臍血干細(xì)胞移植治療改善腦卒中患者功能獨(dú)立性的臨床療效觀察

周晶

腦卒中是一種臨床常見(jiàn)的腦血液循環(huán)障礙性疾病，常導(dǎo)致患者出現(xiàn)多種功能障礙，不同程度地喪失獨(dú)立生活能力，致殘率高達(dá)70%[1]。目前對(duì)于恢復(fù)期的腦卒中治療仍以康復(fù)為主，但多數(shù)患者病情在發(fā)病1年仍不見(jiàn)明顯好轉(zhuǎn)[2]。近年來(lái)，臍血干細(xì)胞的定向分化技術(shù)的研究進(jìn)展使得臍血干細(xì)胞移植開(kāi)始應(yīng)用于腦卒中患者。本研究對(duì)60例腦卒中后遺癥患者進(jìn)行臍血干細(xì)胞移植，取得滿意效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年7月至2014年2月我院收治的住院腦卒中患者60例，均經(jīng)頭顱CT或MRI檢查確診，符合相關(guān)腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：格拉斯哥昏迷量表（Glasgow coma scale，GCS）評(píng)分＞8分；病程1年以上；無(wú)心、肝、腎和其他臟器嚴(yán)重的功能障礙；無(wú)認(rèn)知障礙。男37例，女23例；年齡45～72歲，平均（56.41±5.34）歲；Ashworth分級(jí)0級(jí)15例，1級(jí)18例，1+級(jí)11例，2級(jí)9例，3級(jí)7例；腦出血34例，腦梗死22例，腦出血合并腦梗死4例；右側(cè)肢體癱瘓31例，左側(cè)癱瘓26例，雙側(cè)癱瘓3例。將60例患者隨機(jī)分為2組各30例：①對(duì)照組，男18例，女12例；平均年齡（56.35±5.28）歲；Ashworth分級(jí)0級(jí)8例，1級(jí)10例，1+級(jí)5例，2級(jí)5例，3級(jí)3例；腦出血18例，腦梗死11例，腦出血合并腦梗死2例；右側(cè)肢體癱瘓17例，左側(cè)癱瘓14例，雙側(cè)癱瘓2例；②觀察組，男17例，女13例；平均年齡（56.34±5.31）歲；Ashworth分級(jí)0級(jí)7例，1級(jí)8例，1+級(jí)6例，2級(jí)4例，3級(jí)4例；腦出血16例，腦梗死11例，腦出血合并腦梗死2例；右側(cè)肢體癱瘓14例，左側(cè)癱瘓12例，雙側(cè)癱瘓1例。2組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?；颊呔橥猓狙芯拷?jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 我院健康產(chǎn)婦胎兒分娩臍帶血；臍帶血細(xì)胞處理試劑盒（包括A液150 mL、B液170 mL、C液80 mL）。

1.2.2 臍血干細(xì)胞采集、分離、收集、離心 選擇我院健康產(chǎn)婦，經(jīng)血液檢查排除乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等傳染性疾病，胎兒分娩后取臍帶血進(jìn)行保存，每袋約100 mL。將采集的臍帶血倒入A液，混勻后倒入B液，容器封閉后搖勻，靜置30 min，可見(jiàn)紅細(xì)胞沉至最底層。移液管吸取上清液25 mL置入離心管，離心2 500 r/min 5 min。棄除上清液，剩余液體加入10 mL生理鹽水搖勻。取兩支新離心管分別加入25 mL C液，將原先離心管中的細(xì)胞懸浮液采用雞尾酒添加法加至25 mL C液的離心管中，保證兩液體分界清晰，1 800 r/min離心旋轉(zhuǎn)30 min，吸取離心后液體中間云霧狀薄層，加入50 mL生理鹽水混勻，再2 500 r/min離心旋轉(zhuǎn)5 min。重復(fù)上述離心方法4次，收集細(xì)胞備用。

1.2.3 移植方法 2組均接受包括肢體康復(fù)訓(xùn)練、日常生活自理技能訓(xùn)練及健康宣教等常規(guī)康復(fù)治療和營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)藥物治療。觀察組另給予臍血干細(xì)胞移植，每周1次，總計(jì)3次，采用鞘內(nèi)注射的方法，將臍血干細(xì)胞懸液通過(guò)腰椎穿刺注入蛛網(wǎng)膜下腔，使其隨腦脊液循環(huán)至大腦表面及神經(jīng)功能缺損部位。

1.3 功能測(cè)評(píng)

對(duì)所有患者隨訪12月，進(jìn)行如下評(píng)定：①功能測(cè)評(píng)，采用國(guó)際通用的功能獨(dú)立性評(píng)測(cè)（functional independence measure，F(xiàn)IM）量表進(jìn)行評(píng)定，包括運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分、認(rèn)知功能評(píng)分及總評(píng)分，分值越高表示功能獨(dú)立性越好。②肌張力評(píng)定，采用改良Ashworth分級(jí)，共分為0級(jí)、1級(jí)、1+級(jí)、2級(jí)、3級(jí)、4級(jí)等6個(gè)等級(jí)。③日常生活活動(dòng)能力評(píng)定，采用日常行為能力Barthel指數(shù)（Barthel index，BI），評(píng)分與患者自理能力成正比。觀察患者治療期間不良反應(yīng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 2組干預(yù)后FIM評(píng)分比較

2組治療前運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分、認(rèn)知功能評(píng)分及總評(píng)分差異無(wú)意義（P＞0.05），治療后2組的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分、認(rèn)知功能評(píng)分及總評(píng)分高于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且觀察組的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分、認(rèn)知功能評(píng)分及總評(píng)分均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 2組治療后FIM評(píng)分比較（分，±s）

表1 2組治療后FIM評(píng)分比較（分，±s）

組別 例數(shù)對(duì)照組觀察組t值P值30 30運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分治療前54.33±5.25 54.36±5.26 0.002＞0.05治療后12月69.41±6.25 76.30±6.45 9.713＜0.05組別對(duì)照組觀察組t值P值認(rèn)知功能評(píng)分治療前19.12±3.12 19.15±3.15 0.037＞0.05治療后12月21.86±3.46 26.10±3.21 6.512＜0.05總評(píng)分治療前71.37±5.37 71.34±5.41 0.022＞0.05治療后12月91.27±8.96 102.40±9.56 15.854＜0.05

2.2 2組干預(yù)后Ashworth分級(jí)情況比較

2組干預(yù)前Ashworth分級(jí)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），干預(yù)后觀察組的Ashworth分級(jí)與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05），觀察組更多地分布于較低的Ashworth級(jí)別，見(jiàn)表2。

表2 2組干預(yù)后Ashworth分級(jí)情況比較（例，n）

2.3 2組干預(yù)前后BI評(píng)分比較

干預(yù)前對(duì)照組和觀察組的BI評(píng)分分別為（52.72±6.42）分、（51.52±7.14）分，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.720，P＞0.05）；干預(yù)后，對(duì)照組和觀察組的BI評(píng)分分別為（68.46±6.12）分、（88.45±9.51）分，觀察組高于對(duì)照組（t=7.184，P＜0.01）。

3 討論

腦卒中后腦損傷引起腦組織神經(jīng)環(huán)路中斷和神經(jīng)元壞死、缺失，導(dǎo)致腦組織神經(jīng)功能性障礙，是引起腦卒中后遺癥的根本原因[3]。傳統(tǒng)的治療措施是手術(shù)后給予康復(fù)治療結(jié)合神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)藥物，但效果較差[4]。干細(xì)胞作為細(xì)胞生物學(xué)的一個(gè)基本概念已有一百余年的歷史，但其在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用，是近幾十年才逐漸被人們所認(rèn)識(shí)[5]。干細(xì)胞治療目前已廣泛應(yīng)用于臨床。自臍血干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，即出現(xiàn)臍血干細(xì)胞的研究熱潮，隨著實(shí)驗(yàn)室研究的深入和技術(shù)方法的更新，臍血干細(xì)胞移植開(kāi)始逐漸應(yīng)用于臨床，為顱腦損傷的治療開(kāi)辟了新的途徑。

臍血干細(xì)胞治療腦組織損傷疾病的機(jī)制主要在于[6-8]：①自我分化成為神經(jīng)細(xì)胞。干細(xì)胞移植到腦組織受損區(qū)后，可自我更新、分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，在內(nèi)環(huán)境與營(yíng)養(yǎng)因子的協(xié)助下其分化產(chǎn)物膠質(zhì)細(xì)胞可形成髓鞘，對(duì)神經(jīng)元遷移起到支持和引導(dǎo)作用，并恢復(fù)神經(jīng)元之間正常的神經(jīng)信號(hào)傳遞。②激活內(nèi)源性干細(xì)胞。干細(xì)胞移植到腦組織受損區(qū)后，內(nèi)源性臍血干細(xì)胞可在干細(xì)胞增殖、分化的過(guò)程中激活，分化為膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元，分泌多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，有利于腦局部微環(huán)境改善，并啟動(dòng)再生相關(guān)因子順序表達(dá)，使損傷的腦組織開(kāi)始再生，同時(shí)促使多種細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，填充腦損傷遺留的空腔，為再生的軸突提供支持物；③促使受損神經(jīng)細(xì)胞的功能性激活、恢復(fù)。干細(xì)胞移植到病灶后，開(kāi)始自我分化，其分化物可促使大量神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌，改善微循環(huán)，促使損傷或病變后殘存的功能下降，并啟動(dòng)再生相關(guān)基因的表達(dá)，有利于受體神經(jīng)纖維再生；④避免受損腦組織區(qū)域的炎癥。臍血干細(xì)胞產(chǎn)生的某些代謝酶、神經(jīng)生長(zhǎng)因子會(huì)在一定程度上影響局部的微環(huán)境，可抑制各種有害因素，促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌，消除腦組織受損區(qū)炎癥反應(yīng)。

臍血干細(xì)胞移植患者多在移植后15 d左右感覺(jué)功能有所恢復(fù)，并且在術(shù)后2～6月語(yǔ)言、植物神經(jīng)系統(tǒng)功能、肌力也有不同程度的恢復(fù)[9]。本研究顯示，觀察組在接受臍血干細(xì)胞移植結(jié)合康復(fù)訓(xùn)練后，其FIM評(píng)分、Ashworth分級(jí)及BI評(píng)分均較對(duì)照組獲得改善，患者的癱瘓肢體肌張力、自我料理能力均得到改善。這提示，臍血干細(xì)胞移植對(duì)于改善患者的功能獨(dú)立性具有顯著療效。此外，大量的臨床病例也表明，干細(xì)胞治療過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)有嚴(yán)重的副作用或不良反應(yīng)，僅有極少數(shù)患者有輕微的短時(shí)的發(fā)熱、皮疹，表明其具有較高的安全性。

臍血干細(xì)胞移植目前在臨床方面仍面臨諸多問(wèn)題：臍血干細(xì)胞的來(lái)源、采集、提取、移植方式、臍血干細(xì)胞最佳移植數(shù)量等問(wèn)題，以及有報(bào)道從成體自身多次提取傳代會(huì)有癌變危險(xiǎn)等等[10]，均有待于實(shí)驗(yàn)研究及臨床經(jīng)驗(yàn)的進(jìn)一步積累。

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