胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分子標(biāo)志物的研究進展

閔叢叢 綜述 張 靜 丁士剛 審校

(北京大學(xué)第三醫(yī)院消化科，北京 100191)

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)2015年資料統(tǒng)計[1]，我國每年胃癌新發(fā)病例約67.9萬，同期死亡人數(shù)高達49.8萬，發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中均高居第二。大部分胃癌患者就診時處于中晚期，5年生存率只有不到5%[2]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌最常見的轉(zhuǎn)移形式，即使在早期胃癌階段，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率仍可達18.3%[3]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌預(yù)后較差的重要原因，也是影響胃癌治療方式的關(guān)鍵因素。目前CT和超聲內(nèi)鏡等影像學(xué)檢查診斷胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性和準(zhǔn)確性均不理想，前哨淋巴結(jié)活檢技術(shù)未廣泛應(yīng)用于臨床，因此尋找能夠準(zhǔn)確預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物成為近年來研究的熱點。既往研究報道的胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)志物特異性不強，臨床應(yīng)用受限，包括E鈣黏蛋白、整合素等細(xì)胞黏附分子，金屬基質(zhì)蛋白酶、轉(zhuǎn)化生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、趨化因子等細(xì)胞因子，以及nm23、mta-1、c-met等淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。因此，篩選具有較高靈敏度和特異度的分子標(biāo)志物是目前臨床亟待解決的問題，將有助于闡明胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子機制及開展靶向治療，從而改善預(yù)后。本文對近年來新發(fā)現(xiàn)的與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)且有重要意義的分子標(biāo)志物及其可能的作用機制進行綜述。

1 巨噬細(xì)胞加帽蛋白(CapG)

巨噬細(xì)胞加帽蛋白(macrophage-capping protein，CapG)是凝溶膠蛋白超家族成員之一，廣泛表達于正常組織及巨噬細(xì)胞中。CapG作為一種Ca2+敏感性肌動蛋白結(jié)合蛋白，通過切割、封端肌動蛋白絲或使肌動蛋白聚集成核等方式調(diào)控肌動蛋白的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞骨架重組，特別是在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用。既往研究[4～6]表明，CapG在肝癌、膽管癌、胃癌等多種腫瘤中過表達，能促進腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移，但具體的作用機制尚不明確。Kimura等[4]觀察到通過下調(diào)CapG表達可明顯降低肝癌細(xì)胞的移動能力，但不影響細(xì)胞的增殖功能。此外，Morofuji等[5]的研究表明，CapG在膽管癌中的表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)有關(guān)，而且是影響膽管癌患者總生存率的獨立預(yù)后因素。因此，推測CapG可能通過增加細(xì)胞的遷移能力而促進腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移，特別是與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有可能成為潛在的抗腫瘤治療靶點。

2012年本課題組陳茉等[7]前期通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法(雙向電泳和質(zhì)譜法)在伴和不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織之間成功篩選出差異蛋白CapG，并通過RT-PCR和免疫組化證實胃癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CapG的表達量顯著高于胃癌不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，推測CapG可能在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要的角色。2013年Ichikawa等[6]也同樣證實CapG在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中表達上調(diào)，而在不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織和非胃癌組織中表達無明顯差異(P=0.121)，并通過體外實驗觀察到小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)使CapG表達下調(diào)后引起MKN28和SH-10-TC兩種胃癌細(xì)胞系的細(xì)胞運動能力顯著降低，而對細(xì)胞增殖無明顯影響，與Kimura等[4]的研究結(jié)論一致。呂旻樺等[8]觀察到CapG在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，與浸潤深度(P=0.044)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.026)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.001)及AJCC分期(P=0.012)相關(guān)；CapG蛋白高表達患者的總體生存率較低表達者差(HR=2.785，95%CI1.812～4.279，P<0.001)。目前大部分研究認(rèn)為CapG與腫瘤細(xì)胞增殖無明顯相關(guān)性，而主要增加細(xì)胞的遷移能力，有望成為預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志物之一。以后需開展CapG與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的深入研究，進一步揭示CapG在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展過程中的分子機制，為明確CapG在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用提供依據(jù)。

2 酪氨酸激酶受體B(TrkB)

酪氨酸激酶受體B(tyrosine kinase receptor B，TrkB)是一種由原癌基因TrkB家族編碼的酪氨酸蛋白激酶受體，它的配體是腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)，主要調(diào)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞的生長、分化、遷移等過程。此外，近來的研究顯示TrkB也在肝癌、結(jié)腸癌、胃癌等多種腫瘤中過表達，可抑制失巢凋亡，使腫瘤表現(xiàn)出更強的侵襲能力[9～11]。失巢凋亡(anoikis)是由于細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)或鄰近細(xì)胞脫離接觸而誘發(fā)的一種特殊的程序性細(xì)胞死亡形式。正常情況下，細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)脫離后發(fā)生失巢凋亡；而在腫瘤發(fā)生時，癌細(xì)胞從原發(fā)灶脫落后通過自分泌或旁分泌機制抵抗失巢凋亡而得以存活，然后隨淋巴和血液循環(huán)轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)和遠(yuǎn)隔組織器官，形成新的轉(zhuǎn)移灶[12]。失巢凋亡抵抗對腫瘤進展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有重要意義，甚至被認(rèn)為是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴散的先決條件[13]。

Okugawa等[11]的研究顯示，BDNF和TrkB均在胃癌組織中和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中高表達，并且腫瘤侵襲邊緣的表達高于腫瘤中心及癌旁組織；體外實驗證明人類重組BDNF(rhBDNF)能促進表達TrkB的胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，產(chǎn)生失巢凋亡抵抗，而向小鼠腹腔內(nèi)注射TrkB拮抗劑K252a可抑制產(chǎn)生BDNF的胃癌細(xì)胞系NUGC3的增殖和腹膜播散。Tanaka等[12]進一步證明TrkB在胃癌侵襲邊緣表達明顯高于中心部位，與腫瘤大小、淋巴管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分期較晚等有關(guān)(P均<0.01)，且高表達TrkB的胃癌患者預(yù)后較差。本課題組趙梅莘等[14]對胃癌患者術(shù)前胃鏡活檢標(biāo)本的研究顯示，TrkB在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌中的表達水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P=0.003)，多因素分析顯示TrkB是胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素，且TrkB表達高者生存率較低。Fujikawa等[15]的研究表明，在結(jié)腸癌中E鈣黏蛋白的表達與TrkB呈反比，TrkB經(jīng)siRNA干擾抑制后結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480的侵襲轉(zhuǎn)移能力下降，而失巢凋亡和E鈣黏蛋白表達增加，這說明除抑制失巢凋亡外，TrkB可能還通過誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)促進腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。以上研究表明，TrkB在胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用，尤其是與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可能成為預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的新的特異性標(biāo)志物。

3 同源盒基因轉(zhuǎn)錄因子1(Prox-1)

同源盒基因轉(zhuǎn)錄因子1(prosperohomeobox protein 1，Prox-1)是果蠅的同源異型盒基因prospero在哺乳動物表達的同源盒基因轉(zhuǎn)錄因子，是胚胎時期最早的淋巴管標(biāo)志物，對調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞定向分化、發(fā)育、成熟等發(fā)揮重要作用，對淋巴管的形成十分關(guān)鍵。Prox-1是腫瘤淋巴管形成的重要調(diào)節(jié)因子，促進腫瘤進展和淋巴道轉(zhuǎn)移，而抑制Prox-1的功能會降低腫瘤轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，因此Prox-1是潛在的抗腫瘤治療靶點[16]。

Prox-1不僅是一種淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，而且在多種腫瘤細(xì)胞中高表達，近年來大量研究證實Prox-1與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，參與腫瘤的進展和擴散。Elsir等[16]的研究表明，Prox-1通過誘導(dǎo)腎小球足突細(xì)胞膜黏蛋白(podoplanin)和血管內(nèi)皮生長因子受體3(vascular endothelial growth factor receptor 3，VEGFR3)的表達促進淋巴管形成。Park等[17]的體外實驗證明Prox-1敲減后可抑制結(jié)腸癌的淋巴管生成、腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和EMT，而Prox-1過表達會促進上述功能。魏軍成等[18]的研究表明，Prox-1在乳腺癌細(xì)胞和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞均高表達，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織LYVE-1和Prox-1陽性淋巴管密度均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，推測Prox-1可能通過促進淋巴管新生，增加腫瘤細(xì)胞進入淋巴管的機會，最終導(dǎo)致淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Taban等[19]利用免疫組化和RNAscope的方法均證明Prox-1在胃癌細(xì)胞的胞漿和胞核中表達，且明顯高于正常胃組織，Prox-1在胃癌中表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P=0.033)，淋巴管內(nèi)癌栓及受侵犯神經(jīng)的癌細(xì)胞也有Prox-1表達，提示Prox-1可能促進胃癌的轉(zhuǎn)移和擴散。Park等[20]的體外研究表明，Prox-1敲除后可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖、減少淋巴管生成和抑制EMT等過程，提示Prox-1通過誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞增殖和淋巴管生成對胃癌的進展起促進作用。綜上，Prox-1在胃癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，尤其是與淋巴管新生和淋巴道轉(zhuǎn)移有關(guān)，之后需開展更多關(guān)于Prox-1與腫瘤方面的研究，以證實Prox-1的功能及促淋巴轉(zhuǎn)移機制。

4 TPX2

Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2，TPX2)是一種嚴(yán)格受細(xì)胞周期調(diào)控的微管相關(guān)蛋白，在有絲分裂紡錘體的形成過程中發(fā)揮重要作用。TPX2表達于細(xì)胞核中，主要出現(xiàn)在細(xì)胞周期的S期和G2期[21]。研究表明，TPX2在胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌等多種腫瘤組織中過表達[21～24]，導(dǎo)致細(xì)胞中心體異常擴增、異倍體形成以及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，促進腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[25]。

Wei等[22]的研究表明，60.8%(129例)結(jié)腸癌中存在TPX2過表達，并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，體內(nèi)外實驗均表明TPX2表達下調(diào)可通過阻斷PI3K/AKT途徑抑制細(xì)胞增殖及腫瘤發(fā)生，并下調(diào)MMP-2表達，降低癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。在肝癌細(xì)胞系研究中也得出類似的結(jié)論[23]。Liang等[26]的研究表明TPX2在胃癌組織中過表達，并通過體外實驗進一步證明TPX2敲除后降低細(xì)胞活力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，明顯降低腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力，使cyclin B1、cdk4、E-cadherin等基因表達上調(diào)，而cyclin D1、cdk2、N-cadherin、MMP-2、MMP-9等基因表達下調(diào)，提示TPX2可能通過促進EMT參與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。Tomii等[27]的免疫組化染色顯示，290例胃癌患者中123例(42.4%)存在TPX2過表達，并且TPX2的高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移范圍、腫瘤分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.001)，TPX2高表達者生存率明顯降低，提示TPX2促進胃癌的進展和轉(zhuǎn)移，也是判斷預(yù)后的重要標(biāo)志物。

5 其他分子標(biāo)志物

Zhao等[28,29]的研究表明，腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2(tumor-associated calcium signal transducers 2，Trop2)在胃癌中表達升高，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后差有關(guān)，提示Trop2參與胃癌的進展和轉(zhuǎn)移，可能成為預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物之一。多能發(fā)育相關(guān)蛋白2(developmental pluripotency-associated protein 2，DPPA2)是一種與早期胚胎發(fā)育相關(guān)的蛋白，Shabestarian等[30]的研究顯示DPPA2在胃癌中高表達，并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P=0.012)，參與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，可能是胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的早期事件，DPPA2有望成為評估胃癌浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的新型標(biāo)志物之一。研究還觀察到很多與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)的分子標(biāo)志物，但具體的作用機制尚不明確，尚需進一步探索。

6 小結(jié)與展望

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌最主要的轉(zhuǎn)移方式，也是影響胃癌患者治療選擇和預(yù)后的重要因素。應(yīng)用高特異性和敏感性的分子標(biāo)記物可以幫助我們在胃癌早期階段準(zhǔn)確預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，從而選擇最佳的治療方式。針對特定的分子標(biāo)志物對胃癌進行靶向治療，將有助于改善預(yù)后，為胃癌的個體化治療開辟出新的途徑。近年新發(fā)現(xiàn)的與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的標(biāo)志物如CapG、TrkB、Prox-1、TPX2等有可能成為預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)，但其具體的作用機制尚不完全清楚，目前僅限于實驗研究，還未真正應(yīng)用于臨床。另外，幾種標(biāo)志物聯(lián)合檢測可能在一定程度上提高診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性和敏感性，目前關(guān)于這方面的研究較少，我們擬開展聯(lián)合上述幾種標(biāo)志物預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究，對臨床工作具有一定的指導(dǎo)意義。相信隨著人類的不斷探索和發(fā)展，會發(fā)現(xiàn)更多的能夠準(zhǔn)確預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物，有助于進一步闡明胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制。

1 Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015.CA Cancer J Clin,2016,66(2):115-132.

2 Chang YR,Han DS,Kong SH,et al.The value of palliative gastrectomy in gastric cancer with distant metastasis.Ann Surg Oncol,2012,19(4):1231-1239.

3 Wang YW,Zhu ML,Wang RF,et al.Predictable factors for lymph node metastasis in early gastric cancer analysis of clinicopathologic factors and biological markers.Tumour Biol,2016,37(7):8567-8578.

4 Kimura K,Ojima H,Kubota D,et al.Proteomic identification of the macrophage-capping protein as a protein contributing to the malignant features of hepatocellular carcinoma.J Proteomics,2013,78:362-373.

5 Morofuji N,Ojima H,Onaya H,et al.Macrophage-capping protein as a tissue biomarker for prediction of response to gemcitabine treatment and prognosis in cholangiocarcinoma.J Proteomics,2012,75(5):1577-1589.

6 Ichikawa H,Kanda T,Kosugi S,et al.Laser microdissection and two-dimensional difference gel electrophoresis reveal the role of a novel macrophage-capping protein in lymph node metastasis in gastric cancer.J Proteome Res,2013,12(8):3780-3791.

7 陳 茉，丁士剛，劉琳娜，等.胃腺癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的蛋白質(zhì)組學(xué)分析.中國微創(chuàng)外科雜志，2012，12(4)：359-363.

8 呂旻樺，梁 博，徐康保，等.胃癌組織中CapG蛋白的表達及其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2016，32(12)：1329-1333.

9 Sun B,Hu C,Yang Z,et al.Midkine promotes hepatocellular carcinoma metastasis by elevating anoikis resistance of circulating tumor cells.Oncotarget,2017,8(20):32523-32535.

10 Dawson H,Grundmann S,Koelzer VH,et al.Tyrosine kinase receptor B (TrkB) expression in colorectal cancers highlights anoikis resistance as a survival mechanism of tumour budding cells.Histopathology,2015,66(5):715-725.

11 Okugawa Y,Tanaka K,Inoue Y,et al.Brain-derived neurotrophic factor/tropomyosin-related kinase B pathway in gastric cancer.Br J Cancer,2013,108(1):121-130.

12 Tanaka K,Shimura T,Kitajima T,et al.Tropomyosin-related receptor kinase B at the invasive front and tumour cell dedifferentiation in gastric cancer.Br J Cancer,2014,110(12):2923-2934.

13 Chen B,Liang Y,He Z,et al.Autocrine activity of BDNF induced by the STAT3 signaling pathway causes prolonged TrkB activation and promotes human non-small-cell lung cancer proliferation.Sci Rep,2016,6:30404.

14 趙梅莘，丁士剛，劉琳娜，等.術(shù)前胃鏡下胃黏膜活檢組織TrkB、TRIM29表達對胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測價值.中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92(6)：376-379.

15 Fujikawa H,Tanaka K,Toiyama Y,et al.High TrkB expression levels are associated with poor prognosis and EMT induction in colorectal cancer cells.J Gastroenterol,2012,47(7):775-784.

16 Elsir T,Smits A,Lindstrom MS,et al.Transcription factor PROX1: its role in development and cancer.Cancer Metastasis Rev,2012,31(3-4):793-805.

17 Park YL,Myung E,Park SY,et al.Impact of prospero homeobox-1 on tumor cell behavior and prognosis in colorectal cancer.Am J Cancer Res,2015,5(11):3286-3300.

18 魏軍成，羅丹楓，馬 丁.乳腺癌組織中LYVE-1和PROX-1的表達及臨床意義.華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2014,43(4)：431-433,440.

19 Taban O,Cimpean AM,Raica M,et al.PROX1 expression in gastric cancer: from hypothesis to evidence.Anticancer Res,2014,34(7):3439-3446.

20 Park KJ,Cho SB,Park YL,et al.Prospero homeobox 1 mediates the progression of gastric cancer by inducing tumor cell proliferation and lymphangiogenesis.Gastric Cancer,2017,20(1):104-115.

21 Shao C,Duan C,Wang J,et al.Expression of microtubule-associated protein TPX2 in human gastric carcinoma and its prognostic significance.Cancer Cell Int,2016,16:79.

22 Wei P,Zhang N,Xu Y,et al.TPX2 is a novel prognostic marker for the growth and metastasis of colon cancer.J Transl Med,2013,11:313.

23 Liu Q,Yang P,Tu K,et al.TPX2 knockdown suppressed hepatocellular carcinoma cell invasion via inactivating AKT signaling and inhibiting MMP2 and MMP9 expression.Chin J Cancer Res,2014,26(4):410-417.

24 Miwa T,Kokuryo T,Yokoyama Y,et al.Therapeutic potential of targeting protein for Xklp2 silencing for pancreatic cancer.Cancer Med,2015,4(7):1091-1100.

25 Zorba A,Buosi V,Kutter S,et al.Molecular mechanism of Aurora A kinase autophosphorylation and its allosteric activation by TPX2.Elife,2014,3:e2667.

26 Liang B,Zheng W,Fang L,et al.Overexpressed targeting protein for Xklp2 (TPX2) serves as a promising prognostic marker and therapeutic target for gastric cancer.Cancer Biol Ther,2016,17(8):824-832.

27 Tomii C,Inokuchi M,Takagi Y,et al.TPX2 expression is associated with poor survival in gastric cancer.World J Surg Oncol,2017,15(1):14.

28 Zhao W,Zhu H,Zhang S,et al.Trop2 is overexpressed in gastric cancer and predicts poor prognosis.Oncotarget,2016,7(5):6136-6145.

29 Zhao W,Ding G,Wen J,et al.Correlation between Trop2 and amphiregulin coexpression and overall survival in gastric cancer.Cancer Med,2017，6(5)：994-1001.

30 Shabestarian H,Ghodsi M,Mallak AJ,et al.DPPA2 protein expression is associated with gastric cancer metastasis.Asian Pac J Cancer Prev,2015,16(18):8461-8465.