UPLC/ESI-Q-TOF MS法分析遠志中的化學成分*

柴士偉 ，楊 帆 ，于卉娟 ，王躍飛

遠志為臨床常用中藥之一，始載于《神農本草經》?！吨袊幍洹罚?015版）規(guī)定了遠志為遠志科植物遠志（Polygala tenuifolia Willd.） 或卵葉遠志（Polygala sibirica L.）的干燥根，具有安神益智、祛痰、消腫等功效[1]。臨床上常用于治療由于心腎不交而引起的失眠、多夢、焦慮、神志迷糊、健忘驚悸、咳痰不爽等癥[2-3]，其主要化學成分包括糖酯、皂苷、口山酮類等[4-5]。文獻報道，以西伯利亞遠志糖A5、西伯利亞遠志糖A6為代表的寡糖酯類成分和口山酮類成分是遠志及遠志科其他植物中的特征性化學成分[4,6-9]。糖酯類化合物在抗癡呆、腦保護和抗抑郁方面表現(xiàn)出明顯的生物活性[10-13]；皂苷類化合物是遠志發(fā)揮其鎮(zhèn)靜安神、祛痰止咳作用的主要藥效物質[14-19]；口山酮類化合物具有止痛、抗菌、抗腫瘤、抗病毒等作用[20-22]。

采用超高效液相色譜-電噴霧離子化-四級桿飛行時間串聯(lián)質譜（UPLC/ESI-Q-TOFMS）法分析遠志中化學成分，并綜合文獻總結歸納了遠志藥材中主要化合物的質譜裂解規(guī)律，闡明遠志藥材化學成分。

1 材料與方法

1.1 儀器 采用UPLC/ESI-Q-TOFMS（美國Waters公司）；萬分之一天平（瑞士METTLER公司）；十萬分之一天平（瑞士METTLER公司）；超純水儀（美國Millipore公司）；超聲波清洗機（寧波新芝生物有限公司）；臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；4℃醫(yī)用冷藏箱（青島海爾特種電器有限公司）。

1.2 試劑 質譜級乙腈（美國Sigma-Aldrich公司）；色譜級甲醇（美國Sigma-Aldrich公司）；色譜級甲酸（美國Sigma-Aldrich公司）；超純水（實驗室自制）。

1.3 試藥 對照品：西伯利亞遠志糖A5（141102，SA5）、西伯利亞遠志糖 A6（141015，SA5）、西伯利亞遠志口山酮 B（140605，SX5）、遠志口山酮 XI（141104，PXXI）、3,6′-二芥子?；崽牵?41024,DS）、細葉遠志皂苷（141205，TF）、遠志皂苷元（140717，SG）、遠志酸（141127，PGA）、遠志皂苷 D（140623，PGD）購于成都普菲德生物技術有限公司，經高效液相色譜-紫外法（UPLC-UV）分析除了3，6′-二芥子?；崽牵?5.3%）外純度均大于98%。樣品：遠志（購自亳州市藥材市場，產地：山西）。

1.4 色譜條件 色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）；流動相：乙腈（B）-0.1%甲酸水（A），梯度洗脫：（0～12 min，11%～29%B；12～13 min，29%～36%B；13～24 min，36%～43.5%B；24～25 min，43.5%～90%B）；進樣量：2 μL；流速：0.5 mL/min；柱溫：40℃。

1.5 質譜條件 電噴霧離子源（ESI）掃描方式；正離子模式毛細管電壓：3.0 kV；負離子模式毛細管電壓：-2.5kV；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣溫度：400℃；脫溶劑氣流量：700 L/h；錐孔氣流量：50 L/h；碰撞氣（氬氣）：0.20 mL/min。質量軸校正采用亮氨酸-腦啡肽（m/z[M+H]+=556.277 1，m/z[M-H]-=554.261 5）溶液。質量掃描范圍：m/z 100～2 000 Da，數(shù)據(jù)分析：Masslynx V 4.1軟件。

1.6 供試品溶液的制備 取遠志，粉碎，過60目篩，取0.5 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加入適量甲醇，密塞，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）30 min，放至室溫，甲醇定容至刻線，搖勻，渦旋1 min后14 000 r/min離心10 min，取上清液，即得。1.7 對照品儲備液的制備 分別取SA5、SA6、SX5、PXXI、DS、TF、SG、PGA、PGD 各 5 mg，精密稱定，加甲醇和少量DMSO溶解并配制成每1 mL分別含有SA5 0.050 mg、SA6 0.052 mg、SX5 0.050mg、PXXI0.063 mg、DS0.049 mg、TF 0.054 mg、SG0.049 mg、PGA 0.052 mg、PGD 0.056 mg的混合對照品溶液，即得。

2 實驗結果

2.1 遠志化學成分的UPLC/ESI-Q-TOFMS分析采用UPLC/ESI-Q-TOFMS對遠志的化學成分進行質譜定性鑒別，供試品溶液總離子流圖分別見圖1（A）、圖 1（C），對照品溶液總離子流圖分別見圖1（B）、圖 1（D）。共檢測到 36個化合物，鑒定和推測了29個化合物，包括14個糖酯、4個口山酮、9個皂苷、2個苷元。通過與對照品的保留時間、質譜碎片信息的比對，確證了 SA5、SA6、SX5、PXXI、DS、TF、SG、PGA、PGD化合物。參考相關文獻[23-27]，根據(jù)色譜保留時間、質譜數(shù)據(jù)以及裂解規(guī)律，推測了20個化合物。所檢測到的化合物的保留時間、準分子離子和加合離子的精確質量數(shù)、誤差、理論分子量、分子式和二級質譜數(shù)據(jù)見表1。

3 結論

本實驗建立了一種高效、快速的UPLC-Q/TOF MS方法，通過結合標準品的質譜圖及查閱相關文獻，鑒定和推測了遠志藥材中29個化學成分，并總結了遠志中糖酯、口山酮、皂苷類化合物的質譜裂解規(guī)律，為遠志藥材進一步研究和其他中藥研究奠定了基礎。

圖1 供試品溶液正離子模式（A）、對照品溶液正離子模式（B）、供試品溶液負離子模式（C）、對照品溶液負離子模式（D）總離子流圖Fig.1 UPLC/ESI-Q-TOF MStotal ion chromatograms of RPextracts(A)in positive ion mode and(C)in negative ion mode,base peak intensity chromatogramsof mixed standards(B)in positive ion mode and(D)in negativeion mod

表1 遠志化學成分的質譜鑒定Tab.1 Identification of chemical constituents in RPby UPLC/ESI-Q-TOF MS

續(xù)表1

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 劉大偉,康利平,馬百平.遠志化學及藥理作用研究進展[J].國際藥學研究雜志,2012,39(1):32-36.

[3] 韓麗麗,李 真,管仁偉,等.中藥遠志的研究進展[J].中國野生植物資源,2010,29(6):1-4.

[4] 楊學東,張麗杰,梁 波,等.遠志科植物中的寡糖酯類成分[J].中草藥,2002,33(10):92-96.

[5] 孫長清,彭曉敏,朱乃亮,等.遠志中西伯利亞遠志糖A5和西伯利亞遠志糖A6的含量測定方法研究[J].中國中藥雜志,2012,37(11):1607-1609.

[6] 姜 勇,屠鵬飛.遠志研究進展[J].中草藥,2001,32(8):90-92.

[7] 劉 明,徐 偉,梁 娜,等.遠志的化學成分研究[J].中國現(xiàn)代中藥,2010,12(9):18-21.

[8] 姜艷艷,戴 瑩,巴寅穎,等.基于開心散-遠志類藥有效組分特征圖譜的遠志質量表征研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2011,34(8):544-547.

[9] 姜艷艷,段以以,劉 洋,等.遠志化學成分分離與結構鑒定[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2011,34(2):122-125.

[10]劉 屏,王東曉,郭代紅,等.遠志3,6′-二芥子?；崽窃谒幬镎T發(fā)抑郁模型上的藥效評價[J].中國藥學雜志,2008,43(18):1391-1394.

[11]Naito R,Tohda C.Characterization of anti-neurodegenerative effects of Polygala tenuifolia in Abeta(25-35)-treated cortical neurons[J].Biological＆pharmaceutical Bulletin,2006,29(9):1892-1896.

[12]Wei X,Hu JF,Yuan YH,et al.Polygala saponin XXXII from Polygala tenuifolia root improves hippocampal-dependent learning and memory[J].Acta Pharmacologica Sinica,2009,30(9):1211-1219.

[13]Ikeya Y,Takeda S,Tunakawa M,et al.Cognitive improving and cerebral protective effects of acylated oligosaccharides in Polygala tenuifolia[J].Biological＆pharmaceutical Bulletin,2004,27(7):1081-1085.

[14]竇 智,胡長明,文 莉,等.高效液相色譜法測定生遠志及其炮制品中遠志皂苷B的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2014,34(19):1676-1678.

[15]傅 晶,張東明,陳若蕓.遠志屬植物的皂苷類成分及其藥理作用研究進展[J].中草藥,2006,37(1):144-146.

[16]韓毅麗,梁 璐,張丹丹,等.超聲提取遠志總皂苷的研究[J].山西醫(yī)藥雜志,2010,39(11):1051-1052.

[17]馮 丹,鄭 德,周洪雷,等.遠志總皂苷有效部位質量控制研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2014,25(9):2149-2151.

[18]孔 輝,鄭 德,周洪雷,等.遠志總皂苷大孔吸附樹脂純化工藝研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2014,41(10):2196-2199.

[19]Chung IW,Moore NA,Oh WK.Behavioural pharmacology of polygalasaponins indicates potential antipsychotic efficacy[J].Pharmacology,Biochemistry,and Behavior,2002,71(1-2):191-195.

[20]李照亮,董憲喆,王東曉,等.遠志寡糖酯類化合物及遠志口山酮ⅢCYP450酶的活性影響研究[J].中國中藥雜志,2014,39(22):4459-4463.

[21]楊學東,徐麗珍,楊世林.遠志屬植物中口山酮類成分及其藥理研究進展[J].天然產物研究與開發(fā),2000,12(5):88-94.

[22]林敬開.中藥遠志活性成分與安全性研究[D].北京:中國中醫(yī)科學院,2011.

[23]林黎琳.遠志屬兩種植物的口山酮類成分研究[D].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學,2005.

[24]劉筱筱,夏忠庭,何 毅,等.遠志UPLC多指標成分的測定及指紋圖譜研究[J].中草藥,2016,47(12):2167-2174.

[25]李創(chuàng)軍,楊敬芝,庾石山,等.遠志中的三萜皂苷和寡糖多酯類成分[J].中國天然藥物,2011,9(5):321-328.

[26]Li CJ,Yang JZ,Yu SS,et al.Triterpenoid saponins with neuroprotective effects from the roots of Polygala tenuifolia[J].Planta Med,2008,74(2):133-141.

[27]Liu JY,Yang XD,He JM,et al.Structure analysis of triterpene saponins in Polygala tenuifolia by electrospray ionization ion trap multiple-stagemassspectrometry[J].JMass Spectrom,2007,42(7):861-873.