CI：2.499～41.981，P=0.027)；但在對高加索人群的分析結(jié)果顯示，PNPLA3與AST水平無相關(guān)性(MD=-0.648，95%CI：-3.515～2.220，P=0.658)?；谀挲g分析的結(jié)果顯示，PNPLA3基因在青年人(MD=30.797，95%CI：-9.956～71.550，P=0.139)與中老年人群(MD=5.739，95%CI：-6.845～18.324，P=0.371)中差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。見圖4、圖5。

注：a為青年人群(<50歲) ；b為中老年人群(≥50歲)

圖2 PNPLA3 rs738409與ALT水平的相關(guān)性年齡亞組分析

注：Asian為亞洲人群；Caucasian為高加索人群

圖3 PNPLA3 rs738409與ALT水平的相關(guān)性種族亞組分析

注：Asian為亞洲人群；Caucasian為高加索人群

圖4 PNPLA3 rs738409與AST水平的相關(guān)性種族亞組分析

注：a為青年人群(<50歲)；b為中老年人群(≥50歲)

圖5 PNPLA3 rs738409與AST水平的相關(guān)性年齡亞組分析

2.2.3PNPLA3 rs738409 與GGT水平的相關(guān)性研究 共納入6個研究，分析結(jié)果顯示，PNPLA3 rs738409 基因多態(tài)性與GGT水平無相關(guān)性(MD=-1.057，95%CI：-13.801～11.687，P=0.871)。

2.3PNPLA3 rs738409 與肝細(xì)胞脂代謝的相關(guān)性

2.3.1PNPLA3 rs738409 與TG水平的相關(guān)性研究 共納入6個研究，分析結(jié)果顯示，該位點基因多態(tài)性與TG水平無相關(guān)性(MD=-19.085，95%CI：-38.834～0.665，P=0.058)。

2.3.2PNPLA3 rs738409 與TC水平的相關(guān)性研究 共納入6個研究，分析結(jié)果顯示，PNPLA3 rs738409基因多態(tài)性與TC水平無相關(guān)性(MD=-2.793，95%CI：-15.282～9.697，P>0.05)。

2.4敏感性分析 在逐一剔除每一篇原始文獻(xiàn)后，Meta分析的結(jié)果并未發(fā)生方向改變，僅在AST水平研究中在剔除文獻(xiàn)[10]時MD、95%CI值稍大于原值，但I(xiàn)2未明顯改變，表明Meta結(jié)果穩(wěn)定可靠。

3 討 論

含patatin樣磷脂酶域3，即PNPLA3，位于22 號染色體長臂1區(qū)3帶3亞帶1次亞帶，是由3T3-L1細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞過程中的一種非分泌型脂肪因子，所編碼的蛋白是由481個氨基酸組成的非分泌蛋白，又稱脂肪滋養(yǎng)蛋白，其N端具有高度的保守序列Gly-X-Ser-X-Gly，有非特異性?；饷富钚裕纱龠M(jìn)TG水解，在肝臟組織中水平最高，部分體外試驗證實 PNPLA3具有TG水解酶和?；视娃D(zhuǎn)?；富钚?，但體內(nèi)生物學(xué)活性仍不十分清楚。研究表明PNPLA3基因148位點基因變異導(dǎo)致酶的活性中心被掩蓋，使PNPLA3失去水解酶活性，從而影響肝臟脂肪細(xì)胞功能并直接反映在ALT、AST、TG等指標(biāo)的明顯升高，且G等位基因攜帶者與C[11]等位基因攜帶者相比，發(fā)生NAFLD的相對危險度升高。

本次研究采用Meta分析的方法探討基因PNPLA3 rs738409位點的多態(tài)性與NAFLD肝細(xì)胞損傷及脂代謝水平的相關(guān)性，結(jié)果顯示，PNPLA3 rs738409位點的突變對于肝細(xì)胞功能的損傷有著明顯相關(guān)性，這與 HOTTA等[5]的研究結(jié)果保持了一致性。本次研究中ALT和AST水平分別為21.661 IU/L、10.221 IU/L，表明PNPLA3 rs738409位點的多態(tài)性與NAFLD肝細(xì)胞損傷有相關(guān)性。在PNPLA3基因與肝細(xì)胞脂代謝研究中得到TG和TC水平分別為0.215、0.072 mmol/L，PNPLA3 rs738409位點與TG水平無相關(guān)性，這與TAI等[10]研究的結(jié)果不一致，分析可能是因為本次研究納入的文獻(xiàn)較少，研究對象數(shù)量不足導(dǎo)致最后得到的結(jié)果與所查閱的資料不符。

本研究存在的局限性：(1)全文納入的文獻(xiàn)僅9篇，共涉及34個研究，4 285例患者，樣本量小，導(dǎo)致檢驗效能較低，導(dǎo)致結(jié)果與其他研究人員的結(jié)論不一致的情況；(2)所納入的全部文獻(xiàn)中，人種分布不平衡，6篇文獻(xiàn)的研究對象均為亞洲人，僅3篇是高加索人，因而導(dǎo)致一些研究無法進(jìn)行人種亞組分析；(3)通過對年齡的亞組分析，異質(zhì)性雖減小，但依然很高，提示該研究的差異性可能還有其他因素影響；(4)由于所有研究納入的文獻(xiàn)均少于10篇，所以文中并未對納入的文章進(jìn)行發(fā)表偏移分析，從而可能造成研究結(jié)果與真實情況假性相關(guān)。

綜上所述，PNPLA3 rs738409位點的突變與NAFLD肝細(xì)胞功能損傷及脂代謝密切相關(guān)，但受限于所納入研究的文獻(xiàn)數(shù)量、病例總數(shù)、人種分布等影響，以上結(jié)論仍需更多的研究加以證實。

[1]石明巧，陳捷，王蘭蘭，等.TM6SF2基因rs58542926多態(tài)性與肝細(xì)胞損傷和肝纖維化嚴(yán)重程度相關(guān)性的Meta分析[J].中國循證醫(yī)學(xué)雜志，2016,16(6):655-662.

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