血府逐瘀口服液中苦杏仁苷鑒別和羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定

鄭宏亮

摘 要：目的：建立血府逐瘀口服液鑒別和含量測(cè)定方法。方法：采用薄層色譜法對(duì)苦杏仁苷進(jìn)行定性鑒別，HPLC法測(cè)定羥基紅花黃色素A含量。結(jié)果：薄層色譜法專屬性良好，能準(zhǔn)確定性鑒別。羥基紅花黃色素A在5.03μg·mL-1～100.51μg·mL-1內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.99994；平均回收率為99.15%，RSD（%）=0.49%。結(jié)論：該方法能準(zhǔn)確控制血府逐瘀口服液的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：血府逐瘀口服液；薄層色譜法；HPLC；羥基紅花黃色素A；苦杏仁苷

血府逐瘀口服液主要成份為桃仁、紅花、當(dāng)歸、川芎、地黃、赤芍、牛膝、柴胡、枳殼、桔梗、甘草。具有活血化瘀，行氣止痛，用于淤血內(nèi)阻，頭痛或胸痛，內(nèi)熱憋悶，失眠多夢(mèng)，心悸怔忡，急躁善怒。為了更好的控制本品質(zhì)量，參照藥典，建立了桃仁藥材中苦杏仁苷的薄層定性鑒別，紅花藥材中羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定方法，并對(duì)建立的方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)。

1 儀器、試藥和材料

高效液相色譜儀（Agilent1200）；羥基紅花黃色素A對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：110737-201516，含量：98%）、苦杏仁苷對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：110820-201506）；乙腈、甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純；血府逐瘀口服液（市售樣品，規(guī)格：10ml/支）；硅膠G薄層板（100mm×200mm，青島海洋化工廠）。

2 含量測(cè)定

2.1對(duì)照品溶液的制備：取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1m1含50μg的溶液，即得。

2.2供試品溶液的制備：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加入25%甲醇適量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）15分鐘，放冷，用25%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò).取續(xù)濾液，即得。

2.3線性關(guān)系考察：精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品12.82mg，置25ml量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，分別置10ml量瓶中，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為不同濃度的對(duì)照品溶液。精密吸取10？滋l，分別注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

結(jié)果羥基紅花黃色素A在5.03μgomL-1～100.51μgomL-1的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)樣品，平行處理6份樣品，計(jì)算羥基紅花黃色素A的含量，結(jié)果6份樣品含量的RSD小于2.0%，重復(fù)性良好，見(jiàn)表2。

表2 重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

2.5 加樣回收率試驗(yàn)：精密量取已知含量的本品0.5ml，共9份，分別精密加入相當(dāng)于已有量80%、100%、120%水平的對(duì)照品原液各3份，分別為0.4ml、0.5ml、0.6ml（精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品28.16mg，置10ml量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品原液），置50ml量瓶中，加入25%甲醇適量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）15分鐘，放冷，用25%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò).取續(xù)濾液，即得供試品溶液。進(jìn)樣20ul，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算羥基紅花黃色素A回收率，結(jié)果表明本方法回收率良好，見(jiàn)表3。

表3 回收率測(cè)定結(jié)果

2.6溶液穩(wěn)定性考察：取本品供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時(shí)，將供試品溶液注入液相色譜儀，分別記錄不同時(shí)間點(diǎn)羥基紅花黃色素A的峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為0.34%，小于2.0%，表明12小時(shí)內(nèi)樣品供試品溶液穩(wěn)定。

2.7 不同色譜柱對(duì)色譜系統(tǒng)的影響：分別選擇Spursil C18（4.6×250mm，5？滋m）、Diamond C18（4.6×250mm，5？滋m）、Phenomenex C18（4.6×250mm，5？滋m）色譜柱，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算樣品中羥基紅花黃色素A含量，結(jié)果不同色譜柱對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。

2.8不同高效液相色譜儀對(duì)色譜系統(tǒng)的影響：分別選擇Agilent1100、Agilent1200、島津20A高效液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算樣品中羥基紅花黃色素A含量，結(jié)果不同高效液相色譜儀對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。

3 結(jié)論

經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果苦杏仁苷的薄層鑒別方法和羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠，可用于血府逐瘀口服液的質(zhì)量控制。

4 討論

4.1薄層定性鑒別苦杏仁苷步驟中，本品水液用乙醚振搖棄去乙醚液，主要是脫脂，否則實(shí)驗(yàn)結(jié)果不會(huì)顯苦杏仁苷斑點(diǎn)。

4.2 羥基紅花黃色素A是具有單查爾酮苷類結(jié)構(gòu)的化合物，是紅花藥材功效的最有效水溶性成分，所以本品采用25%甲醇作為溶解溶劑。由于本品成分復(fù)雜，經(jīng)摸索試驗(yàn)流動(dòng)相采用甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（23：2：75），增加水相比例，延長(zhǎng)保留時(shí)間，使羥基紅花黃色素A峰與相鄰色譜峰達(dá)到完全分離。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)藥典（一部）.化學(xué)工業(yè)出版社， 2015：277-278.

[2]中華人民共和國(guó)藥典（一部）.化學(xué)工業(yè)出版社， 2015：151.